一种胎盘间充质干细胞外泌体的制备和储存方法技术

本发明专利技术涉及胎盘间充质干细胞外泌体的制备和储存方法，属于干细胞与再生医学技术领域。该方法，包括以下步骤：将P3代胎盘间充质干细胞培养、待融合度达到80‑90％后将其吸出培养基，更换DMEM培养基培养24h后收集上清液，去除细胞碎片，再通过0.22μm无菌过滤膜过滤，取滤液在13000r/min转速下离心60min，上清液通过0.22μm无菌过滤膜过滤，即得到高纯度外泌体，最后用生理盐水重悬并13000r/min离心65min，获得浓缩的外泌体；外泌体加入含SR无血清培养基、甘油和维生素C的冻存液，‑80℃冰冻24h后取出，再放入‑196℃液氮中冻存。上述胎盘间充质干细胞外泌体的制备方法，针对常规技术中的不足，通过调整提取方法和改良冻存液，取得高纯度、高密度且能保持活性的外泌体。

A method for the preparation and storage of placenta derived mesenchymal stem cell exosomes

【技术实现步骤摘要】
一种胎盘间充质干细胞外泌体的制备和储存方法
本专利技术涉及干细胞与再生医学
，特别是涉及一种胎盘间充质干细胞外泌体的制备和储存方法。
技术介绍
间充质干细胞(MSC)是一类来源于中胚层的具有高度更新和多向分化潜能的多能干细胞，可以在体外培养扩增并在特定的条件下分化为脂肪细胞、骨细胞、肝脏细胞等组织细胞。因此，间充质干细胞在临床上被广泛应用于细胞移植治疗中。但是有研究表明，干细胞移植后的增值率很低，并不能代替整个组织，细胞移植治疗的主要机制很可能为干细胞的外泌体促进组织修复而不是简单的细胞代替。外泌体是由活细胞分泌的直径30-150nm、包含了复杂的RNA和蛋白质的双层脂膜囊泡状结构。间充质干细胞的外泌体内包含多种趋化因子、细胞因子以及生长因子的转录因子等，不仅可以招募血管内皮细胞、促进其增殖和迁移来促进血管再生，以改善宿主血供，进而促进组织损伤修复；还可以刺激宿主内源性细胞，激活其活性，从而改善组织环境、增强内源性修复系统。胎盘属于医疗废弃物，是胎儿出生后排出母体的产后废弃物，简单易得。胎盘间充质干细胞(placenta-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胎盘间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n培养：将P3代胎盘间充质干细胞接种在干细胞培养基中培养、待融合度达到80-90％后将其吸出培养基，更换DMEM培养基培养24h，收集上清液，去除细胞碎片，得到包含外泌体的溶液；/n纯化：取上述包含外泌体的溶液，通过0.22μm无菌过滤膜过滤后取滤液，随后将滤液置于10000-20000r/min转速下离心50-90min，离心后取上清液通过0.22μm无菌过滤膜过滤，用生理盐水重悬，并于10000-20000r/min离心50-90min，所得上清液即为外泌体。/n

【技术特征摘要】
1.一种胎盘间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
培养：将P3代胎盘间充质干细胞接种在干细胞培养基中培养、待融合度达到80-90％后将其吸出培养基，更换DMEM培养基培养24h，收集上清液，去除细胞碎片，得到包含外泌体的溶液；
纯化：取上述包含外泌体的溶液，通过0.22μm无菌过滤膜过滤后取滤液，随后将滤液置于10000-20000r/min转速下离心50-90min，离心后取上清液通过0.22μm无菌过滤膜过滤，用生理盐水重悬，并于10000-20000r/min离心50-90min，所得上清液即为外泌体。


2.根据权利要求1所述的胎盘间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，干细胞培养基包括：2％FBS，终浓度为40ng/mL的维生素C10ng/mL的bEGF。


3.根据权利要求1所述的胎盘间充质干细胞外泌体的制备和储存方法，其特征在于，将P3代细胞接种于干细胞培养基后，置于37℃、5％CO2的恒温培养箱中培养。


4.根据权利要求1所述的胎盘间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，上述去除细胞碎片的方法包括：第一次离心，以1800-5000r/min转速离心25min，取上清液进行第二次离心；第二次离心，以8000-10000r/min转速离心30min，保留上清液，即为包含外泌体的溶液。


5.根据权利要求1所述的胎盘间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于，所述P3代胎盘间充质干细胞可以通过以下方法获得：
1)胎盘预处理：将采取得到的组织加入清洗液清洗至无血液残留，离心保留沉淀，即获得干净的胎盘组织；
2)胎盘组织消化：将上述胎盘组织剪成小块，并加入...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵蓝，刘小翠，李静静，江嘉豪，孙灿兴，何美第，
申请(专利权)人：广东唯泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44