一种用于检测新型冠状病毒（2019-nCoV）的CRISPR核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测新型冠状病毒(2019‑nCoV)的CRISPR核酸检测试剂盒。本发明专利技术提供一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，包括用于检测新型冠状病毒的CRISPR‑Cas13a系统和与其配套使用的侧向流试纸；a1)单独包装的crRNA和LwCas13a蛋白；a2)报告RNA，其由20个U组成；a3)用于扩增待测样本靶点序列的RT‑RAA扩增引物，且所述RT‑RAA扩增引物中的一条引物的5'末端具有被T7 RNA聚合酶识别的区域；本发明专利技术的CRISPR核酸检测试纸可通过CRISPR‑Cas13a系统实现对新型冠状病毒核酸的高灵敏、高特异、便捷检测，灵敏度达到10copies/test。

A novel coronavirus (2019-nCoV) detection kit for CRISPR nucleic acid

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的CRISPR核酸检测试剂盒
本专利技术涉及一种用于检测新型冠状病毒(2019-nCoV)的CRISPR核酸检测试剂盒，属于分子诊断

技术介绍
新型冠状病毒肺炎(CoronaVirusDisease2019，COVID-19)是由新型冠状病毒(2019-nCoV)引起、导致人类发生急性感染的乙类传染病，具有传染性强、临床救治能力薄弱、无批准上市的特效药物及无疫苗预防的特点。新型冠状病毒的检测技术包括病毒基因测序、IgM和IgG抗体的检测、荧光定量PCR、恒温扩增芯片核酸检测技术等。然而现有检测技术均存在一定的不足，胶体金法简单便携，但灵敏度不足；包括LAMP、RPA在内的恒温扩增法灵敏度很高，但在操作过程中易污染；荧光定量PCR法和病毒基因测序稳定、可靠、具有一定的灵敏度，但样本处理复杂，且对仪器要求高。2017年4月，美国研究人员建立了一种灵敏度达到埃摩级(单拷贝)，特异性达到单碱基的核酸检测技术——基于CRISPR-Cas13a的核酸检测平台SHERLOCK(Speci本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，包括用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统和与其配套使用的侧向流试纸；/n所述用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统包括如下a1)-a3)；/na1)单独包装的crRNA和LwCas13a蛋白，或crRNA和LwCas13a蛋白复合体；/n所述crRNA的靶点序列为序列1；/na2)报告RNA，其由20个U组成，且所述报告RNA的序列两端分别标记FAM和生物素；/na3)用于扩增待测样本靶点序列的RT-RAA扩增引物，且所述RT-RAA扩增引物中的一条引物的5'末端具有被T7 RNA聚合酶识别的区域；/n所述侧向流试纸依次包括样...

【技术特征摘要】
1.一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，包括用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统和与其配套使用的侧向流试纸；
所述用于检测新型冠状病毒的CRISPR-Cas13a系统包括如下a1)-a3)；
a1)单独包装的crRNA和LwCas13a蛋白，或crRNA和LwCas13a蛋白复合体；
所述crRNA的靶点序列为序列1；
a2)报告RNA，其由20个U组成，且所述报告RNA的序列两端分别标记FAM和生物素；
a3)用于扩增待测样本靶点序列的RT-RAA扩增引物，且所述RT-RAA扩增引物中的一条引物的5'末端具有被T7RNA聚合酶识别的区域；
所述侧向流试纸依次包括样品板、与纳米金抗FITC抗体、链亲和素线、抗体捕获线和吸收板；
所述抗体捕获线包被的抗体为羊抗兔IgG。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述crRNA的核苷酸序列为序列2。


3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述RT-RAA扩增引物由序列4所示的单链DNA分子和序列5所示的单链DNA分子组成。


4.根据权利要求1-3中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述CRISPR-Cas13a系统还包括a4)RNA聚合酶。


5.根据权利要求1-4中任一所述的试剂盒，其特征在于：
所述试剂盒还包括记载如下检测方法的可读载体：
所述检测方法包括如下步骤:
b1、提取待测样本的核酸，所述RT-RAA扩增所需引物对待测样品核酸进行RT-RAA扩增，得到RT-RAA扩增产物；
b2、将所述RT-RAA扩增产物、所述crRNA、所述LwCas13a蛋白在含有所述报告RNA的体系中反应，得到反应产物；
b3、将所述反应产物加入所述试纸条的样品板的加样孔中，静置观察；<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李浩，寇志华，孙岩松，周育森，董雪，王彦贺，何雷，赵忠鹏，孙世慧，谷宏婧，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11