特异性结合HLEG1蛋白的抗体、杂交瘤细胞以及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种特异性结合HLEG1蛋白的抗体、杂交瘤细胞以及检测方法，涉及抗体技术领域。该抗体的重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1‑3所示，轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3的分别如SEQ ID NO.4‑6所示。该抗体可以特异性结合HLEG1蛋白，可以用于检测HLEG1蛋白和研究HLEG1蛋白功能。

Antibodies, hybridoma cells and detection methods specifically binding to hleg1 protein

【技术实现步骤摘要】
特异性结合HLEG1蛋白的抗体、杂交瘤细胞以及检测方法
本专利技术涉及抗体
，具体而言，涉及一种特异性结合HLEG1蛋白的抗体、杂交瘤细胞以及检测方法。
技术介绍
C6orf58基因是斑马鱼基因leg1在人类基因组中的同源物，是6号染色体上第58个开放阅读框。C6orf58基因简称其为hleg1基因。hleg1基因有两个转录本，一号转录本为1200bp，有六个外显子，编码一个大小为330aa的蛋白HLEG1，二号转录本不编码蛋白。HLEG1有一个20个氨基酸的信号肽及一个功能未知区域，是一个分泌蛋白，预测大小为38kD。在人的唾液，唾液腺和十二指肠中检测到其表达。经预测(CBSpredictionservers)有24位天冬酰胺(N)，69位天冬酰胺(N)两个N连接糖苷化位点。目前对蛋白HLEG1的功能研究仍有很大的探索空间。但缺乏检测HLEG1蛋白的抗体。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种特异性结合HLEG1蛋白的抗体，该抗体可以特异性结合HLEG1蛋白，可以用于检测HLEG1蛋白。本专利技术的另一目的在于提供一种杂交瘤细胞，其可以分泌特异性结合HLEG1蛋白的抗体，用于制备或检测HLEG1蛋白。本专利技术的另一目的在于提供一种检测HLEG1蛋白的试剂盒。该试剂盒可检测HLEG1蛋白。本专利技术的另一目的在于提供一种制备特异性结合HLEG1蛋白的抗体的方法。该方法可以制备出特异性结合HLEG1蛋白的抗体本专利技术的另一目的在于提供一种检测HLEG1蛋白的方法。该方法可以检测出HLEG1蛋白。本专利技术是这样实现的：一方面，本专利技术提供了一种特异性结合HLEG1蛋白的抗体，所述抗体的重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示，轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3的分别如SEQIDNO.4-6所示。其中，各CDR的氨基酸序列如下：HCDR1(即重链互补决定区1)：GYTFTDYS(SEQIDNO.1)；HCDR2：INTKTGEP(SEQIDNO.2)；HCDR3：ARGAIYNYGSKFSYYAMDY(SEQIDNO.3)。LCDR1(即轻链互补决定区1)：SSVTY(SEQIDNO.4)；LCDR2：ATS(SEQIDNO.5)；LCDR3：QQWNSNPYT(SEQIDNO.6)。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。重链可变区的氨基酸序列如下：QIQLVQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTDYSMHWVKQAPGKGLKWMGWINTKTGEPTYADDFKGRFAFSLETSASTAYLQIINLKDEDTASYFCARGAIYNYGSKFSYYAMDY。进一步地，在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示。轻链可变区的氨基酸序列如下：QIVLSQSPAILSASPGEKVTMTCRASSSVTYIHWYQQTPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWNSNPYT。另一方面，本专利技术提供了一种特异性结合HLEG1蛋白的抗体，其由杂交瘤细胞分泌制得，该杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCCNO：C2019254。该杂交瘤细胞株于2019年11月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉大学，武汉市武昌珞珈山，分类命名：杂交瘤细胞株1D11-6-4，保藏编号：CCTCCNO：C2019254。另一方面，本专利技术提供了一种分泌特异性结合HLEG1蛋白的抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为CCTCCNO：C2019254。另一方面，本专利技术提供了一种检测HLEG1蛋白的试剂盒，其包括如上所述的抗体。另一方面，本专利技术提供了一种制备特异性结合HLEG1蛋白的抗体的方法，其包括：培养如上所述的杂交瘤细胞。另一方面，本专利技术提供了一种检测HLEG1蛋白的方法，其包括：将样品与如上所述的抗体混合。另一方面，本专利技术提供了一种检测HLEG1蛋白的方法，其包括：将样品与如上所述的杂交瘤细胞的培养上清液混合。另一方面，本专利技术提供了上述抗体在制备检测HLEG1蛋白的试剂或试剂盒中的应用。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供的特异性结合HLEG1蛋白的抗体，其重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示，轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3的分别如SEQIDNO.4-6所示，该抗体也可由杂交瘤细胞分泌制得。该抗体可以特异性结合HLEG1蛋白，具有较高的特异性，可以用于检测HLEG1蛋白以及用于研究HLEG1蛋白功能。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1：制备抗体时免疫的5只小鼠：99#，100#，1#，2#，3#的血清检测其特异性识别抗原能力。WB底物1#和2#为两个供体提供的唾液样品。图2：选取100#小鼠进行杂交瘤细胞制备并对各杂交瘤细胞系：1A,1C,1B,1D,1B4,1D11,1D6,1D13,1E8,1E11进行效价检测。WB底物为唾液样品。图3：使用1D11细胞上清检测并验证HLEG1的两个N糖苷化修饰位点：24N和69N。图4：以原核表达的HLEG1-Re为底物通过WB建立测量HLEG1含量的标准曲线。图5：WB检测样品中HLEG1含量示例。样品为不同供体提供的唾液样品。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。以下结合实施例对本专利技术的特征和性能作进一步的详细描述。实施例11制备特异性结合HLEG1蛋白的抗体从公司(北京唯尚立德生物科技有限公司)的cDNA文库购买C6orf58，测序发现公司购买的序列N端缺少180bp碱基，从人类基因组DNA中将该部分序列克隆出来并构成完整的hleg1基因序列并克隆至pCS2+。随后将全长hleg1基因克隆进pet30a+质粒，验证诱导表达成功后由杭州华安生物进行小鼠单抗制备及检验。hleg1基因编码的HLEG1蛋白的氨基酸序列如下：MAFLPSWVCVLVGSFSASLAGTSNLSETEPPLWKESPGQLSDYRVENSMY本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合HLEG1蛋白的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示，轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3的分别如SEQ ID NO.4-6所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合HLEG1蛋白的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示，轻链可变区的LCDR1、LCDR2和LCDR3的分别如SEQIDNO.4-6所示。


2.根据权利求1所述的特异性结合HLEG1蛋白的抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。


3.根据权利要求1或2所述的特异性结合HLEG1蛋白的抗体，其特征在于，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.8所示。


4.一种特异性结合HLEG1蛋白的抗体，其特征在于，其由杂交瘤细胞分泌制得，该杂交瘤细胞的保藏编号为CCTCCNO：C2019254。


5.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：王金阳，彭金荣，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33