【技术实现步骤摘要】
一种环境样本非洲猪瘟病毒检测试剂盒及检测方法
本专利技术涉及一种环境样本非洲猪瘟病毒检测试剂盒及检测方法，属于生物
技术介绍
非洲猪瘟病毒防控一直是各国重点防控的疫病，无论是已成功根除非洲猪瘟的西班牙、巴西等国或仍在与非洲猪瘟斗争的俄罗斯，历史经验都证明根除非洲猪瘟需要耗费大量人力、物力，非洲猪瘟不仅对养猪业造成重创，兽药和饲料行业也受到不小影响。我国生猪产业链影响因素错综复杂，面对非洲猪瘟疫情，除了提升诊断水平和积极研发疫苗提供技术支持，还应找到各个防控环节实际关键点，推动产业一体化转型升级。常规的猪瘟检测主要是以猪的血清、血浆、抗凝血、口腔黏液以及肺、淋巴结、肾脏、骨髓和扁桃体组织中进行抽样，都是从猪的本身来检测，起不到未雨绸缪的作用；非洲猪瘟恢复养殖过程中，首先要确定的是养殖环境是否安全，是否在消毒后，非洲猪瘟病毒被完全消除。如果养殖之前，养殖环境仍残留非洲猪瘟病毒，通过虫媒传播，会给养殖户及整个产业链再次带来沉重打击。养殖的环境样本基本上包括：猪舍、养殖用水、食槽及食槽下面的食物残渣、土壤(猪场附近...
【技术保护点】
1.一种环境样本非洲猪瘟病毒检测试剂盒，其特征在于，包括特异性引物AP72-F和AP72-R，以及TaqMan探针AP72-P；所述探针的5′端标记报告荧光染料为FAM，3′端标记荧光淬灭基团为BHQ-1；其中特异性引物和TaqMan探针序列如下：/nAP72-F：5’-TGCGATGATGATTACCTTTG-3’；SEQ ID NO：1；/nAP72-R：5’-TGCTCTGGATACGTTAATATG-3’；SEQ ID NO：2；/nAP72-P：5’-FAM-TTGGTATTCCTCCCGTGGCTT-3’-BHQ-1；SEQ ID NO：3。/n
【技术特征摘要】
1.一种环境样本非洲猪瘟病毒检测试剂盒，其特征在于，包括特异性引物AP72-F和AP72-R，以及TaqMan探针AP72-P；所述探针的5′端标记报告荧光染料为FAM，3′端标记荧光淬灭基团为BHQ-1；其中特异性引物和TaqMan探针序列如下：
AP72-F：5’-TGCGATGATGATTACCTTTG-3’；SEQIDNO：1；
AP72-R：5’-TGCTCTGGATACGTTAATATG-3’；SEQIDNO：2；
AP72-P：5’-FAM-TTGGTATTCCTCCCGTGGCTT-3’-BHQ-1；SEQIDNO：3。
2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒还包括：环境样本DNA提取纯化试剂、扩增反应液、阳性对照和阴性对照。
3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述环境样本DNA提取纯化试剂包括裂解液、裂解增强剂、去抑制剂因子、结合液、漂洗液、洗液、磁珠液、二氧化锆珠、洗脱液；
所述裂解液包括181mMNa2HPO4和121mMGuHCl；所述裂解增强剂包括0.5MSDS、10mMTris和20mMEDTA；所述去抑制剂因子为133mMAl3+；所述结合液包括5MGuHCl和体积浓度为10％Isopropanol；所述漂洗液为3MGuSCN；所述洗液为50mMTris，pH为6.6；所述磁珠液粒径1nm，浓度为50mg/ml；所述二氧化锆珠的直径为1mm；所述洗脱液为10mMTris，pH为8.5。
4.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述扩增反应液包括20mMTris、4mMMg2+、20mMK+、体积浓度为10％的甘油、1～5pmol上下游引物AP72-R\F、1～3pmol探针AP72-P和1UnitDNA扩增聚合酶；其中所述20mMTris的pH为9.2。
5.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照包括如SEQIDNO：4所示的核苷酸序列。
6.如权利要求1-5任一所述的检测试剂盒，其特征在于，采用所述试剂盒检测环境样本非洲猪瘟病毒的方法，包括如下步骤：
(1)待测样本DNA的提取；
(2)PCR扩增：反应体系设为25μl，在多个PCR反应管内加入非洲猪瘟病毒扩增反应液20μl，将步骤(1)提取的待测样本DNA5μl、阳性对照5μl、阴性对照5μl分别加入不同的PCR反应管中，混匀离心进行PCR反应；所述PCR扩增的反应程序为：预变性95℃10min，1个...
【专利技术属性】
技术研发人员：姬宏超，万艳娟，胡东雄，阳享元，
申请(专利权)人：广州赛百纯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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