一种检测茴芹内酯纯度的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测茴芹内酯纯度的方法，属于中药纯度检测技术领域，包括以下步骤：（1）、供试品溶液的制备：精密称定茴芹内酯供试品1.75 mg—3.0 mg，置于1 mL或3 mL容量瓶中，用50%的乙腈—水混合液定容至刻度，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜或离心取上清液，备用；（2）、利用超高效液相色谱法采用梯度脱洗对供试品溶液进行检测，检测条件是：色谱柱：反相C18柱；色谱柱柱温：20 ℃—45 ℃；流动相：流动相A为甲醇或乙腈；流动相B为水；流速：0.2 mL/min—0.5 mL/min；检测器：二极管阵列检测器，检测波长254 nm—330 nm；茴芹内酯供试品溶液进样量为：0.2 μL—1.0 μL。本发明专利技术具有准确、灵敏、快捷的特点，为茴芹内酯的杂质分析提供了可靠的保障，同时也节约了时间和物料成本。

A method to detect the purity of anisolactone

【技术实现步骤摘要】
一种检测茴芹内酯纯度的方法
本专利技术属于药物纯度检测
，具体涉及一种检测茴芹内酯纯度的方法。
技术介绍
茴芹内酯，英文名：Pimpinellin，化学名：5,6—dimethoxy—2H—furo[2,3—h]chromen—2—one，结构式如下式所示，茴芹内酯属于香豆素类化合物，为淡黄色固体，是两面针、独活、白芷等药用植物的次生代谢产物。现代研究表明茴芹内酯具有明显生物活性，可镇痛（王梦月,贾敏如,马逾英,等.白芷镇痛有效部位的化学成分研究[J].中国药学杂志,2005(8):583—585）、止血（孙文博.飞龙掌血根皮止血活性成分及作用机制的研究[D].贵州医科大学,2018）、抑制病原真菌（李敏敏,胡军华,贺磊,等.独活提取物抑制柑橘病原真菌活性成分的分离与鉴定[J].果树学报,2012,29(5):900—904+963）。目前茴芹内酯作为具有巨大开发价值的前体药物，已成为国内外学者研究的热点，因此市场对于茴芹内酯的需要日益增加。然而，现代有关茴芹内酯的药材指纹图谱（魏琦,王进,喻谨,等.10种苦竹属竹叶中香豆素类化合物的比较研究[J].中国药科大学学报,2014,45(3):297—300）、植物化学成分（宋萍萍,吕晔,徐增莱,等.青海当归根的化学成分研究[J].中药材,2014,37(1):55—57）、药理学（孙文博.飞龙掌血根皮止血活性成分及作用机制的研究[D].贵州医科大学,2018）研究已较为成熟，茴芹内酯的纯度检测的方法却鲜有报道。茴芹内酯来源于植物，由于植物化学成分复杂，种类繁多，部分成分相似程度高，如异茴芹内酯等化学结构和极性极为相似的成分，在提取、分离、纯化等制备等过程中，该类化学成分均有可能因高效液相色谱（HPLC）分离度不够，随目标成分一同制备而影响其纯度。实验室进行茴芹内酯纯度检测，需自建方法，目前检测多采用HPLC法，但该方法样品耗量大，摸索过程耗时长，对性质相似的化合物分离度不及超高效液相色谱法（超高效液相色谱法），浪费人力、物力、财力。因此建立一种准确、灵敏、快捷的茴芹内酯纯度检测方法，已经成为一个亟待解决的问题，对茴芹内酯单体物质的质量控制有重要的价值。
技术实现思路
本专利技术旨在解决上述现有技术的不足，本专利技术提供一种准确、灵敏、快捷的茴芹内酯纯度检测方法。并且本专利技术采用两种不同的流动相体系的不同的洗脱方式检测纯度，两种方法互为印证，互补不足，准确性高，检测结果可靠。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种检测茴芹内酯纯度的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）、供试品溶液的制备：精密称定茴芹内酯供试品1.75mg～3.0mg，置于10mL或3mL容量瓶中，用50%的乙腈—水混合液定容至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜或离心取上清液，备用；（2）、利用超高效液相色谱法采用等度洗脱或梯度脱洗对供试品溶液进行检测，检测条件是：色谱柱：反相C18柱；色谱柱柱温：20℃—45℃；流动相：流动相A为甲醇或乙腈；流动相B为水；流速：0.2mL/min—0.5mL/min；检测器：二极管阵列检测器，检测波长254nm—330nm；茴芹内酯供试品溶液进样量为：0.2μL—1.0μL。优选的，所述色谱柱为反相C18柱，柱长为100mm，内径为2.1mm，硅胶粒径为1.8μm。优选的，所述流动相中甲醇体积量为50%～70%，水体积量为50%～30%。优选的，所述流动相液中乙腈体积量为42%~90%，水体积量为58%~10%。优选的，所述甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯水。优选的，所述梯度脱洗如下：0min—2.88min，48—58%流动相A，52—42%流动相B；2.88min—3.60min，58—90%流动相A，42—10%流动相B；3.60min—5.00min，90%流动相A，10%流动相B；5.00min—5.18min，90—48%流动相A，10—52%流动相B；5.18min—7.00min，48%流动相A，52%流动相B。优选的，所述梯度脱洗如下：0min—2.88min，45—52%流动相A，55—48%流动相B；2.88min—3.60min，52—90%流动相A，48—10%流动相B；3.60min—5.00min，90%流动相A，10%流动相B；5.00min—5.18min，90—45%流动相A，10—55%流动相B；5.18min—7.00min，45%流动相A，55%流动相B。优选的，所述等度脱洗如下：0min—7.00min，70%流动相A，30%流动相B。优选的，所述等度脱洗如下：0min—7.00min，60%流动相A，40%流动相B。优选的，所述等度脱洗如下：0min—9.00min，50%流动相A，50%流动相B。本技术方案的有益效果如下：本专利技术首次采取首次采用超高效液相色谱法检测茴芹内酯纯度，超高效液相色谱法分析法灵敏度高、分离度好、测试迅速，并且本专利技术采用两种不同的流动相体系的不同的洗脱方式检测纯度，两种方法互为印证，互补不足，准确性高，检测结果可靠。综上所述，本专利技术为控制茴芹内酯单体物质的纯度提供新的检测方法，该方法具有准确、灵敏、快捷的特点，为茴芹内酯的杂质分析提供了可靠的保障，同时也节约了时间和物料成本。本专利技术通过大量的实践研究，进一步得到了采用超高效液相色谱法检测茴芹内酯纯度的检测条件，将反相C18柱、两种不同流动相体系、两种不同洗脱方式等检测条件有效、严格的控制，使得超高效液相色谱法检测茴芹内酯纯度得以实施；同时采用本专利技术方法检测，定量限和检测限低，检测时间短，仪器设置和操作简单。附图说明图1为实施例1的254nm色谱图；图2为实施例1的305nm色谱图；图3为实施例2的254nm色谱图；图4为实施例2的305nm色谱图；图5为实施例3的254nm色谱图；图6为实施例3的312nm色谱图；图7为实施例4的254nm色谱图；图8为实施例4的305nm色谱图；图9为实施例5的254nm色谱图；图10为实施例5的315nm色谱图；图11为实施例5的330nm色谱图；图12为实施例6的254nm色谱图；图13为实施例6的330nm色谱图；图1—13中，横坐标表示时间（min），纵坐标表示吸光度（AU）。具体实施方式下面通过几个具体的实施例来进一步说明实现本专利技术目的技术方案，需要说明的是，本专利技术要求保护的技术方案包括但不限于以下实施例。本专利技术中，所用茴芹内酯供试品包括化学对照品级茴芹内酯（纯度98.5%）和分离纯化所得茴芹内酯单体（纯度未知）。采用本专利技术方法检测茴芹内酯纯度的仪器精密度、稳定性考查、检测限和定量限考查。检测条件如下：高效液相色谱仪：可采用WatersACQUITYUPLCH—本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测茴芹内酯纯度的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n（1）、供试品溶液的制备：精密称定茴芹内酯供试品1.75 mg—3.0 mg，置于1 mL或3 ml容量瓶中，用50%的乙腈—水混合液定容至刻度，摇匀，过0.22 μm微孔滤膜或离心取上清液，备用；/n（2）、利用超高效液相色谱法采用梯度脱洗对供试品溶液进行检测，检测条件是：/n色谱柱：反相C18柱；/n色谱柱柱温：20 ℃—45 ℃；/n流动相：流动相A为甲醇或乙腈；流动相B为水；/n流速：0.2 mL/min—0.5 mL/min；/n检测器：二极管阵列检测器，检测波长254 nm—330 nm；/n茴芹内酯供试品溶液进样量为：0.2 μL—1.0 μL。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测茴芹内酯纯度的方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）、供试品溶液的制备：精密称定茴芹内酯供试品1.75mg—3.0mg，置于1mL或3ml容量瓶中，用50%的乙腈—水混合液定容至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜或离心取上清液，备用；
（2）、利用超高效液相色谱法采用梯度脱洗对供试品溶液进行检测，检测条件是：
色谱柱：反相C18柱；
色谱柱柱温：20℃—45℃；
流动相：流动相A为甲醇或乙腈；流动相B为水；
流速：0.2mL/min—0.5mL/min；
检测器：二极管阵列检测器，检测波长254nm—330nm；
茴芹内酯供试品溶液进样量为：0.2μL—1.0μL。


2.根据权利要求1所述的一种检测茴芹内酯纯度的方法，其特征在于：所述色谱柱为反相C18柱，柱长为100mm，内径为2.1mm，硅胶粒径为1.8μm。


3.根据权利要求1所述的一种检测茴芹内酯纯度的方法，其特征在于：所述流动相中甲醇体积量为50%—70%，水体积量为50%—30%。


4.根据权利要求1所述的一种检测茴芹内酯纯度的方法，其特征在于：所述流动相液中乙腈体积量为42%—90%，水体积量为58%—10%。


5.根据权利要求1所述的一种检测茴芹内酯纯度的方法，其特征在于：所述甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯水。


6.根据权利要求1所述的一种检测茴芹内酯纯度的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘宇，赖小红，游尚燕，陈延玲，周婷，桂立立，王晨曦，张佳卉，张玉梅，刘丁，
申请(专利权)人：成都普思检验检测有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51