PD-L1的免疫组化检测测试片、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开一种检测癌症组织中PD‑L1表达的测试片，其中，该测试片上设置有以下区域：(1)PD‑L1表达质控对照区；(2)PD‑L1高表达对照区；(3)PD‑L1弱表达对照区；(4)PD‑L1阴性对照区；(5)PD‑L1检测区。本发明专利技术还提供具有上述测试片的试剂盒。本发明专利技术还提供一种体外检测样品中PD‑L1蛋白表达水平的检测方法。本发明专利技术的测试片和试剂盒，能够准确测定待检癌症组织中的PD‑L1抗原的表达情况，为PD‑L1阳性的检测提供高灵敏度和高特异性的评判标准。

Immunohistochemical test piece, kit and test method of PD-L1

【技术实现步骤摘要】
PD-L1的免疫组化检测测试片、试剂盒及检测方法
本专利技术涉及免疫学领域，具体涉及一种PD-L1的免疫组化诊断试剂盒和测试片。
技术介绍
程序性死亡配体-1(Programmeddeath-ligand1，PD-L1)是大小为40KDa的第一型跨膜蛋白，属于B7家族的成员，是人类中由CD274基因编码的蛋白质。PD-L1主要表达于免疫细胞和一些肿瘤组织细胞的膜表面，与肿瘤微环境中T细胞表面的受体PD-1结合，抑制T细胞的增殖和功能，使得肿瘤细胞逃避T细胞杀伤，获得免疫逃逸。PD-L1在多种肿瘤细胞中均有上调表达，如乳腺癌、非小细胞肺癌、肾癌、肠癌、食道癌、卵巢癌、宫颈癌、胰腺癌、黑色素瘤、神经胶质瘤等。宫颈癌是女性中第四大常见癌症，2018年全球新发病例约为57万例，占所有女性癌症的6.6％。大约90％的宫颈癌死亡发生在低收入和中等收入国家。中国每年新发病例达13.15万，宫颈癌死亡人数每年约5.3万，约占全部女性恶性肿瘤死亡人数的18.4％。可见宫颈癌是危害我国女性健康与生命的重要疾病。2018年6月，由美国食品和药物管理局(FDA)批准的pembrolizumab(Keytruda)，可用治疗和控制PD-L1阳性的(综合阳性评分[CPS]≥1)、复发或转移性的宫颈癌患者在化疗期间或之后的疾病进展。与此同时，FDA批准了PD-L1免疫组化22C3pharmDx作为伴随诊断。因此，利用免疫组织化学方法检测肿瘤细胞中PD-L1的表达成为预测对免疫检查点抑制剂临床用药预后的一种常规手段。由于抗PD-L1单克隆抗体药物的适应症为PD-L1阳性的患者，因此在进行临床研究乃至今后临床应用时，都需要确定备选患者组织中PD-L1抗原的表达情况。但是，目前国内市场上尚未有针对宫颈癌组织中进行PD-L1检测的试剂盒，而FDA批准的22C3pharmDx试剂盒中的质控为细胞株，不能准确的判断患者肿瘤组织PD-L1抗原的表达情况。另外，由于受抗体本身特异性和灵敏度所限，相同抗原所产生的抗体对同一组织的表现也往往存在很大的差异。因此，目前医学上迫切需要开发一种能够快速、便捷且准确地进行PD-L1相关癌症尤其是宫颈癌中PD-L1蛋白表达检测的体外诊断试剂盒，且该试剂盒可以携带配套的测试片用于评估组织中PD-L1的表达。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题之一是，提供一种快速、便捷且准确地进行PD-L1相关癌症组织尤其是宫颈癌组织中PD-L1蛋白检测的免疫组化诊断测试片和试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术针对人PD-L1蛋白提供一种检测癌症组织中的PD-L1表达的测试片和试剂盒，能够准确测定待检癌症组织中的PD-L1抗原的表达情况，为PD-L1阳性的检测提供高灵敏度和高特异性的评判标准。本专利技术所要解决的技术问题之二是，提供一种检测癌症组织中PD-L1抗原表达水平的检测方法。本专利技术的第一个方面，提供了一种检测癌症组织中PD-L1表达的测试片，所述的测试片上包括以下区域：(1)PD-L1表达质控对照区，所述PD-L1表达质控对照区设置有扁桃体组织切片；(2)PD-L1高表达对照区，所述PD-L1高表达对照区设置有PD-L1高表达的癌症组织切片；(3)PD-L1弱表达对照区，所述PD-L1弱表达对照区设置有PD-L1弱表达的癌症组织切片；(4)PD-L1阴性对照区，所述PD-L1阴性对照区设置有PD-L1无表达的组织切片；(5)PD-L1检测区，所述PD-L1检测区用于放置待检测的癌症组织。作为本专利技术的一个优选例，所述的检测癌症组织中PD-L1表达的测试片中，所述PD-L1表达质控对照区设置的扁桃体组织切片选自含有PD-L1高表达、弱表达和无表达区域的扁桃体组织切片。作为本专利技术的一个优选例，所述的检测癌症组织中PD-L1表达的测试片中，所述的PD-L1高表达的癌症组织切片选自PD-L1表达评分CPS(联合阳性评分)≥50的癌症组织切片。作为本专利技术的一个优选例，在所述的检测癌症组织中PD-L1表达的测试片中，所述的PD-L1弱表达的癌症组织切片选自PD-L1表达评分CPS≥1且≤10的癌症组织切片。以1≤CPS≤10作为CPS阳性阈值的区间。PD-L1弱表达的癌症组织切片的联合阳性评分CPS应与CPS阳性阈值相对应。作为本专利技术的一个优选例，在所述的检测癌症组织中PD-L1表达的测试片中，所述PD-L1无表达的组织切片选自PD-L1无表达的正常组织或者PD-L1表达评分CPS＜1的癌症组织切片。作为本专利技术的一个优选例，在所述的检测癌症组织中PD-L1表达的测试片中，所述的各组织切片为石蜡包埋的切片。作为本专利技术的一个优选例，在所述的检测癌症组织中PD-L1表达的测试片中，所述的组织切片的厚度为3～5μm。作为本专利技术的一个优选例，在所述的检测癌症组织中PD-L1表达的测试片中，所述的癌症组织为宫颈癌组织。在本专利技术的第二方面，提供了一种宫颈癌的PD-L1免疫组化诊断试剂盒，所述试剂盒包含上述的检测癌症组织中PD-L1表达的测试片。作为本专利技术的一个优选例，在所述的宫颈癌的PD-L1免疫组化诊断试剂盒中，所述试剂盒还包含装有PD-L1单克隆抗体试剂的容器。即，所述试剂盒还包含PD-L1单克隆抗体试剂。在本专利技术的第三方面，提供了一种体外检测样品中PD-L1蛋白表达水平的检测方法，所述的样品是癌症组织，所述方法包括步骤：1)将待检测组织制成石蜡包埋的待测组织切片；2)将所述待测组织切片置于测试片中的PD-L1检测区，进行免疫组化染色检测，观察质控对照区的染色情况是否正常；所述测试片上至少具有以下区域：PD-L1表达质控对照区，所述的PD-L1表达质控对照区设置有扁桃体组织切片；PD-L1高表达对照区，所述的PD-L1高表达对照区设置有PD-L1高表达的癌症组织切片；PD-L1弱表达对照区，所述的PD-L1弱表达对照区设置有PD-L1弱表达的癌症组织切片；PD-L1阴性对照区，所述的PD-L1阴性对照区设置有PD-L1无表达的组织切片；PD-L1检测区，所述的PD-L1检测区用于放置待检测的癌症组织；3)如果所述PD-L1表达质控对照区染色正常，则进行待测组织的染色结果判定：将待测组织切片的染色情况CPS评分与所述测试片上的PD-L1高表达对照区、PD-L1弱表达对照区和PD-L1阴性对照区的组织切片的染色情况CPS评分进行比对，结果判定如下：若待检组织切片CPS评分＜PD-L1弱表达对照区的CPS阳性阈值，判为阴性(－)；若待检组织切片CPS评分≥PD-L1弱表达对照区的CPS阳性阈值，判为阳性(+)。其中，PD-L1阴性对照区和PD-L1高表达对照区在此作为CPS判读标准的有效质控指标，便于统一CPS评分。与现有技术相比较，本专利技术的有益效果在于：1)本专利技术专利首次公开了一种可简便的检测癌症组织(尤其是宫颈癌组织)中PD-L1蛋白的免疫组化诊断试剂和组织测试本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测癌症组织中PD-L1表达的测试片，其特征在于，所述的测试片上设置有以下区域：/n(1)PD-L1表达质控对照区，所述PD-L1表达质控对照区设置有扁桃体组织切片；/n(2)PD-L1高表达对照区，所述PD-L1高表达对照区设置有PD-L1高表达的癌症组织切片；/n(3)PD-L1弱表达对照区，所述PD-L1弱表达对照区设置有PD-L1弱表达的癌症组织切片；/n(4)PD-L1阴性对照区，所述PD-L1阴性对照区设置有PD-L1无表达的组织切片；/n(5)PD-L1检测区，所述PD-L1检测区用于放置待检测的癌症组织。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测癌症组织中PD-L1表达的测试片，其特征在于，所述的测试片上设置有以下区域：
(1)PD-L1表达质控对照区，所述PD-L1表达质控对照区设置有扁桃体组织切片；
(2)PD-L1高表达对照区，所述PD-L1高表达对照区设置有PD-L1高表达的癌症组织切片；
(3)PD-L1弱表达对照区，所述PD-L1弱表达对照区设置有PD-L1弱表达的癌症组织切片；
(4)PD-L1阴性对照区，所述PD-L1阴性对照区设置有PD-L1无表达的组织切片；
(5)PD-L1检测区，所述PD-L1检测区用于放置待检测的癌症组织。


2.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述PD-L1表达质控对照区设置的扁桃体组织切片选自同时具有PD-L1高表达区域、PD-L1弱表达区域和PD-L1无表达区域的扁桃体组织切片。


3.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述的PD-L1高表达的癌症组织切片选自PD-L1表达评分CPS≥50的宫颈癌组织切片。


4.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述的PD-L1弱表达的癌症组织切片选自PD-L1表达评分CPS≥1且≤10的癌症组织切片。


5.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述PD-L1无表达的组织切片选自PD-L1无表达的正常组织或者PD-L1表达评分CPS＜1的癌症组织切片。


6.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述的组织切片为石蜡包埋的切片。


7.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述的组织切片的厚度为3～5μm。

【专利技术属性】
技术研发人员：施丽君，屈国君，刘飞，薛伟民，李宇，杭红，
申请(专利权)人：苏州药明泽康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32