一种定量检测KL-6的试纸条和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供了一种定量检测KL‑6的试纸条，属于分子生物学技术领域，顺次包括样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光微球标记鼠抗人KL‑6单克隆抗体和荧光微球标记兔IgG多克隆抗体；所述层析膜上顺次包括T检测线和C质控线，所述T检测线上包被有鼠抗人KL‑6单克隆抗体，所述C质控线上包被有羊抗兔IgG多克隆抗体。线性范围：20‑10000U/mL；最低检出限：20U/mL；精密度：不大于15％；准确度：测试值与理论值的相对偏差在±15％以内；稳定性：在4‑30℃保存18个月后，其性能还满足线性范围，最低检出限，精密度，准确度参数。

A test strip and kit for quantitative detection of KL-6

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测KL-6的试纸条和试剂盒
本专利技术属于分子生物学
，尤其涉及一种定量检测KL-6的试纸条和试剂盒。
技术介绍
KL-6(涎液化糖链抗原)，是日本人Kohno于1985年发现的，利用人肺腺癌细胞系(VMRC-LCR)免疫小鼠制备了多株单克隆抗体，将其中的第6号抗体识别的涎液化糖链抗原命名为KL-6。KL-6主要由增殖、再生的或受损的肺泡II型上皮细胞分泌，在正常肺组织中，KL-6在II型肺泡细胞，呼吸性细支气管上皮细胞和支气管腺浆液细胞上表达。在日本和国内开展的多项对KL-6的研究显示，其作为间质性肺疾病(ILD)的血清学指标显示出积极的临床意义。时间分辨荧光免疫测定(TRFIA)是一种非同位素免疫分析技术，它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。但是现有技术中还未有关于使用时间分辨荧光免疫测定样本中KL-6的含量的报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种定量检测KL-6的试纸条和试剂盒。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种定量检测KL-6的试纸条，顺次包括样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光微球标记鼠抗人KL-6单克隆抗体和荧光微球标记兔IgG多克隆抗体；所述层析膜上顺次包括T检测线和C质控线，所述T检测线上包被有鼠抗人KL-6单克隆抗体，所述C质控线上包被有羊抗兔IgG多克隆抗体。优选的，所述鼠抗人KL-6单克隆抗体的喷涂浓度为0.8～1.5mg/mL。优选的，所述鼠抗人KL-6单克隆抗体的喷涂浓度为1mg/mL。优选的，所述T检测线的宽度为0.5～1.5mm。优选的，所述羊抗兔IgG多克隆抗体的喷涂浓度为0.8～1.5mg/mL。优选的，所述羊抗兔IgG多克隆抗体的喷涂浓度为1mg/mL。优选的，所述C质控线的宽度为0.5～1.5mm。优选的，所述荧光微球标记鼠抗人KL-6单克隆抗体的浓度为0.08～0.15mg/mL。优选的，所述荧光微球标记兔IgG多克隆抗体的浓度为0.08～0.15mg/mL。本专利技术还提供了一种试剂盒，包括上述技术方案所述的试纸条、SD卡和稀释液；所述稀释液为含质量浓度为0.5～1.5％BSA的PBS溶液，所述PBS溶液的浓度为0.005～0.015M。本专利技术提供了一种定量检测KL-6的试纸条，顺次包括样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光微球标记鼠抗人KL-6单克隆抗体和荧光微球标记兔IgG多克隆抗体；所述层析膜上顺次包括T检测线和C质控线，所述T检测线上包被有鼠抗人KL-6单克隆抗体，所述C质控线上包被有羊抗兔IgG多克隆抗体。将待测样本滴入样品垫，样本中的待测物在层析作用下与结合垫上荧光微球标记的抗体形成复合物，复合物继续层析至层析膜的检T检测线，被抗体捕获。样本中的待测物越多，在T检测线聚集的荧光微球越多，T检测线的荧光信号越强，检测线与C质控线的荧光信号比值与样本中的待测物量呈正相关关系。该荧光抗体的信号强度可通过荧光免疫检测仪检测和分析，进而准确的定量检测样本中KL-6的含量。本专利技术的有益效果为：1)线性范围：20-10000U/mL；2)最低检出限：20U/mL；3)精密度：不大于15％；4)准确度：测试值与理论值的相对偏差在±15％以内；5)稳定性：在4-30℃保存18个月后，其性能还满足线性范围，最低检出限，精密度，准确度参数。附图说明图1为KL-6试纸条的结构图。具体实施方式本专利技术提供了一种定量检测KL-6的试纸条，顺次包括样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；所述结合垫上包被有荧光微球标记鼠抗人KL-6单克隆抗体和荧光微球标记兔IgG多克隆抗体；所述层析膜上顺次包括T检测线和C质控线，所述T检测线上包被有鼠抗人KL-6单克隆抗体，所述C质控线上包被有羊抗兔IgG多克隆抗体。本专利技术对所述样品垫的材质没有特殊限定，采用本领域常规制备试纸条使用的材质即可，具体为玻璃纤维。本专利技术对所述结合垫的材质没有特殊限定，采用本领域常规制备试纸条使用的材质即可，具体为玻璃纤维。在本专利技术中，所述结合垫上包被有荧光微球标记鼠抗人KL-6单克隆抗体和荧光微球标记兔IgG多克隆抗体，所述鼠抗人KL-6单克隆抗体从北京博尔迈购买；所述兔IgG多克隆抗体从长沙博优生物购买。在本专利技术中，所述荧光微球采用金属铕元素螯合物与苯乙烯单体共聚得到，生产厂家为BangsLaboratories。在本专利技术中，所述荧光微球标记鼠抗人KL-6单克隆抗体的制备方法优选包括：1)将荧光微球溶液与MES缓冲液混合、漩涡、超声，将得到的超声物进行离心，得到第一沉淀；2)将所述步骤1)得到的沉淀用NHS溶液和EDC溶液进行活化，将得到的活化物离心，将得到的第二沉淀与鼠抗人KL-6单克隆抗体溶液、MES缓冲液混合、反应，得到反应物；3)将所述步骤2)得到的反应物离心，得到第三沉淀，将所述第三沉淀经封闭液封闭过夜，得到鼠抗人KL-6单克隆抗体。在本专利技术中，所述荧光微球溶液的浓度优选为10mg/mL；所述MES缓冲液的浓度优选为0.01mol/L，pH值优选为6.5。在本专利技术中，所述荧光微球溶液与MES缓冲液的体积比优选为50μl:1mL。在本专利技术中，所述漩涡的时间优选为20s。在本专利技术中，所述超声的时间优选为2～5min，所述超声的频率优选为30kHz。在本专利技术中，所述离心的条件优选包括：所述离心的转速优选为15000rpm，所述离心的温度优选为4℃，所述离心的时间优选为15min。在本专利技术中，所述NHS溶液的浓度优选为20g/L，所述EDC溶液的浓度优选为20g/L。在本专利技术中，所述活化的时间优选为15～30min。在本专利技术中，每50μl的荧光微球溶液经处理后得到的第一沉淀优选用250μl的NHS溶液和250μl的EDC溶液进行活化。在本专利技术中，所述鼠抗人KL-6单克隆抗体溶液的浓度优选为80～150μg/mL。每50μl的荧光微球溶液经处理后得到的第二沉淀优选与浓度为100μg/mL的KL-6单克隆抗体溶液、1mL的MES缓冲液混合。在本专利技术中，所述反应的时间优选为2～4h。在本专利技术中，所述封闭液优选为含1％BSA、0.2％甘氨酸、0.05％Tween20的0.01MTris-HCl溶液，上述含量均为质量百分含量。在本专利技术中，所述荧光微球标记兔IgG多克隆抗体的制备方法同荧光微球鼠抗人KL-6单克隆抗体的制备方法，在此不再赘述。本专利技术将得到的荧光微球鼠抗人KL-6单克隆抗体和荧光微球标记兔IgG多克隆抗体分别溶于含1％Tween20、0.1％BSA、1％海藻糖的0.01MTris-HCl工作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量检测KL-6的试纸条，其特征在于，顺次包括样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；/n所述结合垫上包被有荧光微球标记鼠抗人KL-6单克隆抗体和荧光微球标记兔IgG多克隆抗体；/n所述层析膜上顺次包括T检测线和C质控线，所述T检测线上包被有鼠抗人KL-6单克隆抗体，所述C质控线上包被有羊抗兔IgG多克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种定量检测KL-6的试纸条，其特征在于，顺次包括样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；
所述结合垫上包被有荧光微球标记鼠抗人KL-6单克隆抗体和荧光微球标记兔IgG多克隆抗体；
所述层析膜上顺次包括T检测线和C质控线，所述T检测线上包被有鼠抗人KL-6单克隆抗体，所述C质控线上包被有羊抗兔IgG多克隆抗体。


2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述鼠抗人KL-6单克隆抗体的喷涂浓度为0.8～1.5mg/mL。


3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征在于，所述鼠抗人KL-6单克隆抗体的喷涂浓度为1mg/mL。


4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述T检测线的宽度为0.5～1.5mm。


5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述羊抗兔IgG多克隆抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈林，刘健，戈军，余琼林，陈远超，靳启航，杨斌，黄博文，陈汝彬，
申请(专利权)人：湖南永和阳光生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43