一种抗酶解交联透明质酸凝胶的制备方法及所得产品和应用技术

本发明专利技术公开了一种抗酶解交联透明质酸凝胶的制备方法及所得产品和应用，该方法向交联透明质酸凝胶中加入吲哚美辛微球。本发明专利技术的吲哚美辛可以抑制透明质酸酶的活性，做成微球形式既能够提高吲哚美辛在凝胶中的分散均匀程度，又可以缓慢释放长期发挥其抑制作用，增强交联透明质酸的体内维持时间。同时，吲哚美辛的添加也降低了透明质酸注射引起的局部皮肤淤血、感染、疼痛等不良反应。该方法制备的交联透明质酸凝胶，可显著降低交联剂的使用量，用在美容填充领域，有效减少了交联剂用量过多而引起的体内毒性以及机体排异和炎症反应。

Preparation method, product and application of anti enzymolysis crosslinked hyaluronic acid gel

【技术实现步骤摘要】
一种抗酶解交联透明质酸凝胶的制备方法及所得产品和应用
本专利技术涉及一种长效抗酶解交联透明质酸凝胶的制备方法及所得产品和应用，属于透明质酸

技术介绍
透明质酸，又称玻尿酸，由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡糖胺组成。透明质酸良好的粘弹性和生物相容性使其在医药、美容行业被广泛应用，经常用于手术粘弹剂和软组织填充剂。天然的透明质酸易被体内的透明质酸酶降解，目前主要通过交联来有效降低透明质酸的降解，延长体内维持时间。为了达到理想的体内维持时间，一般采用加大交联剂用量或优化交联条件和方法来提高凝胶的交联度。专利CN108250462A公开了一种交联透明质酸凝胶的制备方法，采用高低分子量透明质酸相互交联的方式达到其抗热解、抗酶解性能，该方法的交联剂用量相对较大。由于交联剂一般为二乙烯基砜(DVS)、1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)等化学交联剂，随着交联剂用量的增多，其生物相容性和透明度均降低，引发机体产生局部皮肤淤血、感染、疼痛等不良反应，还会影响交联透明质酸凝胶的粘稠度和流动性，推注性能变差，增加操作的困难程度。黄酮类、生物碱、抗炎药物等具有一定的抑制透明质酸酶活性的作用。专利CN109758607A公开了一种抵抗透明质酸酶水解的交联透明质酸凝胶，将天然黄素辅酶或其衍生物分子添加进凝胶，测定该交联透明质酸凝胶的降解率，发现72h内透明质酸酶催化效率被降低50％以上。但是该专利中天然成分或药物直接添加在透明质酸中，在体内释放较快，达不到预期的效果；此外，对于一些水相或有机相不溶的成分，其有效添加量也限制了这一方法的应用。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种抗酶解交联透明质酸凝胶的制备方法，该方法将透明质酸交联，同时向透明质酸交联产物中加入能够抑制透明质酸酶活性的吲哚美辛微球，减少了交联剂的用量，不仅能够提高透明质酸的抗酶解能力，还能降低透明质酸注射引起的局部皮肤淤血、感染、疼痛等不良反应。本专利技术还提供了按照上述方法制得的抗酶解交联透明质酸凝胶，该凝胶中含有交联透明质酸和吲哚美辛微球，吲哚美辛以微球形式存在，延长了在体内的留存时间，提高了抗降解能力。本专利技术还提供了该抗酶解交联透明质酸凝胶在美容填充领域的应用。本专利技术提供了一种抗酶解交联透明质酸凝胶的制备方法，该方法包括以下步骤：(1)将透明质酸或其盐溶解在含有交联剂的氢氧化钠溶液中进行交联反应；(2)反应后将反应凝胶调整pH值至中性，然后用含有吲哚美辛微球的中性磷酸盐缓冲液进行透析；(3)透析后，进行高压蒸汽灭菌，然后灌装在预灌封注射器中，得抗酶解交联透明质酸凝胶。进一步的，步骤(1)中，氢氧化钠溶液的浓度为0.5-1.5wt％。透明质酸或其盐在其中的质量体积浓度为5-15％。进一步的，步骤(1)中，所述透明质酸或其盐的分子量可以根据实际应用要求进行选择。其中，所述透明质酸盐可以是透明质酸的钠盐、钾盐、钙盐等，常用的为钠盐。进一步的，步骤(1)中，所述交联剂为二乙烯基砜或1,4-丁二醇二缩水甘油醚，优选为1,4-丁二醇二缩水甘油醚。交联剂的用量为透明质酸或其盐质量的2-6％。本专利技术通过透明质酸的交联和吲哚美辛微球共同作用来提高凝胶的抗酶解能力，因为吲哚美辛微球的加入，可以减少交联剂的使用量，减少交联剂过量使用带来的局部皮肤淤血、感染、疼痛等不良反应。进一步的，步骤(1)中，交联温度为37～42℃，交联时间为12～36h。进一步的，本专利技术通过吲哚美辛的加入来提高凝胶的抗酶解能力，为了提高吲哚美辛在体内的留存时间，吲哚美辛以微球的形式加入。试验发现，当微球的粒径较大时，在凝胶中容易分散不均匀或容易沉淀，且粒径较大用于软组织填充也会产生异物感。因此，本专利技术步骤(2)的吲哚美辛微球的粒径在1-50μm范围内选择。吲哚美辛的微球可以是此粒径范围中的一种，也可以是此粒径范围内的两种或两种以上。试验中惊奇的发现，当吲哚美辛微球选择10～20μm的单一粒径，或者选6～15μm和30～40μm这两个粒径范围时，不仅能保证微球在凝胶中的均匀分散，还能显著提高凝胶的抗酶解能力。更优选的，粒径为30～40μm的微球和粒径为6～15μm的微球的质量比为1:1-5。进一步的，本专利技术所用吲哚美辛微球可以采用以下方法制得：a.将吐温-80、明胶按照1:0.8-1.2的质量比在水中混合均匀，吐温-80的浓度为0.5-0.8wt％，形成水相；b.将吲哚美辛、聚乳酸按照1：48-52的质量比在二氯甲烷中溶解，吲哚美辛的浓度为0.02-0.04wt％，形成油相；c.在搅拌下将油相滴加至水相中，油相和水相的体积比为1：8～12，滴完后搅拌乳化，得乳液；d.将乳液倒入旋转蒸发仪中，室温下挥发去除二氯甲烷，然后将剩余的乳液过滤、洗涤、干燥，得吲哚美辛微球。上述微球制备方法中，步骤d中，旋转蒸发时的转速为100～500r/min，优选为260～380r/min。通过旋转蒸发转速的调整可以得到不同粒径范围的微球。进一步的，步骤(2)中，吲哚美辛微球在中性磷酸盐缓冲液中的浓度为0.5～2.5mg/mL。进一步的，步骤(2)中，反应液在含有吲哚美辛微球的中性磷酸盐缓冲液中透析24-48h。进一步的，步骤(2)中，所述中性磷酸盐缓冲液的pH为6.7～7.5，优选为6.9～7.3。中性磷酸盐缓冲液中除了吲哚美辛微球外，还含有利多卡因、维生素和多元醇中的至少一种，所述维生素优选为维生素E，所述多元醇优选为甘油。其中，利多卡因在中性磷酸盐缓冲液中的浓度为0.1-0.3wt％，维生素在中性磷酸盐缓冲液中的浓度为0.2-0.4wt％，多元醇在中性磷酸盐缓冲液中的浓度为6-10wt％。进一步的，步骤(3)中，高压蒸汽灭菌的温度为115～125℃，灭菌时间为10-20min。本专利技术上述方法所得的抗酶解交联透明质酸凝胶中交联剂含量少，使用时不良反应少。同时存在交联透明质酸和吲哚美辛微球，抗酶解能力强。因此，按照上述方法所得的产品以及该产品在美容填充领域的应用也在保护范围之内。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术凝胶中含有吲哚美辛微球，吲哚美辛可以抑制透明质酸酶的活性，做成微球形式既能够提高吲哚美辛在凝胶中的分散均匀程度，又可以缓慢释放长期发挥其抑制作用，增强交联透明质酸的体内维持时间。同时，吲哚美辛的添加也降低了透明质酸注射引起的局部皮肤淤血、感染、疼痛等不良反应。2、本专利技术凝胶能实现对透明质酸酶的长期抑制作用，同时可显著降低交联剂的使用量，用在美容填充领域能有效减少交联剂用量过多而引起的体内毒性以及机体排异和炎症反应，增加了患者的依从性。附图说明图1为动物试验的标记方式示意图，其中星号为注射位点。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明，下述说明仅是示例性的，并不对其内容进行限定。下述实施例中，如无特别说明，均为质量百分含量。下述实施例中，所用透明质酸的分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗酶解交联透明质酸凝胶的制备方法，其特征是包括以下步骤：/n（1）将透明质酸或其盐溶解在含有交联剂的氢氧化钠溶液中进行交联反应；/n（2）反应后将反应凝胶调整pH值至中性，然后用含有吲哚美辛微球的中性磷酸盐缓冲液进行透析；/n（3）透析后，进行高压蒸汽灭菌，然后灌装在预灌封注射器中，得抗酶解交联透明质酸凝胶。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗酶解交联透明质酸凝胶的制备方法，其特征是包括以下步骤：
（1）将透明质酸或其盐溶解在含有交联剂的氢氧化钠溶液中进行交联反应；
（2）反应后将反应凝胶调整pH值至中性，然后用含有吲哚美辛微球的中性磷酸盐缓冲液进行透析；
（3）透析后，进行高压蒸汽灭菌，然后灌装在预灌封注射器中，得抗酶解交联透明质酸凝胶。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是：所述吲哚美辛微球的粒径为1-50μm中的一种或几种；优选的，所述吲哚美辛微球为粒径为10~20μm的微球或者为质量比1:1-5的粒径为30~40μm的微球和粒径为6~15μm的微球的混合物。


3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征是：步骤（2）中，吲哚美辛微球在中性磷酸盐缓冲液中的浓度为0.5~2.5mg/mL。


4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征是：吲哚美辛微球的制备方法为：
a.将吐温-80、明胶按照1:0.8-1.2的质量比在水中混合均匀，吐温-80的浓度为0.5-0.8wt%，形成水相；
b.将吲哚美辛、聚乳酸按照1：48-52的质量比在二氯甲烷中溶解，吲哚美辛的浓度为0.02-0.04wt%，形成油相；
c.在搅拌下将油相滴加至水相中，油相和水相的体积比为1：8~12，滴完后搅拌乳化，得乳液；
d.将乳液倒...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵萌，魏健，耿凤，郭学平，
申请(专利权)人：华熙生物科技股份有限公司，山东华熙海御生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37