基于双基因检测非洲猪瘟病毒的PCR引物组、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术涉及病毒检测技术领域，具体涉及基于双基因检测非洲猪瘟病毒的PCR引物组、试剂盒及应用。本发明专利技术中的引物组及方法的检测特异性高、重复性好、灵敏度高，同时具有操作简便，检测时间短等优势，可有效地降低假阳性结果的出现，降低阳性对照对检测环境的影响，在非洲猪瘟病毒的快速检测中具有较高的应用价值。

PCR primer set, kit and application for detection of African swine fever virus based on two genes

【技术实现步骤摘要】
基于双基因检测非洲猪瘟病毒的PCR引物组、试剂盒及应用
本专利技术涉及病毒检测
，具体涉及基于双基因检测非洲猪瘟病毒的PCR引物组、试剂盒及应用。
技术介绍
非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)引起的一种烈性传染病，世界动物卫生组织将其列为A类疫，我国将其列为一类动物疫病。ASF不传染人，感染猪后病死率可达100％。ASFV感染猪后，其临床症状和病理。变化与经典猪瘟非常相似，极易将两种病混淆。主要表现为高热(猪体温一般高达40.5～42℃)，皮肤发绀有出血点，甚至出现大量无症状死亡的猪只，其中脾脏异常肿大为其典型症状。猪是ASFV自然感染的唯一家畜，野猪也易感，野猪感染后的临床症状和病理变化与家猪类似。钝缘蜱是ASFV的自然宿主。被ASFV污染的猪肉制品(如火腿、腌肉、风干肉等)、饲料、水源、运输车、餐食剩余垃圾等制成的泔水，发病猪，带毒猪等都是ASFV的传染源。目前，全世界尚未有有效的药物和疫苗可以防控ASF的感染。对于尚无该疫情本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基于B646L和E183L双基因检测非洲猪瘟病毒的PCR引物组，其特征在于，包含2对特异性引物，所述特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-4所示。/n

【技术特征摘要】
1.基于B646L和E183L双基因检测非洲猪瘟病毒的PCR引物组，其特征在于，包含2对特异性引物，所述特异性引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1-4所示。


2.与权利要求1所述的PCR引物组配套使用的探针组，其特征在于，包含2条探针，所述探针的核苷酸序列如SEQIDNO.5-6所示。


3.根据权利要求2所述的探针组，其特征在于，所述探针的5’端标记的荧光基团为选自FAM、HEX、CY5、TET、JOE、CY3、TAMRA、ROX中的任一种；所述探针的3’端标记的淬灭基团为选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl中的任一种。


4.权利要求1所述的PCR引物组或权利要求2或3所述的探针组在制备用于非洲猪瘟病毒检测的试剂盒中的应用。


5.一种用于检测非洲猪瘟病毒的检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的PCR引物组；
优选地，所述检测试剂盒还包含权利要求2或3所述的探针组。


6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包含PCR反应液和/或对照品；
优选所述对照品为含有特定DNA片段的质粒，所述特定DNA片段的核苷酸序列中含有检测B64L6基因的上游引物、探针的核苷酸序列及检测E183L基因的下游引物翻转、互补后的核苷酸序列；或者，含有检测E183L基因的上游引物、探针的核苷酸序列及检测B64L6基因的下游引物翻转、互补后的核苷酸序列。


7.根据权利要求5或6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒在工作时的反应程序如下：95℃、30s；95℃、5s，60℃、20s，采集荧光信号，35个循环；
所述检测试剂盒在工作时的反应体系如下：
待测样品的20μL反应体系：2×PCR反应液10μL，B646L基因引物探针混合液1.5μL，E183L基因引物探针混合液1.5μL，待测样品7μL；
阳性对照的20μL反应体系：2×PCR反应液10μL，B646L基因引物探针混合液1.5μL，E183L基因引物探针混合液1.5μL，对照品7μL；
阴性对照的20μL反应体系：2×PCR反应液10μL，B646L基因引物探针混合液或者E183L基因引物探针混合液1.5μL，对照品8.5μL；
其中，所述B646L基因引物探针混合液包含10μMSEQIDNO.1所示的引物、10μMSEQIDNO.2所示的引物和5μMSEQIDNO.5所示的探针；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王金良，沈志强，陈金龙，于新友，董林，胡绍良，
申请(专利权)人：山东省滨州畜牧兽医研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37