质粒载体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其涉及质粒载体及其应用。本发明专利技术以滚环复制为基础，通过模块化pC194质粒复制区域，在repH蛋白的作用下进行切口和连接，即可产生目标cssDNA。工作主要包含质粒结构的设计及cssDNA的验证。本发明专利技术利用滚环复制机理，在已经作为工程菌广泛使用的大肠杆菌体内生产合成环状ssDNA。该发明专利技术已成功的证明，在大肠杆菌体内，可以高效快速的产生环状ssDNA,并利用Cas9蛋白在无前间区序列邻近基序(PAM位点)，只有指导RNA(sgRNA)存在的条件下，可以特异性切割单链DNA的性能，将体内产生的环状ssDNA有效的切割为线性ssDNA并用于基因编辑。

Plasmid vector and its application

【技术实现步骤摘要】
质粒载体及其应用
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及质粒载体及其应用。
技术介绍
ssDNA在生物学、纳米技术和生物技术中有十分广泛的应用，例如：DNA折纸技术等，2006年加州理工学院的Rothemund提出了DNA折纸术这一全新的DNA自组装策略，将DNA自组装领域推进到一个新的发展阶段。该方法使用一条长单链DNA作为骨架链，上百条序列不同的短链DNA作为订书钉链。通过碱基互补作用，订书钉链将骨架链折叠成为所设计的各种形状。在DNA折纸术中，所有订书钉链的DNA序列不同，从而使整个纳米结构在空间上具有完全的可寻址性。DNA折纸技术组装得到的结构可以作为模板，引导其他纳米材料、药物小分子、生物大分子等成分的排列，从而获得光学、电磁学等性能可控的纳米元件、药物载体以及纳米机器人等，使DNA折纸术在纳米领域具有非常广泛的应用价值。然而，由于长ssDNA的天然来源稀缺，迫切需要一种可以合成序列可控(用户自定义)、成本低廉、纯度高、可大规模生产的较长ssDNA的技术。根据所需ssDNA的大小、规模和纯度，其生产可能变得异常昂贵或繁重。虽本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种质粒载体，依次包括：单链DNA复制起始位点、单链DNA复制终止位点和RepH表达盒。/n

【技术特征摘要】
1.一种质粒载体，依次包括：单链DNA复制起始位点、单链DNA复制终止位点和RepH表达盒。


2.根据权利要求1所述的质粒载体，其特征在于，还包括SSB表达盒。


3.根据权利要求1或2所述的质粒载体，其特征在于，所述单链DNA复制起始位点、单链DNA复制终止位点之间还包括制备的目的片段。


4.根据权利要求1或2所述的质粒载体，其特征在于，依次包括：单链DNA复制起始位点、cas9识别位点1、cas9识别位点2、单链DNA复制终止位点、RepH表达盒和gRNA元件。


5.根据权利要求4所述的质粒载体，其特征在于，所述cas9识别位点1与cas9识别位点2之间还包括制备的目的片段。


6.根据权利要求4所述的质粒载体，其特征在于，所述cas9识别位点1与cas9识别位点2之间还包括基因编辑目的片段；所述基因编辑的目的片段包括靶基因的左同源臂、donor片段和右同源臂。


7.根据权利要求1～6任一项所述的质粒载体，其特征在于，还包括革兰氏阴性菌的复制起始区。


8.根据权利要求1～7任一项所述的质粒载体，其特征在于，所述单链DNA复制起始位点的序列如SEQIDNO:1所示，所述单链DNA复制终止位点的序列如SEQIDNO:2或3所示。


9.根据权利要求1～8任一项所述的质粒载体，其特征在于，还包括解旋酶表达盒。


10.权利要求1～3或7～9任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐浩，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12