本发明专利技术提供了一种蛤蚧提取物及其制剂的HPLC特征图谱检测方法，包括：A)将蛤蚧原料采用溶剂提取，得到待测液；B)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到蛤蚧原料的HPLC特征图谱；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为C18柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.05％乙酸水溶液，梯度洗脱。本发明专利技术采用高效液相色谱法，选用乙腈‑0.05％乙酸为流动相进行梯度洗脱，以尿嘧啶、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、肌苷、鸟苷为参照物，建立了蛤蚧提取物及其制剂的HPLC特征图谱，重复性、精密度好，方法稳定，可靠，可以对蛤蚧提取物及其制剂的质量进行控制。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析，尤其是涉及一种蛤蚧提取物及其制剂的hplc特征图谱检测方法。
技术介绍
1、蛤蚧为壁虎科动物蛤蚧gekko gecko linnaeus的干燥体。收载于《中国药典》2020年版一部，具有补肺益肾，纳气定喘，助阳益精的功效。用于肺肾不足，虚喘气促，劳嗽咳血，阳痿，遗精。蛤蚧提取物是由蛤蚧饮片加水煎煮后制得，目前，还未有全面反映和控制蛤蚧提取物的检测方法
2、因此，建立统一蛤蚧提取物及其制剂特征图谱测定方法，有利于整体评价蛤蚧相关工艺过程的科学性、合理性，更能整体控制蛤蚧提取物及其制剂的内在质量，确保蛤蚧配方颗粒的临床疗效。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种蛤蚧提取物及其制剂的hplc特征图谱检测方法，本专利技术构建的蛤蚧提取物的hplc特征图谱方法稳定，可靠，可以对蛤蚧提取物的质量进行控制。
2、本技术建立了一种蛤蚧提取物及其制剂的特征图谱鉴别方法，指认出尿嘧啶、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、肌苷、鸟苷6个特征峰。方法稳定性高，重复性良好，能有效全面反映了蛤蚧提取物及其制剂的状况，为其后续质量标准的制定提供了依据。
3、《中国药典》2020年版蛤蚧项下规定为壁虎科动物蛤蚧gekko gecko linnaeus的干燥体。全年均可捕捉，除去内脏，拭净，用竹片撑开，使全体扁平顺直，低温干燥。在1989年，我国就将蛤蚧列为国家二级保护动物并制定了相关保护措施。目前，药材资源主要来源于国外进口。
4、本专利技术提供了一种蛤蚧提取物及其制剂的hplc特征图谱检测方法，包括：
5、a)将蛤蚧原料采用溶剂提取，得到待测液；
6、b)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到蛤蚧原料的hplc特征图谱；
7、所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.05％乙酸水溶液，梯度洗脱。
8、本专利技术提供的一种蛤蚧提取物及其制剂的hplc特征图谱检测方法首先取蛤蚧原料，溶剂提取，得到待测液。所述溶剂优选为10％甲醇。
9、本专利技术采用上述提取溶剂色谱峰信息量大，效果好。
10、本专利技术所述蛤蚧原料包括蛤蚧提取物或制剂。本专利技术对其不进行限定，上述原料皆可通过本专利技术的方法进行质量控制和定性检测。
11、按照本专利技术，所述蛤蚧饮片的制备优选为：取蛤蚧药材，除去鳞片及头足，切成小块。
12、本专利技术所述蛤蚧提取物优选的制备方法为：
13、取蛤蚧饮片100g，加水煎煮两次，一煎加10倍水，浸泡30分钟，煮沸，保持微沸煎煮60分钟，200目筛网过滤，立即冷却至室温；二煎加8倍水，煮沸，保持微沸煎煮40分钟，200目筛网过滤，合并水煎液，立即冷却至室温，浓缩，冷冻干燥，分装，即得。
14、按照本专利技术，所述蛤蚧原料的质量g和10％甲醇ml的比为0.5:(10～50)；所述超声功率为600w，频率40khz。
15、一些实施例中，所述蛤蚧原料的质量g和10％甲醇ml的比为0.5:25。
16、在溶剂加入量为25ml时，特征图谱色谱峰面积适中。
17、本专利技术超声提取时间为20～40min；优选为30min，在不同提取时间条件下，色谱图效果基本一致。为保障提取充分，提取时间为30min时，色谱图峰形与分离度较好。
18、上述提取溶剂为10％甲醇。
19、本专利技术提取溶剂为10％甲醇时，各特征峰峰形好，分离度适中。
20、本专利技术的方法还包括制备对照品参照物溶液的制备和对照药材溶液的制备。
21、对照品参照物溶液的制备：分别取尿嘧啶、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、肌苷、鸟苷，采用10％甲醇溶解，得到参照物溶液；所述参照物溶液中尿嘧啶、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、肌苷、鸟苷的浓度均为40μg/ml。上述溶剂为10％的甲醇。10％甲醇作为提取溶剂时色谱峰信息量大且各色谱峰分离效果好。
22、将所述对照品参照物溶液采用高效液相色谱法测定，得到参照物的色谱图；并根据参照物的色谱图对蛤蚧的hplc特征图谱的成分进行定性测定。
23、本专利技术所述流动相a为乙腈，流动相b为0.05％乙酸水溶液溶液，梯度洗脱。
24、本专利技术所述梯度洗脱优选具体为：
25、0～18min，a相：0％、b相：100％；
26、18～19min，a相：0％～0.5％、b相：100％～99.5％；
27、19～24min，a相：0.5％、b相：99.5％；
28、24～27min，a相：0.5％～3.5％、b相：99.5％～96.5％；
29、27～50min，a相：3.5％、b相：96.5％。
30、本专利技术在上述洗脱梯度下基线分离好，各个峰分离度好，基线平稳。
31、c18色谱柱，规格为柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm。本专利技术人发现，c18上述规格的色谱柱都能满足本专利技术的检测要求。
32、色谱柱温度20～30℃，优选为25℃。
33、本专利技术在柱温为25℃时，色谱图峰形较为对称，分离度较好，保留时间较适宜。
34、本专利技术流动相流速优选为0.6～0.8ml/min，优选为0.7ml/min。
35、本专利技术发现流速0.7ml/min下各色谱峰分离度较好，峰形较好，峰型对称且保留时间合适，作为最优选方案。
36、本专利技术检测波长优选为250nm。
37、本专利技术人发现，在250nm处色谱信息丰富，各成分均有较好吸收，响应值适中，色谱峰信息量较大，各峰分离度较好，基线平稳。
38、本专利技术进样量为10μl。
39、本专利技术的有益效果是，一个液相色谱条件下，以指纹图谱控制蛤蚧提取物及其制剂的物质群，以尿嘧啶、鸟嘌呤、次黄嘌呤、黄嘌呤、肌苷、鸟苷对指纹图谱进行定位；能够大大降低检测的成本，实现定性检测。
40、采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对蛤蚧提取物及其制剂的hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由8个特征峰构成的蛤蚧的hplc标准特征图谱，其中峰1：尿嘧啶；峰3：鸟嘌呤；峰5(s)：次黄嘌呤；峰6：黄嘌呤；峰7肌苷；峰8鸟苷。
41、在所述蛤蚧提取物及其制剂标准特征图谱中，以次黄嘌呤为参照峰s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，所述相对保留时间在规定值的±10％之内，所述规定值分别为：规定值为0.55(峰1)、0.61(峰2)、0.82(峰3)、0.88(峰4)、1.23(峰6)、1.99(峰7)、2.07(峰8)。
42、在所述蛤蚧提取物及其制剂标准特征图谱中，根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出且峰相对较高的原则，共选择8个重复性较好的峰作为特征峰。规定为：供试品色谱中应呈现8个特征峰，应与对照药材参照物色谱中的8个特征峰保留时间相对应，其中峰5应与对本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.一种蛤蚧提取物及其制剂的HPLC特征图谱检测方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括制备对照品参照物溶液的制备；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为C18色谱柱，规格为柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm，理论板数按次黄嘌呤峰计算应不低于5000；色谱柱温度为25℃。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流动相流速为0.7mL/min；柱温为25℃，检测波长为250nm；进样量为10μL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对蛤蚧提取物及其制剂的HPLC特征图谱的相似度进行评价，得到由8个特征峰构成的蛤蚧提取物及其制剂的HPLC标准特征图谱，其中峰1：尿嘧啶；峰3：鸟嘌呤；峰5(S)：次黄嘌呤；峰6：黄嘌呤；峰7肌苷；峰8鸟苷。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述蛤蚧提取物及其制剂标准特征图谱中，以次黄嘌呤为参照峰S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间在规定值的±10％之内，所述规定值分别为：规定值为0.55(峰1)、0.61(峰2)、0.82(峰3)、0.88(峰4)、1.23(峰6)、1.99(峰7)、2.07(峰8)；
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A)具体为：将蛤蚧原料采用10％甲醇超声处理，放冷，过滤，即得。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛤蚧原料的质量g和10％甲醇mL的比为0.5:(10～50)；所述超声功率为600W，频率40kHz。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛤蚧原料包括蛤蚧提取物或制剂。
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【技术特征摘要】
1.一种蛤蚧提取物及其制剂的hplc特征图谱检测方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括制备对照品参照物溶液的制备；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为c18色谱柱，规格为柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm，理论板数按次黄嘌呤峰计算应不低于5000；色谱柱温度为25℃。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流动相流速为0.7ml/min；柱温为25℃，检测波长为250nm；进样量为10μl。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对蛤蚧提取物及其制剂的hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由8个特征峰构成的蛤蚧提取物及其制剂的hplc标准特征图谱，其中峰1：尿嘧啶...
【专利技术属性】
技术研发人员：周厚成，周靖惟，罗俊，张恒，蒋英，张静，杜佳俊，黄宇，钟磊，费文波，胡昌江，
申请(专利权)人：四川新绿色药业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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