一种检测虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒指纹图谱的高效液相方法组成比例

本发明专利技术提供了一种可适用于整体控制虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒质量的高效液相指纹图谱检测方法。本发明专利技术的HPLC指纹图谱检测方法能整体控制虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒中的特征成分，确保虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒整体质量的稳定，且方法梯度洗脱时间更短，所得指纹图谱质量更佳，特征共有峰信息更多，精密度高，稳定性好，重复性好，准确度高。

A HPLC method for the determination of fingerprint of Polygonum cuspidatum, decoction pieces, standard decoction and formula granules

【技术实现步骤摘要】
一种检测虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒指纹图谱的高效液相方法
本专利技术具体涉及一种虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒指纹图谱的HPLC检测方法。
技术介绍
虎杖为蓼科植物虎杖PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.的干燥根茎和根，始载于《雷公炮炙论》，具有利湿退黄，清热解毒，散瘀止痛，止咳化痰等功效，用于湿热黄疸，淋浊，带下，风湿痹痛，痈肿疮毒，水火烫伤，经闭，癥瘕，跌打损伤，肺热咳嗽，为临床常用中药品种。虎杖含化学成分较多且复杂，其中以虎杖苷为代表的二苯乙烯类成分和以大黄素为代表的蒽醌类成分，具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、降血糖血脂等广泛药理作用，是虎杖的主要有效部位，是虎杖发挥临床疗效的基础。因此，要确保虎杖的临床疗效，需要对虎杖苷、大黄素等药效成分进行质量控制。目前，《中国药典》2015年版一部虎杖项下收载了采用高效液相色谱分别单独测定其中虎杖苷、大黄素含量的方法，但尚未建立虎杖的指纹图谱检测方法及标准。其他有少量文献研究建立了虎杖饮片(蔺红伟，朴淑娟，江春霞，等.虎杖饮片指纹图谱的研究及其耐用性考察[J].药学实践杂志，2016，34(2)：174‐176,187.)、配方颗粒(梁俊，郑江萍，黄良永.虎杖配方颗粒的HPLC指纹图谱研究[J].中国药师2015，18(4)：578‐582)、水煎液(韦红言，温庆伟，陆东，等.虎杖饮片、水煎剂、配方颗粒高效液相色谱特征图谱相关性研究[J].中国药业，2014，，23(18)：37‐40的指纹图谱)。然而，上述文献方法存在如下问题：一是流动相梯度洗脱程序设计要么步骤较多，所需检测时间较长，要么太简单，时间太短，分离所得特征色谱峰太少；二则检测波长不统一，较为混乱，不同检测波长下，色谱峰图质量与信息存在较大差异，如采用230nm为检测波长时，色谱图基线漂移、杂质峰较多，影响色谱图质量不太理想，特征峰的色谱分离不佳，而采用306nm为检测波长时，特征色谱峰明显减少。因此，针对虎杖的特征共性成分，建立一个流动相梯度洗脱程序、检测波长最优的指纹图谱检测方法，有利于整体高效地控制虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的内在质量，确保虎杖的临床疗效。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种适用于虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒指纹图谱测定的HPLC检测方法。本专利技术的整体控虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的HPLC指纹图谱的检测方法，包括如下操作步骤：1)参照物溶液制备：取对照品，溶解，即得参照物溶液；2)供试品溶液制备：取虎杖药材或饮片或标准汤剂或配方颗粒，经提取，取续滤液，即得供试品溶液；3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；检测波长：230～306nm；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱程序如下：其中，步骤1)所述对照品包括：虎杖苷、大黄素、白藜芦醇三种对照品。其中，步骤1)所述溶解是加入甲醇溶解。其中，步骤2)所述提取溶剂是指甲醇、水和稀乙醇中任一一种，加入溶剂量为样品的200倍～400倍，采用超声或回流提取，提取时间为20～40分钟。进一步地，所述提取方法如下：取虎杖标准汤剂粉末，加入200倍甲醇，称定重量，超声或回流处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得虎杖标准汤剂粉末的供试品溶液。取虎杖配方颗粒粉末，加入400倍甲醇，称定重量，超声或回流处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得虎杖配方颗粒的供试品溶液。取虎杖药材或饮片粉末，加入66.7倍甲醇，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得虎杖药材或饮片的供试品溶液。其中，所用色谱柱为AgilentZORBAXExtend‐C18(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)。其中，所述检测波长为280nm。其中，所述色谱条件还包括：流速为每分钟0.8ml～1.2ml/分，柱温为20～30℃，进样量为5～20μL。进一步地，所述色谱条件还包括：流速为1.0mL/min，柱温为25℃，进样量为10μL。进一步地，按照上述检测方法，测定得虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的指纹图谱的特征在于：(1)呈现10个共有峰，其中3个峰应与虎杖苷、大黄素、白藜芦醇三种参照物峰的保留时间相同；(2)以虎杖苷参照物相应的峰为S峰，计算10个共有峰的相对保留时间，依次应为：0.727(峰1)、1.000(峰2，S)、1.442(峰3)、1.758(峰4)、1.931(峰5)、1.998(峰6)、2.240(峰7)、2.347(峰8)、2.673(峰9)、4.529(峰10)，且各相对保留时间应在规定值的±5％之内。本专利技术的HPLC指纹图谱检测方法能整体控制虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒中的特征成分，确保虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒整体质量的稳定，且方法梯度洗脱时间更短，所得指纹图谱质量更佳，特征共有峰信息更多，精密度高，稳定性好，重复性好，准确度高。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1虎杖药材、饮片对照指纹图谱，峰2‐虎杖苷(S峰)；峰4‐白藜芦醇；峰10‐大黄素图2虎杖标准汤剂对照图谱，峰2‐虎杖苷(S峰)；峰4‐白藜芦醇；峰10‐大黄素图3虎杖配方颗粒对照图谱，峰2‐虎杖苷(S峰)；峰4‐白藜芦醇；峰10‐大黄素具体实施方式仪器与试药1仪器高效液相色谱仪：安捷伦1260型高效液相色谱仪、Waters2695‐2996型高效液相色谱仪、岛津20AD型高效液相色谱仪；电子天平：ME204E/02、MS205DU、XP26(梅特勒‐托利多仪器有限公司)；超纯水机：细胞型1810A(上海摩勒科学仪器有限公司)；超声波清洗器：KQ5200DB型(600W，40KHz；昆山市超声仪器有限公司)；色谱柱：AgilentZORBAXExtend‐C18(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)。2试药乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。虎杖苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111575‐201603，含量以87.3％计)；白藜芦醇对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110756‐201512，含量以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的HPLC指纹图谱的检测方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：/n1)参照物溶液制备：取对照品，溶解，即得参照物溶液；/n2)供试品溶液制备：取虎杖药材或饮片或标准汤剂或配方颗粒，经提取，取续滤液，即得供试品溶液；/n3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：230～306nm；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱程序如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种虎杖药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒的HPLC指纹图谱的检测方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：
1)参照物溶液制备：取对照品，溶解，即得参照物溶液；
2)供试品溶液制备：取虎杖药材或饮片或标准汤剂或配方颗粒，经提取，取续滤液，即得供试品溶液；
3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：230～306nm；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱程序如下：

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2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)所述对照品包括虎杖苷、大黄素、白藜芦醇三种对照品。


3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤1)所述溶解是加入甲醇溶解。


4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述提取溶剂是指甲醇、水和稀乙醇中任一一种，加入溶剂量为样品的200倍～400倍，采用超声或回流提取，提取时间为20～40分钟。


5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述提取方法如下：
取虎杖标准汤剂粉末，加入200倍甲醇，称定重量，超声或回流处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得虎杖标准汤剂粉末的供试品溶液。
取虎杖配方颗粒粉末，加入400倍甲醇，称定重量，超声或回流处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即...

【专利技术属性】
技术研发人员：周厚成，胡昌江，李文兵，刘聪，陈玉梅，
申请(专利权)人：四川新绿色药业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51