一种人类微卫星不稳定性状态MSI检测位点及检测方法和应用技术

本发明专利技术为一种人类微卫星不稳定性状态MSI检测位点及检测方法和应用；其中，检测位点是通过已有的文献报道，总结筛选得到；检测位点包括微卫星标记位点：BAT‑25、BAT‑26、NR‑21、NR‑24和CAT‑25；基于该检测位点，进行引物设计，通过单对引物PCR和多重PCR进行检测方法的逐步优化，得到一种较高敏感性的类微卫星不稳定性状态MSI的检测方法，以该检测方法与NCI推荐的Panel分别对183对结直肠癌癌组织与配对正常组织DNA进行检测，实验结果表明本技术方案相比NCI推荐的Panel有较高敏感性。

A MSI detection site of human microsatellite instability and its detection method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种人类微卫星不稳定性状态MSI检测位点及检测方法和应用
本专利技术涉及人类微卫星不稳定性状态MSI的检测，具体涉及人类微卫星不稳定性状态MSI检测位点的筛选，利用MSI-PCR实验方法检测结直肠癌患者的MSI状态。
技术介绍
微卫星(microsatellite)是指DNA基因组中小于10个核苷酸的简单重复序列，遍布于整个人类基因组，一般为2-6个碱基重复。这些高度重复序列在机体自我复制时容易出现碱基错配或跳读的现象，因此需要机体的错配修复系统来进行校正。错配修复系统是指一系列可以矫正碱基错配的蛋白，可维持基因组的稳定及降低自发性突变；当错配修复系统发生失调，则发生在微卫星区域高发的体细胞突变不能被校正，进而形成微卫星重复单位的减少或增加而造成微卫星长度改变，形成新的微卫星等位基因，造成微卫星不稳定(microsatelliteinstability，MSI)。MSI的发生显著提高了基因的随机突变率，是基因组不稳定的重要指标，并与林奇综合征(LynchSyndrome)等遗传病相关。MSI的状态也是多种癌症类型的独立预后因素，可指导临床用药及治疗方案的选择，在结直肠癌和子宫内膜癌患本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人类微卫星不稳定性状态MSI检测位点，其特征在于，该检测位点包括微卫星标记位点：BAT‑25、BAT‑26、NR‑21、NR‑24和CAT‑25。

【技术特征摘要】
1.一种人类微卫星不稳定性状态MSI检测位点，其特征在于，该检测位点包括微卫星标记位点：BAT-25、BAT-26、NR-21、NR-24和CAT-25。2.根据权利要求1所述的一种人类微卫星不稳定性状态MSI检测位点，其特征在于，所述的检测位点还包括样本标识位点；所述的样本标识位点可以选自五核苷酸重复位点PentaC、PentaD、PentaE中的至少一种；所述的样本标识位点具有或不具有性别鉴定基因Amel。3.根据权利要求2所述的一种人类微卫星不稳定性状态MSI检测位点，其特征在于，所述的样本标识位点为PentaD和PentaE。4.一种包含权利要求1-3所述的检测位点的检测方法，其特征在于，该检测方法可以对正常组织与肿瘤组织之间微卫星位点重复单元的微小差异进行检测，该检测方法为MSI-PCR法，该方法通过对肿瘤组织和正常组织中选定的微卫星位点进行PCR扩增及凝胶电泳，比较两组电泳结果的差异来确定MSI的状态。5.根据权利要求4所述的一种人类微卫星不稳定性状态MSI的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：1)获取MSI检测位点；2)根据检测位点设计引物；3)引物混合，获取临床样本的癌组织和配对正常组织DNA并作为模板，配置阳性和阴性对照，常规PCR反应；4)毛细管电泳检测；5)判读结果。6.根据权利要求5所述的一种人类微卫星不稳定性状态MSI的检测方法，其特征在于，所述的步骤2)的引物包括：第一引物对：BAT-25上游引物：5’-TCGCCTCCAAGAATGTAAGT-3’；BAT-25下游引物：5’-CTTTTGGTTACCACACTTCAAA-3’；第二引物对：BAT-26上游引物：5’-TGACTACTTTTGACTTCAGCC-3’；BAT-26下游引物：5’-TTTAGCTCCTTTATAAGCTTCTTC-3’；第三引物对：NR-21上游引物：5’-ACTCCGCATTCACACTTTC-3’；NR-21下游引物：5’-CGCTGGCACAGTTCTATTT-3’；第四引物对：NR-24上游引物：5’-TCTGAATATTTAAGGTCTGCCT-3’；NR-24下游引物：5’-ACCTGTAGTCCCAGCTATTC-3’；第五引物对：CAT-25上游引物：5’-GCTTATCTGAAACTTCCCAACT-3’；CAT-25下游引物：5’-AGCTACTTGGAAGGCTGA-3’；第六引物对：PentaD上游引物：5’-CCATGATCACACCACTACAC-3’；PentaD下游引物：5’-GCCTAACCTATGGTCATAACG-3’；第七引物对：PentaE上游引物：5’-ACATGTGTGTAAAGTGCTTAGT-3’；PentaE下游引物：5’-AGGAGGTGGAGATTGAAGT-3。7.根据权利要求6所述的一种人类微卫星不稳定性状态MSI的检测方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁春明，金胜男，刘阳阳，
申请(专利权)人：浙江中创生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33