一种SMN1基因突变的检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种SMN1基因突变的检测方法及试剂盒，该方案是对当前临床上仅针对SMN1基因缺失型基因检测技术的补充。可有效筛查出携带有方案中涉及点突变位点的SMA患者和SMA点突变携带者。且本发明专利技术方案所应用的核酸飞行质谱平台通量高、可实现自动化检测，便于在临床展开大规模人群筛查，对于进一步实现SMA预防有很高的临床应用价值。

A detection method and kit for SMN1 gene mutation

【技术实现步骤摘要】
一种SMN1基因突变的检测方法及试剂盒
本专利技术具体涉及生物
，具体涉及一种SMN1基因突变的检测方法及试剂盒。
技术介绍
脊髓性肌萎缩症(Spinalmuscularatrophy，SMA)是婴幼儿致死的主要遗传疾病之一，是一种常染色体隐性遗传的神经退行性疾病，表现为脊髓运动神经元变性，骨骼肌萎缩和全身无力。脊髓性肌萎缩症在中的发病率为1/6000-1/10000，全球不同人群携带者频率为1/40-1/50。脊髓性肌萎缩症的致病基因定位于染色体5q13区域的运动神经元生存基因1(survivalmotorneuron，SMN1)，SMN1基因的拷贝数检测是脊髓性肌萎缩症临床诊断的关键手段。95％的脊髓性肌萎缩患者是SMN1基因纯合缺失或杂合缺失伴点突变，无法生成功能性的SMN蛋白，致脊髓运动神经元退行性病变，称为5qSMA。这其中，90～95％的患者为SMN1基因纯合缺失，另有5％～10％左右的患者为SMN1杂合缺失伴点突变型即复合杂合型。故研究人员根据SMA患者中存在SMN1基因缺失这一机制，应用多种技术如多重连接依赖探针扩增(ML本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种SMN1基因突变的检测方法,其特征在于，包括以下步骤：/n对公开数据库中所能检索到的SMA相关SMN1基因第1外显子、SMN1基因第3外显子、SMN1基因第5外显子、SMN1基因第6外显子、SMN1基因第7外显子上19个常见致病性点突变，设计PCR引物，通过PCR引物混合液采用多重PCR扩增在单管反应中对这些突变所在的外显子特定区域进行扩增，其后应用虾碱性磷酸酶去除扩增反应后体系中残余的dNTPs，最后加入目的基因位点的延伸引物混合液，进行单碱基延伸反应。/n

【技术特征摘要】
1.一种SMN1基因突变的检测方法,其特征在于，包括以下步骤：
对公开数据库中所能检索到的SMA相关SMN1基因第1外显子、SMN1基因第3外显子、SMN1基因第5外显子、SMN1基因第6外显子、SMN1基因第7外显子上19个常见致病性点突变，设计PCR引物，通过PCR引物混合液采用多重PCR扩增在单管反应中对这些突变所在的外显子特定区域进行扩增，其后应用虾碱性磷酸酶去除扩增反应后体系中残余的dNTPs，最后加入目的基因位点的延伸引物混合液，进行单碱基延伸反应。


2.根据权利要求1所述的一种SMN1基因突变的检测方法，其特征在于，所述的PCR引物混合液包括针对SMN1第1外显子的上游引物SMN1_E1_F、下游引物SMN1_E1_R；针对SMN1第3外显子的上游引物SMN1_E3_F、下游引物SMN1_E3_FR；针对SMN1第5外显子的的上游引物SMN1_E5_F、下游引物SMN1_E5_R；针对SMN1第6外显子的上游引物SMN1_E6_F、下游引物SMN1_E6_R；针对SMN1第7内含子及第7外显子的上游引物SMN1_E7_F、下游引物SMN1_E7_R。


3.根据权利要求2所述的一种SMN1基因突变的检测方法，其特征在于，所述的针对SMN1第1外显子的上游引物SMN1_E1_F和下游引物SMN1_E1_R的序列分别为：
SMN1_E1_F：ACGTTGGATGTCACTCTTAAGAAGGGACGGG；
SMN1_E1_R：ACGTTGGATGCTAATAGGGAGACTGCACTGG。


4.根据权利要求2所述的一种SMN1基因突变的检测方法，其特征在于，所述的针对SMN1第3外显子的上游引物SMN1_E3_F和下游引物SMN1_E3_R的序列分别为：
SMN1_E3_F：ACGTTGGATGGTTCTGCCATTTGGTCAGAAG；
SMN1_E3_R：ACGTTGGATGGGGAAAGTAGATCGGACAGAT。


5.根据权利要求2所述的一种SMN1基因突变的检测方法，其特征在于，所述的针对SMN1第5外显子的上游引物SMN1_E5_F和下游引物SMN1_E5_R的序列分别为：
SMN1_E5_F：ACGTTGGATGACTGGTGGTCCAGAAGGAAATG；
SMN1_E5_R：ACGTTGGATGCAGGTCTAAAATTCAATGGCCC。


6.根据权利要求2所述的一种SMN1基因突变的检测方法，其特征在于，所述的针对SMN1第6外显子的上游引物SMN1_E6_F和下游引物SMN1_E6_R的序列分别为：
SMN1_E6_F：ACGTTGGATGGATGCTGAGTGATTACTTACC；
SMN1_E6_R：ACGTTGGATGTCTGTCTCCAGATAATTCCCC。


7.根据权利要求2所述的一种SMN1基因突变的检测方法，其特征在于，所述的针对SMN1第7外显子的上游引物SMN1_E7_F和下游引...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁春明，金胜男，金伟江，
申请(专利权)人：浙江中创生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33