一种通过牛血清原料预混合降低补体水平和蛋白析出的方法技术

本发明专利技术涉及牛血清技术领域，本发明专利技术通过提前将牛血清低温充分混合，提升了牛血清产品的品质。本发明专利技术创新的采用了牛血清原料低温充分预混合工艺，解决了牛血清补体系统消除需要用56℃，30分钟处理对牛血清有效成份破坏太剧烈的问题。用牛血清预混合工艺，将不同血型的牛血清充分混合时，会有蛋白析出，如果只是在最后过滤前混合，反应时间不够充分，最终产品的蛋白析出现象比较常见，采用本工艺制备的牛血清能够有效避免这类的蛋白析出。本发明专利技术还有一个优势，原料充分预混合后再进行检测项目的初步筛选，跟最终产品的检测项目对应性更好。

A method of reducing complement level and protein precipitation by premixing bovine serum

【技术实现步骤摘要】
一种通过牛血清原料预混合降低补体水平和蛋白析出的方法
本专利技术涉及血清
，具体地，涉及一种牛血清原料低温充分预混合的方法。本专利技术通过提前将牛血清低温充分混合，降低血清中补体系统的负面影响；解决了牛血清最终产品中容易出现的蛋白析出问题；同时，预混合工艺还能将原料预混合后再进行检测项目的初步筛选，这种原料跟最终产品的检测项目对应性更好。
技术介绍
血液中包含血浆和血细胞，血液去除血细胞和纤维蛋白后即为血清，血清的主要作用是运载血细胞，运输维持人体生命活动所需的物质和体内产生的废物等，血清相当于结缔组织的细胞间质，血清是血液的重要组成部分，呈淡黄色液体(因含有胆红素)，血清的化学成分中，水分占90％至92％，其他10％以溶质血浆蛋白为主，新生牛血清约有3.5-5％的蛋白。血清中还有离子、营养素、酶类、激素类、胆固醇和其他重要组成部分。牛血清是生物医药生产、生命科学细胞研究和诊断试剂中一个重要的原材料。牛血清的稳定生产、供应涉及到生物医药生产的安全、稳定；支持了生命科学细胞研究、诊断试剂结果的重现性。细胞培养体系包括细胞、牛血清、培养基、培养方式，牛血清是细胞培养体系中的重要组成部分。生物医药生产及生命科学中培养的细胞大部分是人源、鼠源细胞，这些细胞用带牛血清的培养基培养，牛血清中的补体成份会对这些外源细胞造成损伤，降低牛血清中的补体作用就是牛血清工艺中重要的一步。降低血清中补体常用的做法是用56℃，30分钟热处理，该处理方式剧烈，会导致血清中贴壁成份和细胞培养维持成份的丧失，影响细胞贴壁。同时血清中的维持因子也会大大降低，对细胞后期维持造成影响。这样热处理去补体生生产的血清通不过要求严格的细胞培养检测，常常被判定为不合格产品。因此，本领域迫切需要一种降低牛血清中的补体作用同时不导致血清中贴壁成份和细胞培养维持成份的丧失的解决方案。此外，牛血清在使用过程中，经常会有蛋白析出。牛的血型通常分类有9个血型系，49种抗原，在不同来源的牛血清混合时，肉眼可见蛋白析出的现象。这个现象中，不同牛血清中不同类型的补体、抗体系统相互反应起了重要作用。因此，本领域也迫切需要一种解决后期过滤、分装和冻存解冻使用时出现蛋白析出问题的方案。本专利技术人惊喜的发现，通过牛血清原料低温充分预混合可以同时有效的解决上述问题，这是本领域未曾发现及实施的。
技术实现思路
本专利技术旨在设计一种牛血清新的低温充分预混合工艺。本专利技术的目的在于通过牛血清的充分预混合，降低牛血清中补体成份，同时减少成品蛋白析出。本专利技术的工艺还旨在能够增加血清生产过程中，原料和成品血清的对应性。在第一个方面，本专利技术提供了一种降低牛血清中补体水平的方法，其特征在于：该方法包括充分预混合牛血清原料。在一个优选实施方案中，所述牛血清原料预混合为在10-15℃的低温充分混合2-3小时，及在10-15℃的低温放置12-16小时。在一个更优选实施方案中，所述牛血清原料预混合为在12℃的低温充分混合2.5小时，及在12℃的低温放置14小时。在一个实施方案中，牛血清原料通过如下获得：刚出生的新生小牛通过六联袋封闭动脉采血，血液进入六联袋后，凝血，4000rpm离心30分钟，通过虹吸取上清，得到牛血清原料。在一个实施方案中，所得到的牛血清原料进行病毒、抗体指标的筛选。优先地，所述病毒为BVDV、噬菌体等；所述抗体为口蹄疫抗体、IgG等。在第二个方面，本专利技术提供了一种防止牛血清后期血清出现蛋白析出或聚合沉淀的方法，其特征在于：所述方法包括充分预混合牛血清原料。在一个优选实施方案中，所述牛血清原料预混合为在10-15℃的低温充分混合2-3小时，及在10-15℃的低温放置12-16小时。在一个更优选实施方案中，所述牛血清原料预混合为在12℃的低温充分混合2.5小时，及在12℃的低温放置14小时。在一个实施方案中，牛血清原料通过如下获得：刚出生的新生小牛通过六联袋封闭动脉采血，血液进入六联袋后，凝血，4000rpm离心30分钟，通过虹吸取上清，得到牛血清原料。在一个实施方案中，所得到的牛血清原料进行病毒、抗体指标的筛选。优先地，所述病毒为BVDV、噬菌体等；所述抗体为口蹄疫抗体、IgG等。在第三个方面，本专利技术提供了一种降低牛血清中补体水平及防止牛血清后期血清出现蛋白析出或聚合沉淀的方法，其特征在于：所述方法包括充分预混合牛血清原料。在一个优选实施方案中，所述牛血清原料预混合为在10-15℃的低温充分混合2-3小时，及在10-15℃的低温放置12-16小时。在一个更优选实施方案中，所述牛血清原料预混合为在12℃的低温充分混合2.5小时，及在12℃的低温放置14小时。在一个实施方案中，牛血清原料通过如下获得：刚出生的新生小牛通过六联袋封闭动脉采血，血液进入六联袋后，凝血，4000rpm离心30分钟，通过虹吸取上清，得到牛血清原料。在一个实施方案中，所得到的牛血清原料进行病毒、抗体指标的筛选。优先地，所述病毒为BVDV、噬菌体等；所述抗体为口蹄疫抗体、IgG等。优选地，牛血清生产原料预混合后进行检测跟后期产品对应性更好。具体的，新生小牛通过六联袋封闭采血，凝血后离心，上清为牛血清。每袋牛血清标记好来源、采血时间和操作人员。送到生产工厂后，取出采血管(已申请技术专利)中牛血清进行质检，先进行病毒、抗体等多个指标的筛选。筛选合格的原料，通常用100头新生牛的原料血清进行预混合，低温充分混合后，原料低温(10-15℃)放置过夜。预混合后的血清，取部分血清过滤质检。本专利技术的有益效果：(1)牛血清低温充分预混合工艺，能够使不同血型的牛血清充分反应，有效的降低血清中补体活性。最终牛血清低温充分预混合工艺的成品比没有经过该工艺预混合的成品补体活性大大降低；本专利技术工艺生产的牛血清中补体系统(后期还有辐照进一步降低补体系统)对外源的细胞培养没有影响。(2)牛血清预混合工艺使不同牛血清中不同类型的补体、抗体系统相互反应的作用和时间更充分，在后期过滤、分装和冻存解冻使用时没有蛋白析出现象。牛血清没有蛋白析出，利于细胞培养的观察。没有蛋白析出的牛血清用做诊断中试剂盒里的保护剂或封闭液，对反应或结果读取影响小。(3)牛血清经过充分预混合后还有一个优点，质检时，预混合原料跟成品的对应性更好。经过原料和预混合原料初筛后能更好的保障客户血清的使用。附图说明图1为蛋白析出情况，其中，A图为混合后的蛋白析出情况；B图为混合挡掉沉淀后的蛋白析出情况。图2为过滤后成品解冻后的情况，其中，左边是低温充分预混合后过滤的成品，右边是快速混合后过滤的成品。图3为CHO细胞培养至第三代48小时：A图为小样，细胞数量：116×104个/ml，细胞活率：99.58％。B图为成品，细胞数量：118×104个/ml，细胞活率：99.5％。图4为293T细胞培养至第三代48小时：A图为小样，细胞数量：132×104个/ml，细胞活率：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种降低牛血清中补体水平的方法，其特征在于：所述方法包括充分预混合牛血清原料。/n

【技术特征摘要】
1.一种降低牛血清中补体水平的方法，其特征在于：所述方法包括充分预混合牛血清原料。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述牛血清原料充分预混合为在10-15℃的低温充分混合2-3小时，及在10-15℃的低温放置12-16小时。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述牛血清原料充分预混合为在12℃的低温充分混合2.5小时，及在12℃的低温放置14小时。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：牛血清原料通过如下获得：刚出生的新生小牛通过六联袋封闭动脉采血，血液进入六联袋后，凝血，4000rpm离心30分钟，通过虹吸取上清，得到牛血清原料。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所得到的牛血清原料进行BVDV、噬菌体、口蹄疫抗体、IgG指...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈亮，任志斌，李晔，陈强，王元，
申请(专利权)人：兰州荣晔生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：甘肃;62