【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分析检测，尤其是涉及一种制黄精的hplc特征图谱构建方法。
技术介绍
1、黄精为百合科黄精属滇黄精polygonatum kingianum coll.et hemsl.、黄精polygonatum sibiricum red.或多花黄精polygonatum cyrtonema hua的干燥根茎。用药历史悠久，历代本草多有记载。现收载于《中国药典》2020年版一部。味甘，性平。归脾、肺、肾经。具有补气养阴，健脾，润肺，益肾的功效。用于脾胃气虚，体倦乏力，胃阴不足，口干食少，肺虚燥咳，劳嗽咳血，精血不足，腰膝酸软，须发早白，内热消渴。制黄精为黄精的炮制品，其炮制方法为：取黑豆，熬取浓汁与黄精共煮(黑豆汁平过药面)，沸后文火煮至水尽，取出，微晾，再置容器内蒸5～8h；或黑豆汁拌浸黄精，润透心，蒸至内外呈滋润黑色，取出，切厚片，干燥。每100kg黄精，用黑豆10kg。经过炮制后，增强了健脾益肾作用。制黄精化学成分多样，主要有甾体皂苷类、黄酮类、苯丙素类、生物碱类、多糖等成分。国内外对炮制品制黄精的饮片、标准汤剂、提取物及配方颗粒的基础研究较为薄弱，标准控制指标简单，难以有效控制药材质量，导致饮片及其成药制剂质量良莠不齐等现象长期存在。本研究对黄精炮制品的制黄精饮片、制黄精标准汤剂、制黄精提取物、制黄精配方颗粒及其制剂的质量评价，并对制黄精和黄精相关制剂的鉴别提供依据。
2、目前制黄精饮片、标准汤剂、提取物、配方颗粒及其复方制剂现有的质量研究较少，缺少一种有效手段对其进行质量控制。本专利技术旨在构建一种制黄精
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种制黄精的hplc特征图谱构建方法，本专利技术构建的制黄精的hplc特征图谱方法稳定，可靠，可以对制黄精的质量进行控制。
2、本专利技术公开了一种制黄精的高效液相特征图谱检测方法的构建及应用，该方法确认共有特征峰9个，规定其相对保留时间，建立对照特征图谱，指认了3个指标成分尿苷、5-羟甲基糠醛、大豆苷，充分展示制黄精的化学成分特征，全面地反映化制黄精的质量信息；从而能够达到全面、有效地控制制黄精饮片、标准汤剂、提取物、配方颗粒及其相关制剂的质量。
3、本方法可以对黄精和其炮制品制黄精的相关制剂进行鉴别。制黄精制剂供试品色谱中呈现9个特征峰，除峰4、峰6、峰8、峰9外，均与黄精制剂色谱中的5个特征峰保留时间相对应，峰4(5-羟甲基糠醛)、峰6、峰8(大豆苷)、峰9为黄精经炮制为制黄精后的拥有成分。
4、通过本专利技术的方法可以将制黄精和黄精很好地区别开，可以用于制黄精的鉴别。
5、本专利技术提供了一种制黄精的hplc特征图谱构建方法，包括：
6、a)将制黄精原料采用溶剂溶解，得到待测液；
7、b)将待测液采用高效液相色谱法测定，得到制黄精原料的hplc特征图谱；
8、所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.1％的磷酸水溶液，梯度洗脱。
9、本专利技术提供的一种制黄精的hplc特征图谱构建方法首先取制黄精原料，溶剂溶解，得到待测液。所述溶剂优选为30％甲醇。
10、本专利技术采用上述提取溶剂色谱峰信息量大，效果好。
11、具体为将制黄精原料采用溶剂溶解，提取，放冷，摇匀，滤过，即得。
12、本专利技术所述提取方法为超声提取或加热回流提取；优选为超声提取；所述超声功率优选为600w，频率优选为40khz；所述提取时间优选为20～30min；更优选为20min。
13、提取时间为20min时，色谱图峰形与分离度较好。
14、其中，所述制黄精原料的质量g和溶剂的体积ml的比优选为(0.5～1)：(10～50)；更优选为(0.5～1)：10～20；最优选为饮片、标汤和配方颗粒均为0.5：10。
15、其中所述溶剂为30％甲醇。提取溶剂为30％甲醇时，各特征峰峰形好，分离度适中。
16、所述制黄精原料为制黄精饮片、标准汤剂、提取物和配方颗粒。本专利技术对其不进行限定，上述原料皆可通过本专利技术的方法进行质量控制和定性检测。
17、还包括制备对照品参照物溶液的制备和对照药材溶液的制备；
18、对照品参照物溶液的制备：分别取尿苷、5-羟甲基糠醛、大豆苷，采用30％甲醇溶解，得到参照物溶液；所述参照物溶液中尿苷的浓度为40μg/ml；所述参照物溶液中5-羟甲基糠醛的浓度为40μg/ml；所述参照物溶液中大豆苷的浓度为40μg/ml。
19、对照药材溶液的制备：采用黄精对照药材加水回流，过滤，加30％甲醇超声，得到对照药材溶液；其中，制黄精对照药材和水的质量比为1:50。
20、本专利技术溶剂为30％的甲醇。30％甲醇作为提取溶剂时色谱峰信息量大且各色谱峰分离效果好。
21、将所述对照品参照物溶液采用高效液相色谱法测定，得到参照物的色谱图；并根据参照物的色谱图对制黄精的hplc特征图谱的成分进行定性测定。
22、本专利技术所述流动相a为乙腈，流动相b为0.1％的磷酸水溶液溶液，梯度洗脱。
23、本专利技术所述梯度洗脱优选具体为：
24、0～3min，a相：0、b相：100％；
25、3～20min，a相：0～10、b相：100％～90％；
26、20～39min，a相：10～19、b相：90％～81％；
27、39～61min，a相：19～35、b相：81％～65％；
28、61～70min，a相：35、b相：65％。
29、本专利技术在上述洗脱梯度下基线分离好，各个峰分离度好，基线平稳。
30、所述色谱柱为c18，规格为250×4.6mm 5μm；包括但不限于shimnex he c18-aq250×4.6mm 5μm、shim-pack gist c18-aq 250×4.6mm、ultimate aq-c18 4.6×250mm 5μm或ecosil 120-5-aq plus 4.6×250mm 5μm；优选的，所述色谱柱为ultimate aq-c18 4.6×250mm 5μm。色谱柱温度15℃～30℃，优选为15℃。本专利技术在柱温为15℃时，色谱图峰形较为对称，分离度较好。
31、本专利技术不同色谱柱均呈现9个共有峰，色谱柱ultimate aq-c18检测峰形较好，因此推荐使用色谱柱ultimate aq-c18 4.6×250mm 5μm。理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于5000。
32、流动相流速0.8ml/min～1.2ml/min，优选为1ml/min。
33、本专利技术发现流速1ml/min下各色谱峰分离度较好，峰形较好，作为最优选方案本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种制黄精的HPLC特征图谱构建方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括制备对照品参照物溶液的制备和对照药材溶液的制备；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为C18，规格为250×4.6mm 5μm；柱温15℃，理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于5000。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流动相流速为1.0mL/min；检测波长为260nm；进样量为5μL。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对制黄精的HPLC特征图谱的相似度进行评价，得到由9个特征峰构成的制黄精的HPLC标准特征图谱，其中峰1尿苷、峰4 5-羟甲基糠醛、峰8大豆苷。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在所述制黄精配方颗粒标准特征图谱中，以5-羟甲基糠醛为参照峰S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，所述相对保留时间在规定值的±10％之内，所述规定值分别为：0.68(峰
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A)所述溶剂为30％甲醇；所述提取方法为超声提取或加热回流提取；所述超声功率为600W，频率为40kHz；所述提取时间为20～30min。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A)所述制黄精原料的质量g和溶剂的体积mL的比为(0.5～1)：(10～50)；
10.一种黄精和制黄精的鉴别方法，其特征在于，采用权利要求1～9任意一项所述的方法进行鉴别。
...【技术特征摘要】
1.一种制黄精的hplc特征图谱构建方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括制备对照品参照物溶液的制备和对照药材溶液的制备；
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述色谱柱为c18，规格为250×4.6mm 5μm；柱温15℃，理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于5000。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述流动相流速为1.0ml/min；检测波长为260nm；进样量为5μl。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对制黄精的hplc特征图谱的相似度进行评价，得到由9个特征峰构成的制黄精的hplc标准特征图谱，其中峰1尿苷、峰4 5-羟甲基糠醛、峰8大豆苷。
7....
【专利技术属性】
技术研发人员：周厚成，周靖惟，张开元，郭秋玲，许秋灵，朱彦西，游艳玲，张阳，罗莹，梅国荣，黄宇，
申请(专利权)人：四川新绿色药业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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