一种免疫激活多肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种免疫激活多肽及其应用，属于生物医学技术领域。本发明专利技术所述免疫激活多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术所述免疫激活多肽能够与CD14竞争性结合转铁蛋白从而阻碍免疫负调控因子转铁蛋白的负调控作用，是一种潜在的多肽类免疫激活剂，对病原微生物的清除具有辅助作用。

An immune activating peptide and its application

【技术实现步骤摘要】
一种免疫激活多肽及其应用
本专利技术涉及生物医学
，具体涉及一种免疫激活多肽及其应用。
技术介绍
Toll样受体(Toll-likereceptors，TLRs)是机体抵抗感染的一道重要屏障，其能够识别各种不同的疾病相关分子模式(PAMP)并引起促炎反应继而介导宿主免疫防御。TLR4是识别细菌的重要的TLRs家族成员，主要识别革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)从而激活NF-κB信号通路进而激活宿主免疫反应。为了防止产生过度炎症，避免炎症对机体的损害，TLR4信号通路也受着严格的负调控。例如，胞外的RP105和胞内的SIGIRR、ST2L、MyD88s、IRAK-M以及SOCS-1等都是已经报道的TLR4通路负调控因子。机体在调控免疫系统防止免疫过度的情况发生的同时也要激活免疫系统并彻底清除入侵机体的病原微生物。如果外界病原微生物不能及时的清除将引发病理性炎症等一系列严重的后果。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种免疫激活多肽及其应用。本专利技术所述免疫激活多肽能够与CD14竞争性结合转铁蛋白从而阻碍免疫负调控因子转铁蛋白的负调控作用，是一种潜在的多肽类免疫激活剂，对病原微生物的清除具有辅助作用。本专利技术提供了一种免疫激活多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备Toll样受体4信号通路的免疫激活剂中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备抑制转铁蛋白的药物中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备通过竞争性结合转铁蛋白实现Toll样受体4信号通路的免疫激活的药物中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备通过抑制转铁蛋白，实现对LPS诱导的炎症因子分泌的抑制的药物中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备通过抑制转铁蛋白，实现LPS诱导的肝组织损伤和细胞凋亡的抑制的药物中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备病原微生物清除用的药物中的应用。本专利技术提供了一种免疫激活多肽。本专利技术所述免疫激活多肽能够与CD14竞争性结合转铁蛋白从而阻碍免疫负调控因子转铁蛋白的负调控作用(即免疫激活多肽能够与脂多糖受体CD14竞争性结合转铁蛋白从而阻碍转铁蛋白与CD14的结合并进一步抑制转铁蛋白对TLR4信号通路的抑制作用)，是一种潜在的多肽类免疫激活剂，对病原微生物的清除具有辅助作用。本专利技术所述免疫激活多肽还具有结构简单、人工合成方便等优势。附图说明图1为本专利技术提供的免疫激活多肽CD14N与TLR4免疫负调控因子转铁蛋白的相互作用；图2为本专利技术提供的免疫激活多肽CD14N对转铁蛋白抑制脂多糖LPS诱导的TLR4信号通路炎症因子的影响；图3为本专利技术提供的免疫激活多肽CD14N对转铁蛋白抑制脂多糖LPS诱导的TLR4信号通路炎症的影响；图4为本专利技术提供的免疫激活多肽CD14N对转铁蛋白抑制脂多糖LPS诱导的TLR4信号通路炎症的影响；通过TUNEL染色验证CD14N对转铁蛋白抑制脂多糖LPS诱导的肝组织细胞凋亡的影响；上述各图表示对8只小鼠的统计结果；*p<0.5，**p<0.01。具体实施方式本专利技术提供了一种免疫激活多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术免疫激活多肽(CD14N)是合成的单链多肽，分子量为4486.84道尔顿，氨基酸序列为：ELDDEDFRCVCNFSEPQPDWSEAFQCVSAVEVEIHAGGLN(SEQIDNO.1)。本专利技术发现转铁蛋白作用于TLR4通路的CD14分子并负调控TLR4信号通路。本专利技术提供的免疫激活多肽能够与CD14竞争性结合转铁蛋白并阻碍免疫负调控因子转铁蛋白的负调控作用，是一种潜在的多肽类免疫激活剂。本专利技术优选依据免疫激活多肽(CD14N)的氨基酸序列，用自动多肽合成仪合成其全序列。通过HPLC反向柱层析脱盐纯化，并确定其纯度大于95％，复性后，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定其分子量。合成的抗凝多肽溶于生理盐水，用于活性测定。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备Toll样受体4信号通路的免疫激活剂中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备抑制转铁蛋白的药物中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备通过竞争性结合转铁蛋白实现Toll样受体4信号通路的免疫激活的药物中的应用。本专利技术所述免疫激活多肽制备得到的药物能通过竞争性结合转铁蛋白并阻碍负调控因子的负调控作用实现Toll样受体4信号通路的免疫激活。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备通过抑制转铁蛋白，实现对LPS诱导的炎症因子分泌的抑制的药物中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备通过抑制转铁蛋白，实现LPS诱导的肝组织损伤和细胞凋亡的抑制的药物中的应用。本专利技术还提供了上述技术方案所述免疫激活多肽在制备病原微生物清除用的药物中的应用。下面结合具体实施例对本专利技术所述的一种免疫激活多肽及其应用做进一步详细的介绍，本专利技术的技术方案包括但不限于以下实施例。实施例1免疫激活多肽CD14N的合成用Fmoc-Lys(Boc)-WangResin进行合成。1.树脂溶胀称取替代度为0.3的Fmoc-Leu-WangResin5g，倒入反应柱中，加入50mlDCM溶胀，浸泡30min。2.去保护抽干反应柱中DCM，加入20％的哌啶/DMF溶液脱除Fmoc，氮气鼓动30min，抽干，以DMF洗涤5遍，抽干。3.缩合反应采用TBTU/DIEA激活剂组合进行缩合，以3倍投料量计算称取的TBTU及连接氨基酸，用50mlDMF溶解加入反应柱中，加入DIEA(1.55ml)，氮气鼓动，反应1小时。4.检测、洗涤用取样管从反应柱中取少许树脂，倒入小试管中，DMF洗涤一遍，倒掉DMF，分别加入A、B、C液各3滴(A液：茚三酮酒精溶液，B液：20％酒精80％苯酚混合溶液，C液：重蒸吡啶)，放入加热器中120℃加热3分钟，取出观察溶液及树脂颜色，溶液黄树脂无色或淡黄，表明缩合反应完全，停止反应柱中反应，抽干，DMF洗涤3遍。5.复投如检测出树脂颜色为其他颜色，例绿色蓝色紫色等，则表明反应未完全，同样抽干洗涤3遍，称取当前反应同样的量投入反应柱中重新反应，直至检测反应完全为止。6.继续缩合后续氨基酸的连接重复2-5步骤，不同的氨基酸称取的量用同样的算法计算称取，TBTU/DIEA的量保持不变。7.收缩最后一个氨基酸连接完成后，继续重复2步骤，然后DCM洗涤3遍，甲醇洗涤3遍，抽干，将树脂倒出，烘灯烘干装入500ml烧杯中。8.切割向烧杯中加入100ml切割液(比例为TFA/苯甲硫醚/苯酚/ED本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫激活多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种免疫激活多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.权利要求1所述免疫激活多肽在制备Toll样受体4信号通路的免疫激活剂中的应用。


3.权利要求1所述免疫激活多肽在制备抑制转铁蛋白的药物中的应用。


4.权利要求1所述免疫激活多肽在制备通过竞争性结合转铁蛋白实现Toll样受体4信号通路的免疫...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖仞，唐小芃，方鸣谦，程若梅，
申请(专利权)人：中国科学院昆明动物研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53