一种液相色谱串联质谱定量检测中蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的方法技术

本发明专利技术提供一种液相色谱串联质谱定量检测中蜂蜜中α‑葡萄糖苷酶的方法，包括：筛选特征肽段，制作标准曲线，样品前处理，液相色谱分离以及串联质谱检测，软件定量肽段等步骤；所述特征肽段包括特征肽段1：MLNDSVFAFSR和特征肽段2：IYTHDIPETYNIVR。本发明专利技术所提出的中蜂蜜α‑葡萄糖苷酶的定量方法，具有较高的准确度、精确度和灵敏度，并且稳定性强，适用于准确定量中蜂蜜中α‑葡萄糖苷酶，可用于辅助中蜂蜜真实性评价。该定量方法对保护蜂蜜消费者的权益和维护蜂产品行业的健康发展具有重要现实意义。

【技术实现步骤摘要】
一种液相色谱串联质谱定量检测中蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的方法
本专利技术涉及食品检测领域，具体为一种液相色谱串联质谱定量检测中蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的方法，该方法适用于中蜂蜜的真实性的鉴别与评价。
技术介绍
中蜂蜜，亦称之为土蜂蜜，是由中华蜜蜂采集蜜源植物而酿制的蜂蜜。中蜂比意蜂个头小，背部黑，行动更敏捷，且两个种群之间没有姻缘关系，无法杂交繁殖，中蜂蜜的产量远低于意蜂蜜，从而导致中蜂蜜的市场价格较高，大约是意蜂蜜的5-10倍。不良商贩为了追逐高额利润，往往会采用意蜂蜜冒充中蜂蜜，或者在中蜂蜜中勾兑意蜂蜜进行掺假，甚至掺入廉价的果葡糖浆。α-葡萄糖苷酶，是蜂蜜中的主要的蛋白质之一，广泛存在于多种蜂蜜中，但其在不同种蜂蜜如中蜂蜜、意蜂蜜中的氨基酸序列有所不同。中蜂α-葡萄糖苷酶在不同蜜种、不同蜜源中的含量稍有不同，但其含量相对恒定，若是掺入了糖浆等外源性物质，则其含量会大幅下降，因此中蜂α-葡萄糖苷酶含量可以用作辅助鉴别蜂蜜的掺假现象。由于液相色谱-质谱技术相较于其他技术有高选择性和高灵敏度，更有助于复杂生物基质中蛋白质的准确表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种液相色谱串联质谱定量检测中蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，包括：通过液相色谱串联质谱法检测待测蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的特征肽段，所述特征肽段包括肽段:/n特征肽段1：MLNDSVFAFSR，/n特征肽段2：IYTHDIPETYNIVR。/n

【技术特征摘要】
1.一种液相色谱串联质谱定量检测中蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，包括：通过液相色谱串联质谱法检测待测蜂蜜中α-葡萄糖苷酶的特征肽段，所述特征肽段包括肽段:
特征肽段1：MLNDSVFAFSR，
特征肽段2：IYTHDIPETYNIVR。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在检测之前用检测试剂盒处理所述待测蜂蜜，所述检测试剂盒由以下成分组成:
(1)提取缓冲液0.01MPBS，pH7.4；
(2)胰蛋白酶20ng/μL，溶剂为40mM碳酸氢氨；
(3)特征肽段1、2的标准品。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
A、配制含有固定浓度的稳定同位素内标肽段的不同浓度的特征肽段标准品溶液，进入液相色谱串联质谱检测并绘制标准曲线；
B、提取所述待测蜂蜜中的蛋白质，用胰蛋白酶进行酶切，对酶解产物除盐后作为待测样本；
C、向所述待测样本中添加所述稳定同位素内标肽段使其浓度与步骤A中的浓度相同，采用步骤A中相同方法进行液相色谱串联质谱检测；
D、对照步骤A所得标准曲线，获得所述待测样本中特征肽段的浓度，...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨术鹏，李熠，丛晓蕾，周金慧，张金震，金钥，黄京平，杨宇辉，袁媛，赵文，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11