一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用，通过在培养间充质干细胞(MSC)时添加当归提取物，能促进MSC外泌体的释放，获得的外泌体具有更强的促血管内皮细胞增殖的能力，可用于机体损伤类血管新生的修复治疗；该发明专利技术方法简便易行，适用于不同来源的干细胞外泌体的大规模生产，为干细胞外泌体应用于医学转化事业提供一条新的路径；本发明专利技术公开了一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用，工艺设计合理，可行性高，且可产业化和衍生化，适用于制备不同来源的间充质干细胞的“血管修复外泌体”，同时可将干细胞外泌体应用于其他机体损伤的血管修复治疗，具有较优异的治疗效果。

Preparation and application of stem cell exosomes stimulated by Angelica Extract

【技术实现步骤摘要】
一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用
本专利技术涉及生物干细胞
，具体是一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法及其应用。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。近年来国内外大量的基础和临床研究证实间充质干细胞可以迁移到伤口组织、分泌血管内皮生长因子等促进新生血管形成、刺激角质形成细胞参与表皮再形成，进而促进糖尿病足溃疡的愈合、改善临床症状，其原因是因为间充质干细胞能分泌多种细胞因子，如血管内皮细胞生长因子(VEGF)、角质细胞生长因子(KGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板样衍生生长因子(PDGF)、纤维连接蛋白(FN)等。其中，成纤维细胞生长因子(FGF)是一类来源于中胚层和神经外胚层的细胞分泌的具有重要生物活性的细胞生长因子，也是一类重要的促有丝分裂因子和促细胞分化的诱导因子。有关研究表明，FGF能促进组织和神经修复、再生及伤口愈合和新生血管生成等多种生理作用；FGF是现如今体内发现的最有效的血管生成因子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：/n1)间充质干细胞的制备；/n2)将步骤1)得到的间充质干细胞接种于培养皿中，无血清培养；/n3)在培养基中加入当归提取物，继续培养并收集细胞培养上清液；/n4)超速离心，得到所述干细胞外泌体。/n

【技术特征摘要】
1.一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)间充质干细胞的制备；
2)将步骤1)得到的间充质干细胞接种于培养皿中，无血清培养；
3)在培养基中加入当归提取物，继续培养并收集细胞培养上清液；
4)超速离心，得到所述干细胞外泌体。


2.根据权利要求1所述的一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)间充质干细胞的制备；
2)取步骤1)制备的间充质干细胞，用0.25％胰蛋白酶进行常规消化、收集细胞悬液；
3)用血球计数板进行计数，再按照1×105个细胞/孔接种于6孔板中，在温度为37℃、湿度为95％、5％CO2条件下培养24h，去除上清；
4)更换含有当归提取物的opti-MEM培养基，继续培养3天，并收集细胞培养上清液；
5)超速离心，得到所述干细胞外泌体。


3.根据权利要求2所述的一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤5)中，包括以下步骤：
A.取步骤4)收集的细胞培养上清液，在4℃、350g下离心15分钟，得到一次离心上清液；
B.取步骤A得到的一次离心上清液，在4℃、7000g下离心10分钟，得到二次离心上清液；
C.取步骤B得到的二次离心上清液，在4℃、20000g下离心20分钟，得到三次离心上清液，再将三次离心上清液经0.22μM孔径滤膜过滤，得到滤液；
D.取步骤C得到的滤液，在4℃、130000g下离心1.5h，取沉淀物，加入pH为7.4的PBS缓冲液复溶，得到所述干细胞外泌体。


4.根据权利要求2所述的一种当归提取物刺激的干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴金芸，徐文倩，叶华衍，张炬，雷登，
申请(专利权)人：伯仕利生物科技发展盐城有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32