基于雄激素受体的变异体的前列腺癌患者筛查方法技术

根据本发明专利技术的一实施例，提供可通过血中循环癌细胞及雄激素受体(AR)变异体的光学图像分析来分析前列腺癌患者是否适用雄激素受体(AR)靶治疗的前列腺癌患者筛查方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于雄激素受体的变异体的前列腺癌患者筛查方法
本专利技术涉及前列腺癌患者筛查方法，更详细地，涉及利用血中循环癌细胞并通过雄激素受体(AR)变异体及血中循环癌细胞的光学图像分析的前列腺癌患者筛查方法。
技术介绍
前列腺癌为男性身上发病的常见癌症之一，是在西方第二个常见癌症，在东方第五个常见癌症。因前列腺癌死亡的大部分是对现有的雄激素剥夺疗法无反应的转移性疾病发病而导致的。雄激素剥夺疗法从1940年代起用作前列腺癌患者的标准治疗。即使剥夺雄激素，最终大部分患者的疾病也在执行中。具体可见，正常前列腺中的雄激素受体(androgenreceptor)对将用于正常前列腺功能的蛋白质转录执行编码的基因的调节和前列腺的发育起到主要作用。大部分前列腺癌为雄激素依赖型癌。当前列腺癌的肿瘤细胞中雄激素的水平增加时，促进雄激素受体(AR，androgenreceptor)信号传递(signaling)。这最终调节与肿瘤细胞的细胞周期调节、生存、生长、肿瘤形成相关的基因表达。传统上，这种前列腺癌的治疗通过用于减少雄激素的量和雄激素受体信号传递的外科去势或化学去势实现。但是，90％左右的患者即使接受这种治疗，之后癌症同样复发，并以去势抵抗性前列腺癌(CRPC，Castration-ResistantProstateCancer)的形态发生肿瘤增殖。此时，很多前列腺癌患者呈现异常的雄激素受体剪接变体(Androgenreceptorsplicevariant)的表达增加的形态。其中，雄激素受体-v7对C末端配体结合域(C-terminalLBD(ligand-bindingdomain))被切割而不存在的雄激素受体蛋白质执行编码，这种结构的雄激素受体-v7始终维持活性状态，因而可促进靶基因的活性。并且，雄激素受体-V567变异体抑制恩杂鲁胺(enzalutamide)的药效。因而，就去势抵抗性前列腺癌而言，对恩杂鲁胺之类的现有的抗癌剂呈现抵抗性，并执行肿瘤增殖。识别对前列腺癌治疗剂产生反应的患者或看似对其产生反应的患者可成为用于有效治疗前列腺癌的目标。前列腺癌可利用血清前列腺特异性抗原(PSA，ProstateSpecificAntigen)检查、超声波检查、组织活检等的方法来执行诊断，雄激素受体-v7的表达形态能够以组织活检执行检查。但是，就组织活检而言，难以从患者身上反复采集，且可对患者带来身体负担。因此，当前需要可减少患者的负担的同时确认雄激素受体-V7和雄激素受体-V567的技术。
技术实现思路
专利技术所要解决的问题本专利技术的目的在于，提供通过光学图像分析来探测血中循环癌细胞中表达的雄激素受体变异体，由此分析是否可适用雄激素靶治疗，从而筛查对于上述雄激素靶治疗的前列腺癌患者的方法。本专利技术要实现的技术问题不局限于以上提及的技术问题，本专利技术所属
的普通技术人员可从以下记载内容中明确地理解未提及的其他技术问题。用于解决问题的方案为了实现上述技术问题，本专利技术一实施方式的前列腺癌患者筛查方法可包括：从前列腺癌患者中获取血液的步骤；从上述血液中利用生物芯片来分离血中循环癌细胞的步骤；将分离的上述血中循环癌细胞和与血中循环癌细胞特异性结合的荧光标记物及与雄激素受体变异体特异性结合的荧光标记物进行反应的步骤；将与上述荧光标记物进行反应的血中循环癌细胞及雄激素受体变异体作为对象接收多个波长范围的各个光学图像的步骤；在上述多个波长范围的整个或一部分光学图像中测定上述血中循环癌细胞及上述雄激素受体变异体的荧光强度来执行第一次过滤的步骤；在上述多个波长范围的整个或一部分光学图像中测定上述血中循环癌细胞的形态学(morphology)来执行第二次过滤的步骤；在将上述多个波长范围的各个光学图像中的整个或一部分合并的整合图像中测定上述血中循环癌细胞的形态学来执行第三次过滤的步骤；在执行上述第三次过滤的光学图像中探测雄激素受体变异体是否定位(localization)于血中循环癌细胞的核的步骤；以及通过探测上述定位来分析前列腺癌患者是否适用雄激素靶治疗的步骤。在本专利技术的实施例中，与上述血中循环癌细胞特异性结合的荧光标记物可以为选自由4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)、对波形蛋白(vimentin)表示特异性的抗体、对前列腺特异性抗原(PSA，prostatespecificantigen)表示特异性的抗体、对上皮细胞粘附分子(EpCAM)表示特异性的抗体及对细胞角蛋白(CK)表示特异性的抗体组成的组中的至少一种。在本专利技术的实施例中，上述雄激素受体变异体可以为雄激素受体-V7或雄激素受体-V567。在本专利技术的实施例中，在接收上述光学图像的步骤中，上述多个波长范围的光学图像可包括蓝色波长范围图像、绿色波长范围图像及红色波长范围图像。在本专利技术的实施例中，可在上述蓝色波长范围图像中执行上述第一次过滤的步骤及执行上述第二次过滤的步骤来判别血中循环癌细胞的细胞核。在本专利技术的实施例中，可在上述绿色波长范围图像和上述红色波长范围图像中的一个以上图像中执行上述第一次过滤的步骤来判别血中循环癌细胞的细胞膜。在本专利技术的实施例中，上述血中循环癌细胞的形态学可包括细胞面积、细胞大小及真圆度(circularity)中的一个以上。在本专利技术的实施例中，执行上述第一次过滤的步骤可包括：在上述多个波长范围的整个或一部分光学图像中测定血中循环癌细胞的大小的步骤；以及设定由相比于测定的上述细胞的大小大预先设定的比率或量的多边形或圆形成的区域，并在上述区域内测定血中循环癌细胞的荧光强度来执行第一次过滤的步骤。在本专利技术的实施例中，分离上述血中循环癌细胞的步骤可在大气压为1000至1020hPa的条件下实现。在本专利技术的实施例中，上述生物芯片可以为由牛血清白蛋白(BSA)溶液涂敷的高密度微芯片。在本专利技术的实施例中，上述高密度微芯片可具有尺寸特异性。在本专利技术的实施例中，上述牛血清白蛋白溶液能够以0.05至0.15％的浓度进行涂敷。在本专利技术的实施例中，上述前列腺癌可以为去势抵抗性前列腺癌(castration-resistantprostatecancer)。专利技术效果根据本专利技术的实施例，可通过血中循环癌细胞中表达的雄激素受体-V7的图像分析来挑选出可适用雄激素靶治疗法的前列腺癌患者。本专利技术的效果不局限于上述的效果，应被理解为包括可从本专利技术的
技术实现思路
或权利要求书中记载的专利技术的结构推论的所有效果。附图说明图1表示分离血中循环癌细胞的过程。图2为拍摄利用高密度微芯片来分离的血中循环癌细胞的照片。图3为表示本专利技术的培养液中培养的血中循环癌细胞的生长及分裂和一般的培养液中培养的血中循环癌细胞的生长及分裂的图表。图4为表示利用本专利技术的培养液由本专利技术中使用的水凝胶涂敷的培养板中培养的血中循环癌细胞的生长及分裂和一般的培养板中培养的血中循环癌细胞的生长及分裂的图表。图5为蓝色、绿色及红色波长范围的靶细胞光学图像的样品照片。...

【技术保护点】
1.一种前列腺癌患者筛查方法，其特征在于，包括：/n从前列腺癌患者中获取血液的步骤；/n从所述血液中利用生物芯片来分离血中循环癌细胞的步骤；/n将分离的所述血中循环癌细胞和与血中循环癌细胞特异性结合的荧光标记物及与雄激素受体变异体特异性结合的荧光标记物进行反应的步骤；/n将与所述荧光标记物进行反应的血中循环癌细胞及雄激素受体变异体作为对象接收多个波长范围的各个光学图像的步骤；/n在所述多个波长范围的整个或一部分光学图像中测定所述血中循环癌细胞及所述雄激素受体变异体的荧光强度来执行第一次过滤的步骤；/n在所述多个波长范围的整个或一部分光学图像中测定所述血中循环癌细胞的形态学来执行第二次过滤的步骤；/n在将所述多个波长范围的各个光学图像中的整个或一部分合并的整合图像中测定所述血中循环癌细胞的形态学来执行第三次过滤的步骤；/n在执行所述第三次过滤的光学图像中探测雄激素受体变异体是否定位于血中循环癌细胞的核的步骤；以及/n通过探测所述定位来分析前列腺癌患者是否适用雄激素靶治疗的步骤。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170818 KR 10-2017-01044771.一种前列腺癌患者筛查方法，其特征在于，包括：
从前列腺癌患者中获取血液的步骤；
从所述血液中利用生物芯片来分离血中循环癌细胞的步骤；
将分离的所述血中循环癌细胞和与血中循环癌细胞特异性结合的荧光标记物及与雄激素受体变异体特异性结合的荧光标记物进行反应的步骤；
将与所述荧光标记物进行反应的血中循环癌细胞及雄激素受体变异体作为对象接收多个波长范围的各个光学图像的步骤；
在所述多个波长范围的整个或一部分光学图像中测定所述血中循环癌细胞及所述雄激素受体变异体的荧光强度来执行第一次过滤的步骤；
在所述多个波长范围的整个或一部分光学图像中测定所述血中循环癌细胞的形态学来执行第二次过滤的步骤；
在将所述多个波长范围的各个光学图像中的整个或一部分合并的整合图像中测定所述血中循环癌细胞的形态学来执行第三次过滤的步骤；
在执行所述第三次过滤的光学图像中探测雄激素受体变异体是否定位于血中循环癌细胞的核的步骤；以及
通过探测所述定位来分析前列腺癌患者是否适用雄激素靶治疗的步骤。


2.根据权利要求1所述的前列腺癌患者筛查方法，其特征在于，与所述血中循环癌细胞特异性结合的荧光标记物为选自由4′,6-二脒基-2-苯基吲哚、对波形蛋白表示特异性的抗体、对前列腺特异性抗原表示特异性的抗体、对上皮细胞粘附分子表示特异性的抗体及对细胞角蛋白表示特异性的抗体组成的组中的至少一种。


3.根据权利要求1所述的前列腺癌患者筛查方法，其特征在于，所述雄激素受体变异体为雄激素受体-V7或雄激素受体-V567。


4.根据权利要求1所述的前列腺癌患者筛查方法，其特征在于，在接收所述光学图像的步骤中，所述多个波长范围的光学图像...

【专利技术属性】
技术研发人员：全炳熙，
申请(专利权)人：西托根有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR