一种构建高产磷脂酶B的重组大肠杆菌的方法及其培养方法技术

本发明专利技术公开了一种构建高产磷脂酶B的重组大肠杆菌的方法及其培养方法。本发明专利技术选取来自Pseudomonas fluorescens的磷脂酶B基因PLB，经密码子优化后，重组菌经破碎后得到的粗酶液中目标蛋白多以包涵体形式存在，通过添加分子伴侣共表达明显的提高了PLB蛋白的可溶性表达，与原始菌株相比，酶活提高了约9倍。最终通过对重组菌株产酶条件的研究，确定了产酶的最佳条件，在最佳条件下，PLB酶活可达到524.64 U/mg，较原始酶活提高了约26倍。

A method of constructing recombinant Escherichia coli with high phospholipase B production and its culture

【技术实现步骤摘要】
一种构建高产磷脂酶B的重组大肠杆菌的方法及其培养方法
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种构建高产磷脂酶B的重组大肠杆菌的方法及其培养方法。
技术介绍
磷脂酶B的应用是将磷脂水解为各类小分子物质，如氨基酸、乙醇胺等，以满足工业应用上的需求。目前磷脂酶B被应用在很多方面，例如在动物饲料中的应用、医疗上的应用、制作面包、蛋黄、植物油和大豆原油中的精炼等方面。（1）在动物饲料中添加磷脂酶B，可以促进磷脂被分解转化为小分子易被吸收消化的物质，可以使动物的生长速度加快；另外一个方面是磷脂酶B可以将磷脂水解为溶血磷脂，成为性能很好的乳化剂，改善了动物在生长发育过程中饲料的利用率，节约投入的成本；（2）磷脂酶B属于抗菌消炎及抗过敏的酶类，可以作用于神经或者肌肉，能抵抗病毒的感染，在一些皮肤病上的治疗也有很好的效果；此外磷脂酶B可以用于化妆品中，可以加快受损皮肤的重生，降解掉已经被破坏的脂肪酸分子链，去除坏死组织，在化妆品中的开发应用中越来越普遍，越来越多的企业已经将磷脂酶B作为主要的研究对象。分子伴侣是一类蛋白质，它可以有助于细胞内的其它多肽完本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种构建高产磷脂酶B的重组大肠杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n第一步，将磷脂酶B基因

【技术特征摘要】
1.一种构建高产磷脂酶B的重组大肠杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
第一步，将磷脂酶B基因PLB基因密码子优化后交由思普金生物科技有限公司合成于载体pET-28a的NcoI/XhoI酶切位点之间，转入克隆载体Trans1-T1，经过LB平板初筛后，挑点进行菌落PCR验证后测序，验证重组质粒构建是否正确；
第二步，将阳性菌株接种至5mlLB/KanR液体培养基，于37℃、200rpm条件下振荡培养过夜，24小时后按照天根质粒提试剂盒操作说明提取质粒pET28a-PLB；
第三步，将商品化的分子伴侣质粒pTf16与重组质粒pET28a-PLB混匀后，导入到大肠杆菌BL21（DE3）中共表达即得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-PLB/pTf16。

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【专利技术属性】
技术研发人员：陈可泉，王昕，许晟，
申请(专利权)人：南京凯诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32