柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法技术

本发明专利技术公开了柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，包括以下步骤：S1、以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂；S2、用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm；S3、测定柴胡炮制前后氨基酸的含量；其中，步骤S1用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm，包括以下步骤：S101、对照品溶液的制备及衍生化：分别精密称取各氨基酸对照品适量，用50%甲醇配制成一定浓度的对照品溶液。本发明专利技术通过以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂，采用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm测定柴胡炮制前后氨基酸的含量，本测定方法具有可操作性强、成本低、易推广等优势，可作为柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法。

Determination of amino acids in Bupleurum chinense and its processed products

【技术实现步骤摘要】
柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法
本专利技术涉及鳖血柴胡
，具体来说，涉及柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法。
技术介绍
柴胡为伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根，味苦，性微寒，具疏散退热、疏肝解郁、升举阳气之功效；主治感冒发热、寒热往来、胸胁胀痛、月经不调、子宫脱垂、脱肛等。常见柴胡饮片有生柴胡、醋柴胡、鳖血柴胡、酒柴胡、柴胡炭、蜜柴胡等多个品种，而以鳖血柴胡最具特色。鳖血柴胡能填阴滋血，抑制其浮阳之性，增强清肝退热的功效。可用于热入血室、骨蒸劳热，至今仍被临床使用。目前，由于鳖血制柴胡是一种有地方习惯炮制的中药，且需临方炮制，故临床文献报道较少，更缺乏饮片的质量标准规范。针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。
技术实现思路
针对相关技术中的问题，本专利技术提出柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，以克服现有相关技术所存在的上述技术问题。本专利技术的技术方案是这样实现的：柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，包括以下步骤：S1、以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂；S2、用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm；S3、测定柴胡炮制前后氨基酸的含量；其中，步骤S1用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm，包括以下步骤：S101、对照品溶液的制备及衍生化：分别精密称取各氨基酸对照品适量，用50％甲醇配制成一定浓度的对照品溶液，分别吸取各对照品溶液适量，置于同一量瓶中配成混合对照品溶液。吸取混合对照品溶液2mL，置于10mL离心管内，加入0.1mol·L－1异硫氰酸苯酯-乙腈溶液(12∶988)1mL和1.0mol·L－1三乙胺-乙腈溶液(139∶861)1mL，涡旋混合1min，暗处放置1h，加入正己烷4mL，涡旋混合1min，静置10min，下层溶液过0.45μm滤膜，备用；S102、供试品溶液的制备及衍生化：精密称取柴胡样品适量(生品1g，炮制品5g)，准确加入50％甲醇25mL，称定质量，超声提取30min，放至室温，称定质量，加50％甲醇补足减失的质量，于3500r.min－1离心15min，取上层液2mL置于10mL离心管内，后续试验按步骤S101方法操作，备用。S103、空白溶液的制备及衍生化：取50％甲醇溶液2mL，后续试验按步骤S101方法进行衍生化处理，即得。进一步的，还包括以下步骤：鳖血柴胡制备：取净柴胡段100g，加入洁净的新鲜鳖血50mL及黄酒5mL拌匀，闷润至鳖血和酒液被吸尽，150℃炒10min，取出晾凉，即得。进一步的，步骤S2用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm，其中色谱柱流动相梯度洗脱具体如下：色谱柱为4.6mm×250mm，5μm，流动相为乙腈-水4∶1-乙酸钠缓冲溶液pH6.5-乙腈97∶3，梯度洗脱为0～8min，100％～92.5％B；8～20min，92.5％B；20～22min，92.5％～76％B；22～37min，76％B；37～40min，76％～70％B；40～45min，70％B；45～52min，70％～0B，检测波长254nm，流速1mL·min－1，柱温30℃，进样量20μL。进一步的，S3测定柴胡炮制前后氨基酸的含量包括以下步骤：线性关系测定：将17种氨基酸混合对照品溶液，稀释配置成5个梯度混标，以峰面积对质量浓度进行回归处理，计算线性回归方程；精密度试验测定：精密吸取步骤S101下的混合对照品溶液，连续重复进样6次，结果各氨基酸峰面积RSD0.1％～1.5％，用于确定仪器精密度良好；稳定性试验：取步骤S101下的同一份供试品溶液，分别在制备后0h，2h，4h，6h，8h，12h，24h按色谱柱流动相梯度洗脱参数测定，其中各氨基酸峰面积RSD0.3％～1.1％，用于确定供试品溶液在24h内稳定；重复性试验：取同一柴胡样品6份，分别按步骤S103下方法制备供试品溶液，按色谱柱流动相梯度洗脱参数测定，其中各氨基酸含量RSD0.2％～1.1％；样品测定：取柴胡生、制品适量，分别按步骤S102下方法制备供试品溶液，按色谱柱流动相梯度洗脱参数测定测定，每个样品平行3份，每份测定3次，获取样品参数信息。本专利技术的有益效果：本专利技术通过以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂，采用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm测定柴胡炮制前后氨基酸的含量，本测定方法具有可操作性强、成本低、易推广等优势，可作为柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是根据本专利技术实施例的柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法的流程示意图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。根据本专利技术的实施例，提供了柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法。如图1所示，根据本专利技术实施例的柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，包括以下步骤：S1、以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂；S2、用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm；S3、测定柴胡炮制前后氨基酸的含量；其中，步骤S1用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm，包括以下步骤：S101、对照品溶液的制备及衍生化：分别精密称取各氨基酸对照品适量，用50％甲醇配制成一定浓度的对照品溶液，分别吸取各对照品溶液适量，置于同一量瓶中配成混合对照品溶液。吸取混合对照品溶液2mL，置于10mL离心管内，加入0.1mol·L－1异硫氰酸苯酯-乙腈溶液(12∶988)1mL和1.0mol·L－1三乙胺-乙腈溶液(139∶861)1mL，涡旋混合1min，暗处放置1h，加入正己烷4mL，涡旋混合1min，静置10min，下层溶液过0.45μm滤膜，备用；S102、供试品溶液的制备及衍生化：精密称取柴胡样品适量(生品1g，炮制品5g)，准确加入50％甲醇25mL，称定质量，超声提取30min，放至室温，称定质量，加50％甲醇补足减失的质量，于3500r.min－1离心15min，取上层液2mL置于10mL离心管内，后续试验按步骤S101方法操作，备用。S103、空白溶液的制备及衍生化：取50％甲醇溶液2mL，后续试验按步骤S101方法进行衍生化处理，即得。其中，还包括以下步骤：鳖血柴胡制备：取净柴胡段100g，加入洁净的新鲜鳖血50mL及黄酒5mL拌匀，闷润至鳖血和酒液被吸尽，150℃炒10min，取出晾凉，即得。其中，步骤S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂；/nS2、用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm；/nS3、测定柴胡炮制前后氨基酸的含量；/n其中，步骤S1用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm，包括以下步骤：/nS101、对照品溶液的制备及衍生化：分别精密称取各氨基酸对照品适量，用50%甲醇配制成一定浓度的对照品溶液，分别吸取各对照品溶液适量，置于同一量瓶中配成混合对照品溶液，/n吸取混合对照品溶液2mL，置于10mL离心管内，加入0.1mol·L

【技术特征摘要】
1.柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂；
S2、用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm；
S3、测定柴胡炮制前后氨基酸的含量；
其中，步骤S1用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm，包括以下步骤：
S101、对照品溶液的制备及衍生化：分别精密称取各氨基酸对照品适量，用50%甲醇配制成一定浓度的对照品溶液，分别吸取各对照品溶液适量，置于同一量瓶中配成混合对照品溶液，
吸取混合对照品溶液2mL，置于10mL离心管内，加入0.1mol·L－1异硫氰酸苯酯-乙腈溶液（12∶988）1mL和1.0mol·L－1三乙胺-乙腈溶液（139∶861）1mL，涡旋混合1min，暗处放置1h，加入正己烷4mL，涡旋混合1min，静置10min，下层溶液过0.45μm滤膜，备用；
S102、供试品溶液的制备及衍生化：精密称取柴胡样品适量（生品1g，炮制品5g），准确加入50%甲醇25mL，称定质量，超声提取30min，放至室温，称定质量，加50%甲醇补足减失的质量，于3500r.min－1离心15min，取上层液2mL置于10mL离心管内，后续试验按步骤S101方法操作，备用，
S103、空白溶液的制备及衍生化：取50%甲醇溶液2mL，后续试验按步骤S101方法进行衍生化处理，即得。


2.根据权利要求1所述的柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，其特征在于，还包括以下步骤：
鳖血柴胡制备：取净柴胡段100g，加入洁净的新鲜鳖血50mL及黄酒5mL拌匀，闷润至鳖血和酒液被吸尽，150℃炒10min，取出晾凉，即得。


3.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚千锋，于欢，
申请(专利权)人：江西中医药大学，
类型：发明
国别省市：江西;36