热稳定单链DNA/RNA连接酶及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种热稳定性的单链DNA/RNA连接酶突变体及其应用。本发明专利技术提供的赖氨酸突变的DNA/RNA连接酶，与SEQ ID NO:1的氨基酸序列(pfumligase)相比，在372位为替换突变；该核酸连接酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所述。本发明专利技术通过筛选潜在的连接活性位点并实施基因突变改造，获得了带有新突变位点的Pfumligase DNA/RNA连接酶。相较于原始的Pfumligase DNA/RNA连接酶，改造后的Pfumligase DNA/RNA连接酶表现出更高的催化活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种热稳定性的单链dna/rna连接酶突变体及其组合物、试剂盒、连接方法及应用。

技术介绍

1、核酸连接酶属于核苷酸转移酶超家族，其功能是在金属离子的辅助作用下，促进dna或rna的3’末端与5’末端碱基之间的磷酸二酯键形成，从而实现核酸分子的自身环化或分子间的线性连接。依据其作用底物的类型，核酸连接酶可分为两大类：dna连接酶和rna连接酶。部分连接酶具备连接dna与rna的能力。这些天然核酸连接酶源自不同的物种，它们表现出多种独特的性质，这些特性包括对底物的特异性、序列的偏好性、热稳定性、耐盐性以及对ph变化的耐受性等。

2、当前，核酸连接酶的连接机制普遍被认为通过三步连接反应来催化3’末端与5’末端的碱基连接[1]。第一步是形成酶-amp复合物，辅助因子atp和nad+发生裂解，其中的腺苷酸amp转移至核酸连接酶活性区域中高度保守的赖氨酸残基上形成共价的酶-amp中间复合物。第二步为酶-amp中间复合物向核酸底物的5’磷酸末端转移amp，从而形成5’腺苷酰化的中间产物。第三步，连接酶催化的活性口袋中，碱基的3’本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种赖氨酸突变的DNA/RNA连接酶，其特征在于：与SEQ ID NO:1的氨基酸序列相比，在372位为替换突变；该核酸连接酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所述。

2.根据权利要求1所述的赖氨酸突变的DNA/RNA连接酶，其特征在于：372位的突变是Lys替换为Glu。

3.核酸分子，其特征在于：编码权利要求1或2所述的赖氨酸突变的DNA/RNA连接酶。

4.载体，其特征在于：包含权利要求3所述的核酸分子。

5.重组细胞，其特征在于：引入了权利要求3所述的核酸或权利要求4所述的载体。

6.用于连接单链DNA和/或RNA...

【技术特征摘要】

1.一种赖氨酸突变的dna/rna连接酶，其特征在于：与seq id no:1的氨基酸序列相比，在372位为替换突变；该核酸连接酶的氨基酸序列如seq id no:4所述。

2.根据权利要求1所述的赖氨酸突变的dna/rna连接酶，其特征在于：372位的突变是lys替换为glu。

3.核酸分子，其特征在于：编码权利要求1或2所述的赖氨酸突变的dna/rna连接酶。

4.载体，其特征在于：包含权利要求3所述的核酸分子。

5.重组细胞，其特征在于：引入了权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁春明，姜浩，王慧东，金胜男，
申请(专利权)人：浙江中创生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：