一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法技术

本发明专利技术提供了一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法，属于茶树菇领域。本发明专利技术以白色茶树菇Ag.c0002和野生型茶树菇‘茶5’为亲本进行杂交选育出抗逆性强、产量高、子实体白色，朵形好，具有很好地开发应用前景的白色茶树菇（

A white tea tree mushroom and its molecular marker identification method

【技术实现步骤摘要】
一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法
本专利技术属于茶树菇领域，更涉及一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法。
技术介绍
茶树菇Agrocybecylindracea，中文名称为柱头田头菇，是我们熟悉的一种珍稀食用菌，其营养价值很高，味道鲜美，深受人们喜爱，同时还是民间传统药用菌，享有“中华神菇”之称。子实体颜色是一个重要的商品性状，野生型茶树菇的子实体颜色为浅褐色或褐色（统称为褐色），白色是野生型出现的一个变异性状，属于珍稀的一个品种。目前栽培的茶树菇子实体颜色主要是褐色的品种，白色品种比较少，且种植的白色品种是自然变异的菌株，未经过性状的改良，产量比较低，然而在价格上，当前白色茶树菇的市场价格比褐色的高，干品白色茶树菇一斤比褐色的高约10元，具有较好的经济效益。本专利技术开展白色茶树菇的育种，通过出菇筛选，获得一个性状比较好的白色茶树杂交种。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种白色茶树菇及其分子标记鉴定方法。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种白色茶树菇，其分类命名为白色茶树菇（Agrocybecylindracea）BC5，该菌株已于2019年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M20191017。上述白色茶树菇菌株（Agrocybecylindracea）BC5，简称白色茶树菇BC5是以白色茶树菇和褐色茶树菇进行多次杂交选育的白色茶树菇BC5，其继承了白色茶树菇子实体白色的性状，又遗传了褐色茶树菇抗逆性强、产量高等优良性状，打破了现有白色茶树菇基因资源较单一的局面。白色茶树菇BC5子实体白色，朵形好，抗逆较好，栽培周期同常规的茶树菇，产量高，具有很好地开发应用前景。白色茶树菇BC5（CCTCCNO:M20191017）的母种培养基为马铃薯葡萄糖培养基，即培养基是PDA：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂条20g，水1000mL；培养条件为常规的茶树菇培养，无特殊要求。本专利技术还提供了所述白色茶树菇的分子标记鉴定方法，包括菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、ITS(Internaltranscribedspacer转录间隔区)-PCR扩增、特异酶切片段标记的产生和酶切产物的电泳检测。所述特异酶切片段标记的产生：在4～6μLITS-PCR扩增产物中,加入1μLAccⅡ酶的酶切Buffer，0.4～0.6μLAccⅡ酶,2.4～4.6μLddH2O，总体积10μL，37℃水浴3.5～4h，取酶切产物用于电泳检测；所述酶切产物的电泳检测：经电泳检测，在一个泳道上只有同时出现分子量为680～695bp、520～535bp和150～165bp的DNA标记条带，是白色茶树菇（Agrocybecylindracea）BC5标记。其中电泳条件为：取酶切产物10μL，与1μL上样缓冲液混匀，点样于1.2%的琼脂糖凝胶上，于0.5XTBE缓冲液中，5V/cm电压下电泳；所述上样缓冲液：0.1％溴酚蓝,40%蔗糖。ITS-PCR扩增反应体系：1.2μl含量80~150ng的DNA，2.5μl10×PCRbuffer，2μl浓度为2.5mmol/L的dNTP，1μl浓度为10μmol/L的ITS1,ITS1序列为5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’，1μl浓度为10μmol/L的ITS4，ITS4序列为5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’，0.3μl酶活为5U/ul的TaqDNAPolymerase,17μlddH2O；ITS-PCR扩增反应程序：94℃预变性5min；94℃变性0.8min，55℃退火0.5min，72℃延伸1min,35个循环;72℃延伸10min。本专利技术具有以下优点：1、白色茶树菇BC5含有白色茶树菇与野生型茶树菇的基因，其子实体在颜色上继承了白色茶树菇白色的性状，和野生型茶树菇的抗逆性好、产量高等优良性状，具有很好的开发应用前景。2、白色茶树菇BC5的分子标记鉴定方法具有真实可靠，一目了然的特点，比经典的形态鉴定误差小，不受环境条件的影响，判断更直观。3、专一性强：本专利技术充分利用酶的专一性和高效性，且本专利技术使用的酶对白色茶树菇BC5具有特异性，产生特异识别性的标记片段，非白色茶树菇与野生型茶树的杂种得不到这种效果。4、白色茶树菇BC5的分子标记鉴定方法操作简单，检测时间短，经典的形态鉴定需要检测的指标多，时间长且需要综合起来分析。在一般的分子实验室即可以完成检测，无需要特殊的仪器设备。附图说明图1为白色茶树菇BC5子实体。图2为AccⅡ酶的酶切电泳图。其中，1～5为泳道编号，2～4泳道显示的分子量为690bp，530bp和160bp的DNA标记条带，是白色茶树菇BC5的标志；1泳道显示的分子量为530bp和160bp是白色茶树菇Ag.c0002的标志；5泳道显示的分子量为690bp是野生型茶树菇‘茶5’的标志；M表示分量为DL2000的DNAMARK。具体实施方式为了使本专利技术所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本专利技术所述的技术方案做进一步的说明，但是下述的实例仅仅是本专利技术其中的例子而已，并不代表本专利技术所限定的权利保护范围，本专利技术的权利保护范围以权利要求书为准。实施例1：白色茶树菇BC5的筛选以白色茶树菇Ag.c0002和野生型茶树菇‘茶5’为亲本。通过原生质体单核化技术获得白色茶树菇Ag.c0002的两个单核体‘2-1’和‘2-2’（刘新锐，陈威龙，周一卓，等.柱状田头菇白色变种遗传分析.菌物学报，2019，38(9):1450-1456）。（1）第一次杂交与筛选：‘茶5’分别与‘2-1’和‘2-2’配对，获得杂交子‘H3’和‘H4’。（2）杂交子‘H3’和‘H4’的单胞菌株的筛选：将杂交子‘H3’和‘H4’按茶树菇常规的栽培方法进行出菇试验，分别弹射其担孢子，开展孢子萌发实验，获得‘H3’单孢菌株40个，‘H4’单孢菌株38个。‘H3’单孢菌株分别与‘2-2’配对、H4’单孢菌株分别与‘2-1’配对，配对后进行出菇实验，看配对后的子实体颜色，若子实体白色则是携带白色性状的基因，若是褐色，则携带的是野生型颜色的基因。（3）第二次杂交与筛选：根据单孢菌株在PDA培养基上的生长速度与菌落特征，挑选‘H3’生长良好的单孢且携带白色性状的菌株10个，分别与挑选‘H4’生长良好的单孢且携带白色性状的菌株12个进行单-单杂交，共配对120组，获得120个杂交子，对这120个杂交子先进行在PDA上的生长速度观察，淘汰长势很慢的20个，先随机选择长势快的杂交子30个进入出菇实验。这30个杂交子出菇实验，观察其菌包污染情况、出菇快慢、子实体外观、菌盖开伞快慢、产量，发现杂交子BC5的性状优良。白色茶树菇BC5经多次出菇，子实体白色、菌盖半球形、柄较长较粗，抗逆性较好、产量较高，继承了其两个亲本较优的性状。已于2019年12月05日保藏于中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种白色茶树菇，其特征在于：所述白色茶树菇其分类命名为：白色茶树菇（

【技术特征摘要】
1.一种白色茶树菇，其特征在于：所述白色茶树菇其分类命名为：白色茶树菇（Agrocybecylindracea）BC5，已于2019年12月05日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:M20191017。


2.一种如权利要求1所述的白色茶树菇的分子标记鉴定方法，其特征在于：包括菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、ITS-PCR扩增、特异酶切片段标记的产生和酶切产物的电泳检测；
所述特异酶切片段标记的产生：在4～6μLITS-PCR扩增产物中,加入1μLAccⅡ酶的酶切Buffer，0.4～0.6μLAccⅡ酶,2.4～4.6μLddH2O，总体积10μL，37℃水浴3.5～4h，取酶切产物用于电泳检测；
所述酶切产物的电泳检测：经电泳检测，在一个泳道上只有同时出现分子量为680～695bp、520～535bp和150～165bp...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘新锐，谢宝贵，邓优锦，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35