一种烟碱中次级生物碱含量的测定方法技术

本发明专利技术提供一种烟碱中次级生物碱含量的测定方法，采用液相色谱‑多级质谱联用的方法对所述高纯度烟碱中低含量的次级生物碱含量进行准确测定，其中次级生物碱包括麦斯明、可的宁、2S‑尼古丁‑1‑氧化物、R,S‑降烟碱、R,S‑新烟草碱、S‑假木贼碱及二烯烟碱中的一种或几种。本发明专利技术提供的测定方法，适用于高浓度甚至是高纯度烟碱中次级生物碱含量的测定，通过液相色谱对高浓度烟碱以及含量低的次级生物碱进行分离，再通过质谱对生物碱进行定性和定量的分析，检测结果准确有效。

A method for the determination of secondary alkaloids in nicotine

【技术实现步骤摘要】
一种烟碱中次级生物碱含量的测定方法
本专利技术涉及一种生物碱的测定方法，特别涉及一种烟碱中次级生物碱含量的测定方法。
技术介绍
烟草制品呈现多元化发展态势，特别以电子烟为代表的新型烟草制品在世界范围内的市场规模不断扩大，具有广阔的应用前景。烟碱是烟草和烟气中含量最丰富的生物碱，可作用于中枢神经系统，是烟草最重要的生理性活性成分，也是人们消费烟草以达到生理和心理满足感的最重要的原因。因此，为达到与真实卷烟相近的生理感受，电子烟中往往含有不同浓度的烟碱(即尼古丁)。烟碱纯度会在不同程度上影响电子烟的感官感受，采用不同的原料、不同的提取方式会使不同杂质残留在高纯度的烟碱中，如低含量的吡啶类、吡嗪类、中性香味物质，从而使电子烟的感官发生变化。烟碱纯度的不同可直接影响电子烟的感官感受。烟碱在存放过程中会发生降解，可能会转化成次级生物碱，如降烟碱等，降烟碱的含量对烟草品质具有负面影响。现有技术中较多地关注于对于固态烟草中次级生物碱的定性和定量的测定，对于液态烟碱中次级生物碱含量的测定较少。检测手段也是大多采用经典的液相色谱分离，并结合紫外检测技术进行定性分析，然而这样的检测技术也不准确。为了保障产品的可靠性和稳定性，必须建立起对烟碱中次级生物碱的品控方法，这对于电子烟烟碱原料的选择、吸味品质的控制及产品稳定性都具有重要的理论意义和实用价值。
技术实现思路
本专利技术提出一种烟碱中次级生物碱含量的测定方法，用以解决上述问题。本专利技术提供一种烟碱中次级生物碱含量的测定方法，采用液相色谱-多级质谱联用的方法对所述高纯度烟碱中低含量的次级生物碱含量进行准确测定，其中次级生物碱包括麦斯明、可的宁、2S-尼古丁-1-氧化物、R,S-降烟碱、R,S-新烟草碱、S-假木贼碱及二烯烟碱中的一种或几种。进一步地，液相色谱的分析条件为：选用C18反相色谱柱；流动相A为乙酸铵溶液，其pH为8～10.5；流动相B为x和y两种有机物混合的有机溶剂，其中x为甲酸或乙酸，y为甲醇或乙腈，x在有机溶剂中的体积比为0.025％～0.5％；采用梯度洗脱，该梯度洗脱的条件为：0～3分钟流动相A体积比保持在100％；3～23分钟流动相A体积比由100％下降至30％～40％；23～25分钟流动相A体积比由30％～40％下降至4％～6％；25～35分钟流动相A体积比保持在4％～6％；35～35.1分钟流动相A体积比由4％～6％上升至90％～100％；35.1～40分钟流动相A体积比保持在90％～100％。C18反相色谱柱适用于烟碱液体中次级生物碱的分离。将流动相A设为乙酸铵溶液，将其pH设定为8～10.5，有利于杂质(即次级生物碱)呈现分子态。进一步地乙酸铵溶液的pH设定为10。另外，乙酸铵溶液的浓度可根据仪器或实际分析条件等因素进行选择，本专利技术可将乙酸铵溶液浓度设为10-30mmol/L。本专利技术将流动相B设为由两种有机物x和y混合的有机溶剂。其中x为甲酸或乙酸，y为甲醇或乙腈。与单一成分的流动相B相比，在甲醇或乙腈溶剂中加入适量的甲酸或乙酸，在流动相B通过色谱柱时，可让待分离的次级生物碱解离成离子，有助于次级生物碱的分离，在质谱分析时峰形更好。对于混合有机溶剂含量的选择，本专利技术中x在混合溶剂中的体积百分比在0.025％～0.5％的范围内较为合适，进一步地可为0.1％。洗脱条件对于各种次级生物碱以及烟碱的分离也起到重要的作用，洗脱前期主要是次级生物碱在色谱柱中的保留，后期在于对次级生物碱的洗脱。流动相A和流动相B在不同时间段的百分比的选择、流动相B含量的增加、减少以及含量变化的速度都会对次级生物碱以及烟碱的分离产生重要影响。上述对于梯度洗脱条件，进一步为：0～3分钟流动相A体积比保持在100％；3～23分钟流动相A体积比由100％下降至37％；23～25分钟流动相A体积比由37％下降至5％；25～35分钟流动相A体积比保持在5％；35～35.1分钟流动相A体积比由5％上升至100％；35.1～40分钟流动相A体积比保持在100％。进一步地，C18反相色谱柱的粒径为1.7～5μm，例如1.7μm，3μm，5μm，优选为1.7μm，粒径尺寸影响色谱柱的分离效率，对于次级生物碱的分离度有影响。进一步地，C18反相色谱柱内径为2.1mm或4.6mm，优选为2.1mm；色谱柱的长度为50mm、100mm、150mm中的一种，优选为100mm。进一步地，液相色谱的分析条件为以下(1)～(3)中的一种或几种：(1)流速0.2～0.5mL/min；(2)柱温：30～50℃；(3)进样量：1μL～10μL。进样量的增加可提高检测灵敏度，进样量过高会使峰宽变宽。进一步地，利用所述多级质谱对待测样品进行测定的方法包括：定量离子对选择：当待测样品中所述次级生物碱的第一离子对的峰至少部分地被待测样品中所述烟碱的离子对的峰覆盖或者干扰时，即无法准确获得关于第一离子对的峰的定量数据信息时，选择所述次级生物碱的第二离子对的峰。当所述第二离子对的峰不被所述烟碱的离子对的峰覆盖或者干扰时，或者说干扰较小时，即能够较为准确地获得关于第二离子对的峰的定量数据信息时，将所述第二离子对的峰对应的离子对作为所述次级生物碱的定量离子对。本专利技术关于定量离子对的选择方法能够进一步减少尼古丁的干扰，提高检测的灵敏度。定量分析：通过所述次级生物碱的定量离子对对所述次级生物碱的含量进行分析。进一步地，定量离子对的选择满足下述(1)～(7)中的一种或几种：(1)可的宁m/z：177.1/98.2；(2)2S-尼古丁-1-氧化物m/z：179.1/96.1；(3)R,S-降烟碱m/z：149.1/132.1；(4)R,S-新烟草碱m/z：161.1/144.1；(5)麦斯明m/z：147.1/105.2；(6)S-假木贼碱m/z：163.1/146.2；(7)二烯烟碱m/z：159.1/144.1。进一步地，对所述次级生物碱进行所述定量分析时选用的碰撞电压满足下述(1)～(7)条件中的一种或几种：(1)可的宁：28V；(2)2S-尼古丁-1-氧化物：20V；(3)R,S-降烟碱：12V；(4)R,S-新烟草碱：12V；(5)麦斯明：32V；(6)S-假木贼碱：15V；(7)二烯烟碱：28V。进一步地，利用多级质谱对所述待测样品进行测定的步骤还包括定性分析，所述定性分析包括定性离子对的选择，所述定性离子对的选择满足下述(1)～(7)中的一种或几种：(1)可的宁m/z：177.1/80.2；(2)2S-尼古丁-1-氧化物m/z：179.1/84.2；(3)R,S-降烟碱m/z：149.1/80.1；(4)R,S-新烟草碱m/z：161.1/106.1；(5)麦斯明m/z：147.1/78.1；(6)S-假木贼碱m/z：163.1/118.3；(7)二烯烟碱m/z：159.1/117.1。进一步地，对所述次级生物碱进行所述定性分析时选本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种烟碱中次级生物碱含量的测定方法，其特征在于，采用液相色谱-多级质谱联用的方法对所述次级生物碱含量进行测定，所述次级生物碱包括麦斯明、可的宁、2S-尼古丁-1-氧化物、R,S-降烟碱、R,S-新烟草碱、S-假木贼碱及二烯烟碱中的一种或几种。/n

【技术特征摘要】
1.一种烟碱中次级生物碱含量的测定方法，其特征在于，采用液相色谱-多级质谱联用的方法对所述次级生物碱含量进行测定，所述次级生物碱包括麦斯明、可的宁、2S-尼古丁-1-氧化物、R,S-降烟碱、R,S-新烟草碱、S-假木贼碱及二烯烟碱中的一种或几种。


2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述液相色谱的分析条件为：
选用C18反相色谱柱；流动相A为乙酸铵溶液，其pH为8～10.5；流动相B为由x和y两种有机物混合的有机溶剂，其中x为甲酸或乙酸，y为甲醇或乙腈，x在有机溶剂中的比例为0.025％～0.5％(v/v)；
采用梯度洗脱，所述梯度洗脱的条件为：0～3分钟流动相A体积比保持在100％；3～23分钟流动相A体积比由100％下降至30％～40％；23～25分钟流动相A体积比由30％～40％下降至4％～6％；25～35分钟流动相A体积比保持在4％～6％；35～35.1分钟流动相A体积比由4％～6％上升至90％～100％；35.1～40分钟流动相A体积比保持在90％～100％。


3.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述乙酸铵溶液pH为10；所述有机溶剂中x的体积分数为0.1％；
所述梯度洗脱的条件为：0～3分钟流动相A体积比保持在100％；3～23分钟流动相A体积比由100％下降至37％；23～25分钟流动相A体积比由37％下降至5％；25～35分钟流动相A体积比保持在5％；35～35.1分钟流动相A体积比由5％上升至100％；35.1～40分钟流动相A体积比保持在100％。


4.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述C18反相色谱柱的粒径为1.7～5μm；所述C18反相色谱柱的内径为2.1mm或4.6mm，长度为50mm、100mm、150mm中的一种。


5.如权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述C18反相色谱柱的粒径为1.7μm；所述内径为2.1mm；所述长度为100mm。


6.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述液相色谱或所述液相色谱的分析条件为以下(1)～(3)中的一种或几种：
(1)流速0.2～0.5mL/min；
(2)柱温：30～50℃；
(3)进样量：1μL～10μL。


7.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，其中，利用所述多级质谱对待测样品进行测定的方法包括：
定量离子对选择：当待测样品中所述次级生物碱的第一离子对的峰至少部分地被待测样品中所述烟碱的离子对的峰覆盖或者干扰时，选择所述次级生物碱的第二离子对的峰，当所述第二离子对的峰不被所述烟碱的离子对的峰覆盖或者干扰时，将所述第二离子对的峰对应的离子对作为所述次级生物碱的定量离子对；
定量分析：通过所述次级生物碱的定量离子对对所述次级生物碱的含量进行分析。


8.如权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述定量离子对选择满足下述(1)～(7)中的一种或几种：
(1)可的宁m/z：177.1/98.2；(2)2S-尼古丁-1-氧化物m/z：179.1/96.1；(3)R,S-降烟碱m/z：149.1/132.1；(4)R,S-新烟草碱m/z：161.1/144.1；(5)麦斯明m/z：147.1/105.2；(6)S-假木贼碱m/z：163.1/146.2；(7)二烯烟碱m/...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨菁，汪阳忠，王天南，费婷，
申请(专利权)人：上海新型烟草制品研究院有限公司，上海烟草集团有限责任公司，
类型：发明
国别省市：上海;31