用于LAMP或RT-LAMP的整合一体式多联试纸条制造技术

技术编号:23844725 阅读:23 留言:0更新日期:2020-04-18 05:56
本实用新型专利技术涉及一种用于LAMP或RT‑LAMP的整合一体式多联试纸条,包括试纸条主体,试纸条主体包括上层片、下层片和中层片;上层片与下层片密封固连形成套状构件,套状构件的一端具有开口;中层片安置于套状构件内,中层片朝开口延伸出抽拉柄;中层片与套状构件构成移动副;上层片设有一组加样孔,下层片设有一组反应点;中层片设有一组流通孔、一组试剂孔、一反应区、以及一组染料孔。反应点的材质为FTA滤膜或FTA卡或Whatman No.1滤纸。采用本实用新型专利技术能够直接实现样本核酸的抽提、扩增及显示结果,且能一并实现对多个目标核酸的检测,摆脱对自动仪器的依赖。

Integrated and integrated multiple test strip for lamp or RT-LAMP

【技术实现步骤摘要】
用于LAMP或RT-LAMP的整合一体式多联试纸条
本技术涉及一种用于LAMP或RT-LAMP的整合一体式多联试纸条,属于核酸检测辅助装置

技术介绍
据专利技术人所知,一些相同症候群传染病(如病毒性出血热系列有发热伴出血,病毒疹系列有发热伴出疹等),它们的主要临床表现相似,早期难以鉴别诊断,最终病因确认有赖于病原检测,尽快筛查并明确诊断对控制疫情至关重要。由于传染病疫情的突发性和快速蔓延性,最好能在现场第一时间展开快速病原检测,因为患者标本或虫媒标本从现场或野外辗转后送至具备条件的实验室,往往距离较远,耗时长,延误救治和防控,并且标本易失活造成假阴性,此外还存在一定的传播隐患。然而,目前针对传染病病原的现场检测手段相对单薄,仍以胶体金试纸条为主,存在灵敏度低、检测谱窄、钩状效应等问题,常致假阴性。核酸检测是早期、可靠、敏感的方法。然而常规PCR及DNA探针杂交技术因假阳性高等问题不适合临床诊断;实时荧光定量PCR技术灵敏度高,可靠性好,为全封闭反应,但该技术需要价格昂贵的荧光定量PCR仪,并且要保证高特异性往往需要荧光标记探针,检测成本较高,需要注意的是,精密贵重仪器对质量控制、操作环境和人员的专业能力要求较高,难以在基层卫生部门和防疫机构推广使用,也难以直接用于现场检测。与上述各检测手段相比,LAMP(环介导等温扩增反应)或RT-LAMP(逆转录环介导等温扩增反应)方法应能更好地在现场进行早期病原学筛查。LAMP/RT-LAMP方法具有较高特异性和抗干扰能力,只有当引物组与目的片段的6-8个区域都匹配上时才能进行扩增;反应体系稳定可靠,在室温下放置2周后仍然稳定,并且对于样品中原有或污染的无关、干扰片段仍然不敏感,而其他类似技术则无法做到这一点;敏感性较高,扩增快速、高效,1小时内产物量可达约1010倍,逆转录反应和LAMP扩增可同时进行,扩增效率和检测灵敏度可比普通RT-PCR高10-100倍左右;结果鉴别相对简便,如检测反应管的沉淀浊度就能判断扩增与否,也可在管盖或管底蜡封(高熔点)SYBR荧光染料直接观察反应后的颜色变化即可判断,或直接在反应体系加入不影响扩增效率的羟基萘酚蓝染料(hydroxynaphtholblue,HNB)来大幅度增强显色。总之,LAMP/RT-LAMP方法对于样品处理、操作技术和仪器设备的要求都比较低,更适宜于现场检测、医疗机构(如各类中小医院、社区医院等)、床边检验(Pointofcaretesting,POCT)等场景下使用。然而,将LAMP/RT-LAMP方法推广应用于以上现场检测等场景同样存在瓶颈问题:一是该方法需抽提核酸,手工操作繁琐,或需要配置价格较昂贵的全自动核酸提取仪,且核酸提取与检测分离易导致污染和假阳性问题;二是该方法需要配制反应体系,整合度不高;三是LAMP/RT-LAMP的相关试剂一般需冷链储存,运输储存不便;四是目前LAMP/RT-LAMP反应还难以实现多重反应,一般只能针对单个病原进行检测,通量不足,难以适应相同症候群(如发热伴出血、传染病四项筛查等)多种病原筛查的需要。因此,亟待研制出能克服上述技术问题的技术手段,以利于LAMP/RT-LAMP方法在现场检测、医院临床诊断中的应用。经检索发现,申请号CN201610710500.3、申请公布号CN106337085A的中国专利技术专利申请,公开了一种核酸检测卡及其使用方法,包括封口膜、卡体、试剂孔、核酸扩增试剂、反应孔、核酸收集试纸、配套使用的核酸纯化试剂、冲洗缓冲液、防止溶液挥发的有机相。打开封口膜,将病原体样本加入到封装有核酸收集试纸的反应孔中,经核酸纯化试剂和冲洗缓冲液自动冲洗数次后,将试剂孔内的核酸扩增试剂分别加入每个对应的反应孔,在防止溶液挥发的有机相保护下,进行核酸扩增反应,反应的结果可通过配套使用的光学检测仪进行定性与定量分析。申请号CN201810583631.9、申请公布号CN108642569A的中国专利技术专利申请,公开了一种核酸检测芯片,包括:设置在中间位置的样本室单元,其存储加入的核酸样本,并在旋转作用下将核酸样本等分;与样本室单元连通,并通过虹吸现象将核酸样本引入反应室单元的第一虹吸阀;反应室单元,其设置在边缘位置,其将核酸样本与试剂混合并进行核酸反应,反应室单元的反应室还连通有第二虹吸阀;与反应室单元连通的试剂存储导入单元,其内存储有反应试剂,在反应室单元内导入核酸样本后,向反应室单元内导入反应试剂,以使反应试剂与核酸样本反应可以针对各种血液病毒进行检测。然而,以上两种技术方案都不能脱离价格昂贵的自动仪器,难以适用于目前现场检测等场景的现状。经检索还发现,专利号CN201410363297.8、授权公告号CN104101706B的中国专利技术专利,公开了一种检测甲流抗原的胶体金免疫层析试纸条及检测甲流抗原的方法,试纸条包括底板和顺次搭接粘贴在所述底板上的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜和吸水纸,其中结合物垫为金标-生物素结合物垫和链霉亲和素-金-抗体结合物垫的组合;检测甲流抗原的方法中,将待检样品滴加在所述的试纸条上,若在检测线(1)处显示红色条带,则说明所述待检样品中含有甲流抗原。申请号CN201710569444.0、申请公布号CN107287351A的中国专利技术专利申请,提到了一种横向流动试纸条(Lateralflowdipstick,LFD),其原理是将FITC标记的探针与生物素标记的LAMP扩增产物特异性杂交,LFD检测无需特殊的设备,操作者只需将产物和试纸条浸入缓冲液,LFD试纸条上具有控制带和检测带,两条带均显色表示检测结果为阳性,只有控制带显色检测带不显色表明检测结果为阴性。然而,以上两种试纸条技术方案都不能在试纸条上直接进行核酸的洗脱和扩增,仍然无法满足现场检测等场景的需求。
技术实现思路
本技术目的在于:针对上述现有技术存在的问题,提出一种用于LAMP或RT-LAMP的整合一体式多联试纸条,能够直接实现样本核酸的抽提、扩增及显示结果,且能一并实现对多个目标核酸的检测,摆脱对自动仪器的依赖,适用于现场检测场景,尤其适用于传染病现场防控、医院临床科室、口岸检验检疫。为了达到以上目的,本技术的技术方案如下:一种用于LAMP或RT-LAMP的整合一体式多联试纸条,包括试纸条主体,其特征是,所述试纸条主体包括上层片、下层片和中层片;所述上层片与下层片密封固连形成套状构件,所述套状构件的一端具有开口;所述中层片安置于套状构件内,所述中层片朝开口延伸出抽拉柄,所述抽拉柄穿过开口并伸出套状构件;所述中层片与套状构件构成移动副;所述上层片设有一组加样孔,所述下层片设有一组反应点,所述加样孔与反应点一一对应;所述中层片设有一组流通孔、一组试剂孔、一反应区、以及一组染料孔,所述流通孔、试剂孔、染料孔彼此一一对应,所述流通孔、试剂孔、染料孔分别与加样孔一一对应;所述加样孔、流通孔分别为开孔,所述试剂孔为预装有扩增反应试剂冻干粉的半密封孔,所述染料孔为预装有染料粉末的半密封孔;所本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种用于LAMP或RT-LAMP的整合一体式多联试纸条,包括试纸条主体,其特征是,所述试纸条主体包括上层片、下层片和中层片;所述上层片与下层片密封固连形成套状构件,所述套状构件的一端具有开口;所述中层片安置于套状构件内,所述中层片朝开口延伸出抽拉柄,所述抽拉柄穿过开口并伸出套状构件;所述中层片与套状构件构成移动副;/n所述上层片设有一组加样孔,所述下层片设有一组反应点,所述加样孔与反应点一一对应;所述中层片设有一组流通孔、一组试剂孔、一反应区、以及一组染料孔,所述流通孔、试剂孔、染料孔彼此一一对应,所述流通孔、试剂孔、染料孔分别与加样孔一一对应;/n所述加样孔、流通孔分别为开孔,所述试剂孔为预装有扩增反应试剂冻干粉的半密封孔,所述染料孔为预装有染料粉末的半密封孔;所述半密封孔的两端开口分别以透水膜封闭;所述反应区与上层片、下层片分别相贴。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于LAMP或RT-LAMP的整合一体式多联试纸条,包括试纸条主体,其特征是,所述试纸条主体包括上层片、下层片和中层片;所述上层片与下层片密封固连形成套状构件,所述套状构件的一端具有开口;所述中层片安置于套状构件内,所述中层片朝开口延伸出抽拉柄,所述抽拉柄穿过开口并伸出套状构件;所述中层片与套状构件构成移动副;
所述上层片设有一组加样孔,所述下层片设有一组反应点,所述加样孔与反应点一一对应;所述中层片设有一组流通孔、一组试剂孔、一反应区、以及一组染料孔,所述流通孔、试剂孔、染料孔彼此一一对应,所述流通孔、试剂孔、染料孔分别与加样孔一一对应;
所述加样孔、流通孔分别为开孔,所述试剂孔为预装有扩增反应试剂冻干粉的半密封孔,所述染料孔为预装有染料粉末的半密封孔;所述半密封孔的两端开口分别以透水膜封闭;所述反应区与上层片、下层片分别相贴。


2.根据权利要求1所述的用于LAMP或RT-LAMP的整合一体式多联试纸条,其特征是,所述反应点的材质为FTA滤膜或FTA卡或WhatmanNo.1滤纸。


3.根据权利要求1所述的用于LAMP或RT-LAMP的整合一体式多联试纸条,其特征是,所述试纸条具有:
中层片在外力抽拉作用下使其流通孔对准加样孔以及反应点,各流通孔分别与对应加样孔、以及对应反应点构成加样腔,经加样孔和流通孔向反应点加入待检样本的加样状态;
在加样状态基础上且在加入待检样本、洗涤并移除废液后,中层片在外力抽拉作用下使其试剂孔对准加样孔以及反应点,各试剂孔分别与对应加样孔、以及对应反应点构成加样腔,经加样孔向试剂孔加入去离子水复溶扩增反应试剂冻干粉以向反应点加入扩增反应试剂的预备状态;
在预备状态基础上且在加入扩增反应试剂后,中层片在外力抽拉作用下使其反应区覆盖所有反应点,上层片与反应区贴合使加样孔朝向中层片的下端开口保持封闭,且下层片与反应区贴合使反应点位于密闭空间内,试纸条主体的加样孔所处区域置于恒温环境中进行反应的扩增反应状态;
在扩增反应状态基础上且在扩增反应完成后,中层片在外力抽拉作用下使其染料孔对准加样孔以及反应点,各染料孔分别与对应加样孔、以及对应反应点构成加样腔,经加样孔向染料孔加入去离子水溶解染料粉末以向反应点加入染料、并使其显色以备判定结果的结果显示状态。


4.根据权利要求1所述的用于LAM...

【专利技术属性】
技术研发人员:张锦海汪春晖陈文琦韩一芳张琪叶福强王太武吕恒曹勇平王长军
申请(专利权)人:中国人民解放军东部战区疾病预防控制中心
类型:新型
国别省市:江苏;32

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