【技术实现步骤摘要】
用于以RT
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ERA法检测基孔肯雅病毒的P1型成套核酸、试剂盒以及检测方法
[0001]本专利技术涉及一种用于以RT
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ERA法检测基孔肯雅病毒的P1型成套核酸、试剂盒以及检测方法,该成套核酸包括引物和探针,属于生物
技术介绍
[0002]基孔肯雅病毒(Chikungunya Virus,CHIKV)是一种RNA病毒,属于披膜病毒科甲型病毒属,是导致基孔肯雅热(Chikungunya fever)的病原体。基孔肯雅热经伊蚊传播,以发热、皮疹及关节痛为主要临床特征。人和灵长类动物是CHIKV的主要宿主,急性期患者、隐性感染者和感染病毒的灵长类动物是该病的主要传染源。该病毒主要分布在非洲、东南亚等地区,近年来在印度洋地区造成大规模流行。我国目前以输入性病例为主,但后续大规模流行的风险不容忽视,迫切需要现场快速检测方法用于监测和预警。
[0003]病原现场快速检测方法的金标准为病原核酸检测技术,主要有变温扩增技术、等(恒)温扩增技术(如日本学者专利技术的LAMP扩增技术)、基因芯片技术三大类。其中等温扩增技术是在病原核酸的现场快速检测中最有优势。目前主要的恒温扩增技术有:环介导等温扩增(LAMP)、切口内切酶恒温扩增技术(NEAR)、依赖核酸序列扩增(NASBA)、滚环核酸扩增(RCA)、解链酶扩增(HDA)、重组酶聚合酶扩增(RPA)和酶促重组恒温扩增技术(ERA),这些技术各有特点。
[0004]逆转录酶促重组等温扩增(Reverse Transcripti ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于以RT
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ERA法检测基孔肯雅病毒的P1型成套核酸,其特征是,所述P1型成套核酸由荧光探针和引物对组成,所述引物对由正向引物和反向引物组成;所述荧光探针为CHIKV NS1 P1;所述引物对由正向引物F5和反向引物R5组成,或由正向引物F6和反向引物R6组成;所述荧光探针CHIKV NS1 P1的序列为在SEQ ID NO:1中将第31位碱基标记荧光基团、将第32位碱基替换为四氢呋喃、将第33位碱基标记淬灭基团、并在3`端加入阻断基团;正向引物F5的序列为SEQ ID NO:2,反向引物R5的序列为SEQ ID NO:4;正向引物F6的序列为SEQ ID NO:3,反向引物R6的序列为SEQ ID NO:5。2.根据权利要求1所述用于以RT
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ERA法检测基孔肯雅病毒的P1型成套核酸,其特征是,所述荧光基团为FAM,所述淬灭基团为BHQ,所述阻断基团为C3
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spacer。3.根据权利要求2所述用于以RT
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ERA法检测基孔肯雅病毒的P1型成套核酸,其特征是,所述P1型成套核酸针对的靶基因是基孔肯雅病毒的NS1基因保守序列,如SEQ ID NO:6所示。4.一种以RT
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ERA法检测基孔肯雅病毒的试剂盒,其特征是,所述试剂盒包括:含有权利要求1至3任一项所述P1型成套核酸的探针引物混合液。5.根据权利要求4所述以RT
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ERA法检测基孔肯雅病毒的试剂盒,其特征是,在探针引物混合液中,P1型成套核酸的荧光探针、正向引物、反向引物的摩尔比为1:3.5:3.5。6.根据权利要求5所述以RT
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ERA法检测基孔肯雅病毒的试剂盒,其特征是,所述试剂盒还包括RT
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荧光扩增试剂、溶解剂、激活剂、超纯水、以及CHIKV阳性对照品。7.根据权利要求6所述以RT
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ERA法检测基孔肯雅病毒的试剂盒,其特征是,所述CHIKV阳性对照品的制备过程如下:构建含有CH...
【专利技术属性】
技术研发人员:张锦海,罗正汉,陈乐如,曹勇平,王太武,蒯月璋,韩一芳,叶福强,胡丹,汪春晖,
申请(专利权)人:中国人民解放军东部战区疾病预防控制中心,
类型:发明
国别省市:
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