一种鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂制造技术

本发明专利技术提供了一种鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，所述检测试剂包括包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球、碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体和化学发光底物；其中，所述磁性微球为二氧化硅磁性复合微粒。本发明专利技术提供的鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂成分简单，检测灵敏度高，并且可在较短的时间内实现快速精确的检测。

A detection reagent for squamous cell carcinoma antigen

【技术实现步骤摘要】
一种鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂
本专利技术属于医学检测
，涉及一种鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂。
技术介绍
鳞状细胞癌抗原(SquamousCellCareinomaAntigen，SCCA)是一种特异性很好而且是最早用于诊断癌的肿瘤标志物。他是一种从子宫组织中提取的糖蛋白，属于丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶抑制物家族的糖蛋白，由高度同源而生物学功能截然不同的SCCA1和SCCA2组成，均含有390个氨基酸，分子量约为45kDa。SCCA广泛存在于不同器官的正常组织中(含量极微)和恶性病变的上皮细胞中；血清中的SCCA浓度和鳞状细胞癌分化程度有关，正常人血清中SCCA浓度小于1.5ng/mL。少数良性疾病也能见SCC升高，如肺部感染、皮肤炎、肾衰和肝病。其对子宫颈癌有较高的诊断价值，敏感性及特异性较好，同时辅助诊断肺部、食道等鳞癌，其水平与肿瘤的发展程度有关，与CYFRA21-1联合检测可以提高准确性及灵敏度。目前已知的鳞状上皮细胞癌抗原测定方法有放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、胶乳增强比浊法等。然而，ELISA方法局限性较大，特异性差，灵敏度低并且准确性不高。放射性免疫疗法虽然被认为是准确可靠的方法，但是放射性同位素的辐射影响，废物处理需要专门的实验室，成本高和半衰期短的弊端，已经使该方法逐渐淘汰。乳胶增强免疫比浊法操作简单、快速，但是灵敏度低且重复性差。CN103454417A公开了一种鳞状上皮细胞癌抗原生物传感器的制备方法和应用，其基于氮掺杂石墨烯和Pd-Au/C负载型纳米催化剂，制备了一种夹心型电化学免疫传感器，其可实现对鳞状上皮细胞癌抗原的快速检测，但是检测精确度较低。CN104614526A公开了一种鳞状上皮细胞内癌SCC-TCT联合检测方法；该方法是将宫颈部位的脱落细胞取样，预处理后得到样品溶液；将皂素和样品溶液，离心后取沉淀，加入磷酸盐缓冲液混匀后，进行细胞数总数的计数；将计数后的细胞悬液离心后加入磷酸盐缓冲液进行至少一次冻融，得到SCC抗原游离、释放后的样品溶液；然后对其进行细胞内SCC抗原酶标检验分析；根据测定结果判断筛选，将高于临界值的标本筛选出来，该标本相对应的样品溶液在液基细胞仪上制成均匀涂片后固定，巴氏染色法染色，显微镜细胞形态学分析，判断肿瘤细胞的形态；该方法太过复杂。因此，想要提供一种制备方法简单，检测灵敏度高的检测试剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，本专利技术提供的鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂成分简单，检测灵敏度高，并且可在较短的时间内实现快速精确的检测。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，所述检测试剂包括包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球、碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体和化学发光底物；其中，所述磁性微球为二氧化硅磁性复合微粒。本专利技术特异性的选择了二氧化硅磁性复合微球，相比于其他磁性微球，其具有更多的结合位点，可结合更多的抗体，进而可以使本专利技术提供的检测试剂在较低的检测浓度下具有较高的检测精度；并且包被性能较好，不易洗脱，可以减少在后续检测样品过程中由于包被较差而造成的误差增大现象。在本专利技术中，所述二氧化硅磁性复合微粒包括二氧化硅壳层和磁性三氧化二铁纳米内核。本专利技术的二氧化硅磁性复合微粒为现有技术中可获得的磁性微球。优选地，所述磁性微球的粒径为5-10μm，例如5.5μm、6μm、6.5μm、7μm、7.5μm、8μm、8.5μm、9μm、9.5μm等，进一步优选8-10μm，例如8.2μm、8.5μm、8.8μm、9.0μm、9.2μm、9.5μm、9.8μm等。本专利技术优选磁性微球的粒径在5-10μm范围内，若粒径过大，则可能会造成鳞状上皮细胞癌抗原抗体的包被量过多，容易使部分鳞状上皮细胞癌抗原抗体脱落，进而影响测量精确度；若粒径过小，则不利于鳞状上皮细胞癌抗原抗体的包被。在本专利技术中，所述化学发光底物为4-硝基苯磷酸二钠盐六水合物。相较于其他发光底物，本专利技术的发光底物发光时间较长，反应灵敏且颜色鲜明。优选地，所述碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体的制备方法包括如下步骤：活化的碱性磷酸酶溶液和活化的鳞状上皮细胞癌抗原抗体溶液混合，然后进行偶联反应，得到碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体。优选地，所述磁性微球偶联有链霉亲和素。优选地，所述鳞状上皮细胞癌抗原抗体通过链霉亲和素包被于所述磁性微球上。优选地，所述包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球的制备方法如下：将鳞状上皮细胞癌抗原抗体溶液加入磁性微球中，孵育包被，得到所述包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球。优选地，所述制备方法如下：(1)将链霉亲和素溶液加入磁性微球中进行偶联反应，得到链霉亲和素偶联的磁性微球；(2)将鳞状上皮细胞癌抗原抗体溶液加入链霉亲和素偶联的磁性微球中进行孵育包被，得到所述包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球。优选地，在所述鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂中，所述碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体的浓度为0.1-0.5μg/mL，例如0.2μg/mL、0.3μg/mL、0.4μg/mL等。优选地，在所述鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂中，所述包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球的浓度为0.1-0.5μg/mL，例如0.2μg/mL、0.3μg/mL、0.4μg/mL等。相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：(1)本专利技术特异性的选择了二氧化硅磁性复合微球，相比于其他磁性微球，其具有更多的结合位点，可结合更多的抗体，进而可以使本专利技术提供的检测试剂在较低的检测浓度下具有较高的检测精度；并且包被性能较好，不易洗脱，可以减少在后续检测样品过程中由于包被较差而造成的误差增大现象；(2)本专利技术优选磁性微球的粒径在5-10μm范围内，若粒径过大，则可能会造成鳞状上皮细胞癌抗原抗体的包被量过多，容易使部分鳞状上皮细胞癌抗原抗体脱落，进而影响测量精确度；若粒径过小，则不利于鳞状上皮细胞癌抗原抗体的包被。具体实施方式下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本专利技术，不应视为对本专利技术的具体限制。实施例1一种鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，由包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球、碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体和化学发光底物组成。其中，碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体的浓度为0.3μg/mL，包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球的浓度为0.3μg/mL，化学发光底物为4-硝基苯磷酸二钠盐六水合物。包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球的制备方法如下：(1)取羧基化的纳米磁性微球(粒径为8μm)的MES(2-(N-吗啉代)乙磺酸)悬浮液加入EDC(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)进行活本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球、碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体和化学发光底物；/n其中，所述磁性微球为二氧化硅磁性复合微粒。/n

【技术特征摘要】
1.一种鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括包被鳞状上皮细胞癌抗原抗体的磁性微球、碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体和化学发光底物；
其中，所述磁性微球为二氧化硅磁性复合微粒。


2.根据权利要求1所述的鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，其特征在于，所述二氧化硅磁性复合微粒包括二氧化硅壳层和磁性三氧化二铁纳米内核。


3.根据权利要求1或2所述的鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，其特征在于，所述磁性微球的粒径为5-10μm，进一步优选8-10μm。


4.根据权利要求1-3中的任一项所述的鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，其特征在于，所述化学发光底物为4-硝基苯磷酸二钠盐六水合物。


5.根据权利要求1-4中的任一项所述的鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体的制备方法包括如下步骤：
活化的碱性磷酸酶溶液和活化的鳞状上皮细胞癌抗原抗体溶液混合，然后进行偶联反应，得到碱性磷酸酶标记的鳞状上皮细胞癌抗原抗体。


6.根据权利要求1-5中的任一项所述的鳞状上皮细胞癌抗原检测试剂，其特征在于，所述磁性微球偶联有链霉亲和素；

【专利技术属性】
技术研发人员：冯涛，陈国动，周慧，张楠，朱红甜，
申请(专利权)人：南京迪安医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32