芬娜金针菇新菌株及其分子标记的引物和分子标记方法技术

本发明专利技术涉及一种新菌株及其分子标记引物和分子标记方法，尤其涉及一种芬娜金针菇新菌株及其分子标记的引物和分子标记方法，所述芬娜金针菇新菌株为芬娜金针菇Flammulina fennae HMGIM‑A151357，保藏编号为CCTCC NO：M 2019478。与普通金针菇相比，本发明专利技术的芬娜金针菇具有更为丰富的钙含量，出菇耐受温度更高，有利于节能，并且菌盖不易开伞，商品性状优，纤维素含量低，食用时不易塞牙，口感更优。

A new strain of Flammulina velutipes and its primers and molecular markers

【技术实现步骤摘要】
芬娜金针菇新菌株及其分子标记的引物和分子标记方法
本专利技术涉及一种新菌株及其分子标记引物和分子标记方法，尤其涉及一种芬娜金针菇新菌株及其分子标记的引物和分子标记方法。
技术介绍
目前，食用菌的产业发展迅猛，我国食用菌每年的产量达到3000万吨以上，占全球75％以上，从业人员超过2000万人，食用菌产业在种植业中排在除了粮、菜果、油之后的第五位，超过了棉、茶叶和蚕桑。在食用菌产业蓬勃发展的今天，越来越多的珍稀食用菌品种逐渐进入人们的视野，许多原有的珍稀品种逐渐被驯化，如竹荪、茶薪菇、离褶伞等。但是也有大批的野生食药用菌由于未能被人类认识，没有得到研究。在目前有的15万种大型真菌中，仅仅有80种左右的野生食药用菌被人类驯化，而且规模化栽培的品种更只有20多种。随着人们生活水平的逐步上升，对于生活品质的要求更高，而大型真菌由于其富含具有营养及功能作用的各种成分，包括真菌多糖、三萜类、甾醇等，对于人体健康具有非常良好的作用，日益受到人们的重视。金针菇(Flammulinavelutipes)是目前人工广泛栽培的食用菌之一，也是一种经济价值很高的食药用真菌。金针菇含有多种营养成分，其中人体生长所需的8种氨基酸含量较高，尤以赖氨酸和精氨酸含量特别丰富，能促进儿童的健康成长和智力发育，因此常被称为“增智菇”。金针菇含有朴菇素，具有显著的抗癌功能，经常食用金针菇还可以预防高血压，治疗肝炎及肠胃溃疡等疾病。
技术实现思路
针对以上不足，本专利技术提供一种芬娜金针菇新菌株及其分子标记的引物和分子标记方法。本专利技术提供一种芬娜金针菇新菌株，分离自辽宁省本溪市桓仁县老秃顶子山阔叶树枯木上，通过对子实体进行组织分离并纯化得到原始菌株，经形态学及分子生物学鉴定为芬娜金针菇Flammulinafennae新菌株，将该菌株命名为芬娜金针菇FlammulinafennaeHMGIM-A151357，已于2019年6月20日保藏至中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，中国武汉)，保藏编号为：CCTCCNO：M2019478。专利技术人分离得到的该菌株菌丝活力旺盛，当前已经通过人工驯化栽培获得子实体，商品性状优良。并且对该菌株完成其全基因组的测序及组装，通过与食用菌基因组比对，属于芬娜金针菇(FlammulinafennaeBas)菌种，具体涉及来自真菌界(Fungi)担子菌门(Basidiomycota)伞菌纲(Agaricomycetes)伞菌目(Agaricales)膨瑚菌科(Physalacriaceae)金针菇属(Flammulina)。本专利技术的芬娜金针菇子实体为黄色，菌盖浅黄色，呈半球形，较大，不易开伞，表面有胶质的薄皮；菌柄细长，浅黄色至褐色，菌柄基部比菌柄顶部颜色要深；菌肉白色，较薄；菌褶近奶油色或浅黄色，凹生或延生。生长周期为60天-70天，出菇管理时间为10天-13天。菌丝体最适温度22-24℃，原基形成15-16℃，子实体生长最适温度为16-18℃。菌丝体在普通PDA培养基上生长速度适中，菌丝稍浓密，初期为白色至灰白色，后期呈现出淡黄色，并产生粉孢子。与普通金针菇相比，本专利技术的芬娜金针菇具有更为丰富的钙含量，出菇耐受温度更高，有利于节能，并且菌盖不易开伞，商品性状优，纤维素含量低，食用时不易塞牙，口感更优。附图说明图1为实施例1的本专利技术的新菌株的ITS测序结果。图2为实施例2的差异性位点。图3为实施例2的引物对的PCR扩增电泳图谱。图4为实施例2的另一引物对的PCR扩增电泳图谱。具体实施方式本专利技术提供了一株通过野外采集分离得到的芬娜金针菇新菌株，通过分子生物学鉴定以及性状鉴别为新菌株，测定其全基因组数据并与市场上广泛使用的金针菇菌种基因进行比较分析，设计特异性引物完成其分子标记，实现自有菌株的保护，为商业化应用提供产权保障。一种芬娜金针菇新菌株，分离自辽宁省本溪市桓仁县老秃顶子山阔叶树枯木上，通过对子实体进行组织分离并纯化得到原始菌株，经形态学及分子生物学鉴定为芬娜金针菇Flammulinafennae新菌株，将该菌株命名为芬娜金针菇FlammulinafennaeHMGIM-A151357，已于2019年6月20日保藏至中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，中国武汉)，保藏编号为：CCTCCNO：M2019478。对该菌株完成其全基因组的测序及组装，通过与市场上常见金针菇基因进行比对分析，筛选获得差异基因集，设计特异性引物及PCR扩增，将扩增产物电泳检测并测序。结果表明，本专利技术的两对核酸探针引物针对该芬娜金针菇菌株可以扩增出特异性条带，而对于普通金针菇则无条带，并且成功扩增出来的条带经送检测序后，与芬娜金针菇基因组比对，相似性达到98％以上，表明这两对核酸探针引物可以特异性扩增芬娜金针菇菌株，用以区别市场上流通的金针菇菌株。芬娜金针菇新菌株(芬娜金针菇FlammulinafennaeHMGIM-A151357)的分子标记的引物，包括FAA-F-1和FAA-R-1，或FAA-F-2和FAA-R-3；其中，FAA-F-1：5′-GCCCTCCCTTTACCAGTCTTGCTTCCGAT-3′FAA-R-1：5′-CTCCATCGGGTTGATGTCCGCAAA-3′FAA-F-2：5′-GCCCTCCCTTTACCAGTC-3′FAA-R-3：5′-ATTCCGCATCCTCAACCT-3′。芬娜金针菇新菌株(芬娜金针菇FlammulinafennaeHMGIM-A151357)的分子标记方法，采用引物对FAA-F-1和FAA-R-1，或FAA-F-2和FAA-R-3进行PCR扩增，得到特异性扩增条带，鉴定为芬娜金针菇新菌株(芬娜金针菇FlammulinafennaeHMGIM-A151357)。所述分子标记方法进一步包括采用引物对FAA-F-1和FAA-R-1，或FAA-F-2和FAA-R-3进行普通金针菇的PCR扩增，显示无扩增条带，表明芬娜金针菇新菌株(芬娜金针菇FlammulinafennaeHMGIM-A151357)的鉴定特异性。所述分子标记方法进一步包括采用ITS1/ITS4为引物对进行对照扩增，扩增出条带表明PCR扩增体系的有效性。以下结合具体实施例对本专利技术进行进一步说明。实施例1分子生物学鉴定分离自辽宁省本溪市桓仁县老秃顶子山阔叶树枯木上的芬娜金针菇新菌株芬娜金针菇FlammulinafennaeHMGIM-A151357，采用Magen(美基)生物HiPureFungalDNAMiniKitII真菌基因组DNA抽提试剂盒提取菌丝体DNA，以ITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGG)、ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)为引物进行基因组ITS区域PCR试验，将扩增产物送至上海美吉生物测序，得到碱基数为760bp的序列，序列信息如图1所示。在NCBI网站使用blast程序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芬娜金针菇新菌株，其特征在于，所述芬娜金针菇新菌株为芬娜金针菇Flammulina fennae HMGIM-A151357，保藏编号为CCTCC NO：M 2019478。/n

【技术特征摘要】
1.一种芬娜金针菇新菌株，其特征在于，所述芬娜金针菇新菌株为芬娜金针菇FlammulinafennaeHMGIM-A151357，保藏编号为CCTCCNO：M2019478。


2.权利要求1所述的芬娜金针菇新菌株的分子标记的引物，其特征在于，包括FAA-F-1和FAA-R-1；
其中，
FAA-F-1：5′-GCCCTCCCTTTACCAGTCTTGCTTCCGAT-3′
FAA-R-1：5′-CTCCATCGGGTTGATGTCCGCAAA-3′。


3.权利要求1所述的芬娜金针菇新菌株的分子标记的引物，其特征在于，包括FAA-F-2和FAA-R-3；
其中，
FAA-F-2：5′-GCCCTCCCTTTACCAGTC-3′
FAA-R-3：5′-ATTCCGCATCCTCAACCT-3′。

【专利技术属性】
技术研发人员：吴清平，胡惠萍，刘远超，谢意珍，张智，吴晓贤，王傲，卓丽君，史钏，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，广东粤微生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44