一种抗氧化地菍提取物的制备方法技术

本发明专利技术属于天然药物领域，具体涉及一种抗氧化地菍提取物的制备方法。本发明专利技术针对地菍抗氧化的物质基础研究不充分等问题，以清除DPPH自由基为抗氧化活性评价依据，对提取溶剂、提取温度、提取时间和液料比等因素进行考察，并在单因素实验基础上，利用响应面法对实验因素进一步优化，明确地菍抗氧化成分的提取工艺；同时采用大孔吸附树脂法对地菍抗氧化活性成分进行纯化研究，通过对上样量、上样浓度、上样速度、洗脱溶剂和体积等因素的考察，最终建立了地菍抗氧化提取物的制备工艺。依据本发明专利技术制备的地菍抗氧化提取物，是没食子酸和鞣花酸为母核的混合物，其抗氧化活性显著提高，有利于地菍相关产品的开发和综合利用。

A preparation method of antioxidant extract of Gracilaria

【技术实现步骤摘要】
一种抗氧化地菍提取物的制备方法
本专利技术属于天然药物领域，具体涉及一种抗氧化地菍提取物的制备方法。
技术介绍
地菍为野牡丹科野牡丹属植物地菍MelastomadodecandrumLour.的干燥全草，具有清热化湿、祛瘀止痛、收敛止血之功效；临床主要用于高热、咽喉肿痛、牙痛、黄疸、水肿痛经、产后腹痛、崩漏带下、痢疾便血、痈肿疔疮、毒蛇咬伤等病症；民间还用于治疗流行性脑脊髓膜炎、肾炎、肾盂炎、肠炎、盆腔炎、急性扁桃体炎、外伤出血、腰腿痛和风湿骨痛等。现代药理学研究还显示，地菍具有降血糖、镇痛抗炎、调血脂、抗氧化、保肝作用等(王金凤,张评浒,王雨彤,王玲华,李强,李谦,张建军.民族药地菍研究进展[J].中草药,2018,49(05):1211-1219.)。目前，有研究表明地菍的乙酸乙酯部位的总黄酮和总多糖具有一定抗氧化活性(李丽,罗泽萍,周焕第,等.地菍乙酸乙酯提取部位对糖尿病小鼠血糖、血脂及抗氧化作用的影响[J].中国老年学杂志,2015,35(12):3250-3252；张超,张婷,姚慧珍.地菍总黄酮体外抗小鼠肝线粒体脂质过氧化作用的研究[J].中医药学刊,2005,23(9):1680-1682；张超,姚惠珍,徐兰琴,等.地菍多糖MD1清除活性氧自由基及对人红细胞膜脂质过氧化作用影响的研究[J].广州医学院学报,2002,30(4):18-21.)，但是，目前对地菍抗氧化的物质基础研究并不充分。本专利技术的专利技术人在研究中发现，地菍中的总黄酮、总多糖提取并非是地菍抗氧化作用的关键有效组分。r>
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术问题的不足，提供一种抗氧化作用显著性高于地菍乙酸乙酯部位、总黄酮和总多糖的地菍提取物的制备方法。本专利技术以清除DPPH自由基为抗氧化活性评价依据，通过对提取工艺、纯化工艺的优化，建立了抗氧化地菍提取物的制备工艺；并且通过谱效关系分析，建立了地菍提取物的检测方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：一种抗氧化地菍提取物的制备方法，所述抗氧化地菍提取物为以没食子酸和鞣花酸为母核的混合物，具有抗氧化活性，所述抗氧化地菍提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)将地菍的根、茎、叶、果实或上述任意多种植物部位的组合，置25-55℃的烘箱内烘干，取出，粉碎，过10-100目筛，得到地菍粉末A。(2)取步骤(1)所得的粉末A，使液料比为0.01-5mL/mg，提取溶剂为0-100％甲醇水溶液；上述混合物在0-100℃的水浴超声提取15-75min，取出，冷却至室温，以3500rpm离心15min，得上清液B。(3)取步骤(2)所得的上清液B，采用旋转蒸发仪，在25-55℃水浴浓缩至干，然后加入水溶解，使水溶液的抗氧化活性当量为5-40umol/mL，即得地菍提取物的水溶液C。(4)取步骤(3)所得的水溶液C，通过AB-8、ADS-17、D101、HPD100、HPD500、HPD600、HPD950、LSA-10、LSA-21、LX-11、LX-8、NKA-2、X-5、XDA-8或上述任何组合的大孔树脂柱，控制流速为2-40BV/h，上样体积为5-100BV，上样结束后，依次采用1-16BV0-40％乙醇水溶液和1-20BV10-100％乙醇水溶液洗脱，将10-100％乙醇洗脱部位在25-55℃水浴浓缩至干，即得地菍提取物。优选的，所述步骤(1)中烘干温度为40℃，粉碎后过50目筛。优选的，所述步骤(2)中液料比为0.3-0.5mL/mg，提取溶剂为50-100％甲醇水溶液，水浴超声温度为25℃，水浴超声时间为15-45min；更优选的，液料比为0.46mL/mg，提取溶剂为61％甲醇水溶液，水浴温度为25℃，水浴超声提取时间为45min。优选的，所述步骤(3)中水浴浓缩温度为40℃，水溶液的抗氧化活性当量为15-30umol/mL；更优选的，水溶液的抗氧化活性当量为20umol/mL。优选的，所述步骤(4)中，步骤(3)所得的水溶液C，通过HPD500、HPD600、ADS-17、LSA-10或上述任何组合的大孔树脂柱，控制流速为5-20BV/h，上样体积为10-70BV，上样结束后，依次采用2-8BV0-20％乙醇水溶液和1-10BV25-75％乙醇水溶液洗脱，将25-75％乙醇洗脱部位在40℃水浴浓缩至干；更优选的，所述步骤(4)中，步骤(3)所得的水溶液C，通过HPD500的大孔树脂柱，控制流速为10BV/h，上样体积为30BV，上样结束后，依次采用4BV0-10％乙醇水溶液和7BV50％乙醇水溶液洗脱，将50％乙醇洗脱部位在40℃水浴浓缩至干。本专利技术与现有技术相比，其有益效果主要体现在：(1)与地菍的乙酸乙酯部位、总黄酮和总多糖部位相比较，本专利技术所提供的提取物的抗氧化活性显著性提高；(2)本专利技术所指的地菍提取物的抗氧化活性主要是由以没食子酸和鞣花酸为母核的混合物引起的，有利于地菍资源的综合性利用。附图说明图1为甲醇浓度(a)、提取温度(b)、提取时间(c)和液料比(d)对地菍抗氧化活性成分提取率的影响；图2为本专利技术所指的地菍抗氧化提取物水解之后的HPLC-UV色谱图。具体实施方式下面结合附图，并通过具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。值得注意的是，实施例只是用以解释本专利技术，并非对本专利技术作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。以下实施例中所用的植物原料均于2017年9月，采集于浙江丽水。地菍原料全株在40℃烘箱烘干之后，采用锤式粉碎机粉碎，过50目筛，备用。地菍提取物制备工艺优化过程中的影响因素评价指标为提取物清除DPPH自由基的能力。DPPH·(1,1-二苯基-2-苦基苯肼)是一种稳定的以氮为中心的自由基，其清除率高低反映了提取液抗氧化活性的强弱。本专利技术以水溶性维生素E(Trolox,TE)为标准品，首先建立了Trolox浓度与其对DPPH自由基清除率之间的关系曲线，然后依据地菍提取物对DPPH自由基的清除率，将地菍提取物的抗氧化活性折算成μmolTrolox/g植物原料(在地菍抗氧化活性成分的提取工艺中应用此单位)、μmolTrolox/mL提取物溶液(在地菍抗氧化提取物的大孔吸附树脂纯化工艺中应用此单位)或μmolTrolox/G提取物(在地菍不同提取物之间的抗氧化活性比较时，应用此单位)。标准品Trolox或地菍提取液对DPPH自由基清除率测定方法如下：将3.5mL0.07mM的DPPH溶液与0.4mL提取物溶液混合，在室温避光放置30分钟，然后用UV1800分光光度计测定其在517nm处的吸光度。清除率X的计算公式如下：上式中，X为清除率，Ai为3.5mLDPPH溶液+0.4mL提取液的吸光度值，Aj为无水乙醇+0.4mL提取液的吸光度值；A0为3.5mLDPPH溶液+0.4mL无水乙醇溶液。地菍提取物抗氧化活性受到提取溶剂的浓度、提取温度本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗氧化地菍提取物的制备方法，其特征在于，所述抗氧化地菍提取物的制备方法，包括如下步骤：/n(1)取地菍的根、茎、叶、果实或上述任意多种植物部位的组合，置25-55℃的烘箱内烘干，取出，粉碎，过10-100目筛后，得到地菍粉末；将地菍粉末放置超声提取罐中，加入提取溶剂，配成一定液料比，在一定温度下超声提取一定时间，取出，冷却至室温，以3500rpm离心15min，得上清液；然后采用旋转蒸发仪，在25-55℃水浴浓缩至干，然后加入水溶解，使水溶液的抗氧化活性当量为5～40umol/mL，即得地菍提取物的水溶液；/n(2)将步骤(1)的地菍水溶液，通过大孔吸附树脂吸附，然后采用溶剂1洗脱除杂之后，再加入溶剂2洗脱，收集溶剂2，在25-55℃水浴浓缩至干，即得地菍提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗氧化地菍提取物的制备方法，其特征在于，所述抗氧化地菍提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)取地菍的根、茎、叶、果实或上述任意多种植物部位的组合，置25-55℃的烘箱内烘干，取出，粉碎，过10-100目筛后，得到地菍粉末；将地菍粉末放置超声提取罐中，加入提取溶剂，配成一定液料比，在一定温度下超声提取一定时间，取出，冷却至室温，以3500rpm离心15min，得上清液；然后采用旋转蒸发仪，在25-55℃水浴浓缩至干，然后加入水溶解，使水溶液的抗氧化活性当量为5～40umol/mL，即得地菍提取物的水溶液；
(2)将步骤(1)的地菍水溶液，通过大孔吸附树脂吸附，然后采用溶剂1洗脱除杂之后，再加入溶剂2洗脱，收集溶剂2，在25-55℃水浴浓缩至干，即得地菍提取物。


2.根据权利要求1所述一种抗氧化地菍提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，提取溶剂为0-100％甲醇水溶液，液料比为0.01-5mL/mg，水浴超声温度为0-100℃，水浴超声时间为15-75min。


3.根据权利要求1所述一种抗氧化地菍提取物的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，大孔吸附树脂的种类为AB-8、ADS-17、D101、HPD100、HPD500、HPD600、HPD950、LSA-10、LSA-21、LX-11、LX-8、NKA-2、X-5、XDA-8或上述...

【专利技术属性】
技术研发人员：童应鹏，程科军，江瑜，王建新，
申请(专利权)人：台州学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33