本发明专利技术涉及病毒分子检验领域，具体而言，提供了一种用于血液筛查的核酸组合物和试剂盒。本发明专利技术提供的血液筛查中使用的核酸组合物，包括检测HBV、HCV、HIV以及2019新型冠状病毒的核酸组合物。发明专利技术人经研究证明本发明专利技术提供的核酸组合物特异性强，灵敏度高，抗干扰强，可实现血液筛查中HBV/HCV/HIV‑1/HIV‑2/SARS‑Cov‑2的快速检出。针对HIV‑1及HBV基因组均进行了特异性的双区段核酸组合设计，大幅度降低因病毒基因突变导致的漏检情况，极大地提高了检出率，降低输血感染的残余风险，针对SARS‑Cov‑2基因组进行了筛选，明显降低了对组合中的HBV、HCV检出的干扰。本发明专利技术提供的含有上述核酸组合的血液筛查检测试剂盒，具有上述优势，检出率高、特异性好及抗干扰强。
Nucleic acid composition and kit for blood screening
【技术实现步骤摘要】
用于血液筛查的核酸组合物和试剂盒
本专利技术涉及病毒分子检测领域，具体而言，涉及一种用于血液筛查的核酸组合物及包括该核酸组合物的试剂盒。
技术介绍
随着我国人民生活水平提高和医疗改革的深化，百姓看病求医的需求不断增加，随之而来的是对于临床用血需求的迅速增加。血液可以挽救病人的生命，但同时输血或血液制品又有传播疾病的危险。世界卫生组织（WHO）已正式将血液安全列为全球重点卫生工作之一。目前血液安全的检验主要是采用免疫学和临床生化的检验方法，酶联免疫试剂检测的是人体受病毒感染后产生的抗体，窗口期较长（从人体受病毒感染到产生诊断标志物的这段时间被称为“窗口期”）；而且酶联免试测试针对病毒变异株可能会出现假阴性，对免疫水平低下感染者可能漏检，这些都是输血安全的隐患，不是简单通过改良免疫学技术就可以解决的。PCR作为一种高灵敏、高度简便、自动化程度高的新技术，在各个领域中都广泛的应用起来，随着技术的发展，逐渐成为了核酸检测的金标准，在血液筛查中也是如此。实现高特异性、高灵敏度、高自动化的病毒分子检测流程是现阶段主要的市场需求，以实现在确保输血安全的同时，不增加因为特异性差导致的血液报废，因此，精确合理的引物探针设计一直是血液筛查分子诊断试剂研发的核心重点。乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）、人类免疫缺陷病毒（HIV1、HIV2）为熟知的可通过血液传播的病毒，2019新型冠状病毒（SARS-Cov-2）目前虽未有明确的血液传播证据，但从可引起病毒血症的病毒传播规律分析，其存在通过血液传播的风险。从公开的报道来看，尚未有能够同时检测HBV/HCV/HIV-1/HIV-2/SARS-Cov-2的多重核酸检测试剂盒。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种可以同时检测血液中乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒（1+2型）以及2019新型冠状病毒的核酸组合物，以提高筛查经血液传播疾病分子检测试剂的灵敏度、特异性和抗干扰能力。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种用于血液筛查的核酸组合物，所述核酸组合物包括以下引物对及其对应的探针：（a）：第一引物组如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示，第一探针的核酸序列如SEQIDNO.3所示；第二引物组如SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示，第二探针的核酸序列如SEQIDNO.6所示；（b）：第三引物组如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示，第三探针的核酸序列如SEQIDNO.9所示；（c）：第四引物组如SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示，第四探针的核酸序列如SEQIDNO.12所示；第五引物组如SEQIDNO.13和SEQIDNO.14所示，第五探针的核酸序列如SEQIDNO.15所示；第六引物组如SEQIDNO.16和SEQIDNO.17所示，第六探针的核酸序列如SEQIDNO.18所示；（d）：第八引物组如SEQIDNO.20和SEQIDNO.21所示，第八探针的核酸序列如SEQIDNO.22所示。本专利技术提供的第一核酸组合（第一引物组和第一探针）和第二核酸组合（第二引物组和第二探针）是根据乙型肝炎病毒（HBV）保守且特异的两个基因片段（S基因片段和C基因片段）进行特异设计而成；第一核酸组合可特异性检测HBV的S基因片段，第二核酸组合可以特异性检测HBV的C基因片段，采用双区段分别进行特异性检测可有效降低因病毒基因突变导致的漏检风险；第三核酸组合（第三引物组和第三探针）根据丙型肝炎病毒保守特异的基因片段（5′UTR基因片段）设计而成；第四核酸组合（第四引物组和第四探针）和第五核酸组合（第五引物组和第五探针）根据人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）保守且特异的两个基因片段（LTR基因片段和POL基因片段）进行特异设计而成，采用双区段分别进行特异性检测可有效降低因病毒基因突变导致的漏检风险；第四核酸组合可特异性检测HIV-1的POL基因片段，第五核酸组合可特异性检测HIV-1的LTR基因片段；第六核酸组合（第六引物组和第六探针）根据人类免疫缺陷病毒2型（HIV-2）保守且特异的POL基因片段设计而成；第八核酸组合（第八引物组和第八探针）针对2019新型冠状病毒（SARS-Cov-2）保守且特异的ORF1ab基因片段设计而成，并通过筛选明显降低了对组合中的HBV、HCV检出的干扰。该核酸组合物与多种血液传播病原体无交叉反应，仅能检出相应病毒，且几种病毒的最低检出浓度分别为HBV为2.5IU/mL、HCV为10IU/mL、HIV-1为50IU/mL、HIV-2为50IU/mL以及SARS-Cov-2为20copies/mL。可选地，在本专利技术的一些实施案例中，所述核酸组合还包括第七探针核酸序列（SEQIDNO.19）；第七探针序列为针对内对照（植物基因）片段设计的特异性探针，检测提取和扩增的整个过程的有效性，且与其他核酸组合相互间没有干扰。通过选取非动物源性基因极大程度降低非特异性扩增，能够确保检测结果的可靠性。可选的是，所述探针均为自身淬灭探针。可选的是，所述自身淬灭探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团。可选的是，（a）、（b）、（c）和（d）中探针的5’端标记的所述荧光报告基团彼此不同。可选的是，所述荧光报告基团包括选自FAM、HEX、ROX、JOE、CY3、VIC、TET、TAXASRED、NED、ALEXA、TAMRA、Quasar705、CY5.5和CY5中的一种；所述荧光淬灭基团包括选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB和DABCYL中的任意一种。在优选的实施方式中，（a）中探针的5’端标记的荧光报告基团为FAM，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ1；（b）中探针的5’端标记的荧光报告基团为CY5，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ1；（c）中探针的5’端标记的荧光报告基团为HEX，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ1；（d）中探针的5’端标记的荧光报告基团为Quasar705，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ3。此外，第七探针的5’端标记的荧光报告基团为ROX，3’端标记的荧光淬灭基团为BHQ1。本专利技术的目的还在于提供一种用于血液筛查的试剂盒，所述试剂盒包括上述的核酸组合物。由此，可采用单一类型试剂盒即可同时检测多种类型的病毒，节约检测成本，采用上述核酸组合制成的试剂盒灵敏度高，同时对HBV、HIV-1采取双区段的方式，有效地降低了漏检风险。本专利技术的目的还在于提供一种非诊断目的检测血液样品中病毒的方法，所述方法利用上述用于血液筛查的试剂盒检测血液样品中的以下病毒中的至少之一：HBV、HCV、HIV-1、HIV-2和SARS-Cov-2。采用上述方法进行血液筛查，灵敏度高，特异性好，抗干扰能力强，相对于单检来说，可一次性检出多种可能存在血液中的病毒，降低了医护人员劳动强度和患者的成本。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于血液筛查的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物包括如下引物对及其对应探针：/n（a）：第一引物组如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，第一探针的核酸序列如SEQ IDNO.3所示；第二引物组如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，第二探针的核酸序列如SEQ IDNO.6所示；/n（b）：第三引物组如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，第三探针的核酸序列如SEQ IDNO.9所示；/n（c）：第四引物组如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示，第四探针的核酸序列如SEQ IDNO.12所示；第五引物组如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示，第五探针的核酸序列如SEQID NO.15所示；第六引物组如SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17所示，第六探针的核酸序列如SEQ ID NO.18所示；/n（d）：第八引物组如SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21所示，第八探针的核酸序列如SEQ IDNO.22所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于血液筛查的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物包括如下引物对及其对应探针：
（a）：第一引物组如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示，第一探针的核酸序列如SEQIDNO.3所示；第二引物组如SEQIDNO.4和SEQIDNO.5所示，第二探针的核酸序列如SEQIDNO.6所示；
（b）：第三引物组如SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示，第三探针的核酸序列如SEQIDNO.9所示；
（c）：第四引物组如SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示，第四探针的核酸序列如SEQIDNO.12所示；第五引物组如SEQIDNO.13和SEQIDNO.14所示，第五探针的核酸序列如SEQIDNO.15所示；第六引物组如SEQIDNO.16和SEQIDNO.17所示，第六探针的核酸序列如SEQIDNO.18所示；
（d）：第八引物组如SEQIDNO.20和SEQIDNO.21所示，第八探针的核酸序列如SEQIDNO.22所示。
2.根据权利要求1所述的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物还包括第七探针，所述第七探针序列如SEQIDNO.19所示。
3.根据权利要求1或2所述的核酸组合物，其特征在于，所述探针均为自身淬灭探针。
4.根据权利要求3所述的核酸组合物，其特征在于，所述自身淬灭探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团。
5.根据权利要求4所述的核酸组合物，其特征在于，（a）、（b）、（...
【专利技术属性】
技术研发人员：勾宏娜，吴燕，欧格，宋冰燕，邓京，林艳，
申请(专利权)人：珠海丽珠试剂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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