【技术实现步骤摘要】
用于裂解玉米赤霉烯酮的手段和方法
本专利技术涉及一种用于增加α/β-水解酶的稳定性的方法。另外,本专利技术涉及一种通过本专利技术的方法能够获得的α/β-水解酶。本专利技术还提供具有降低的总平均亲水性(GRAVY)值和/或包含特定突变的α/β-水解酶。此外,本专利技术涉及本专利技术的α/β-水解酶用于降解玉米赤霉烯酮(ZEN)的用途。
技术介绍
真菌毒素是丝状真菌产生的次生代谢物。真菌毒素的一个重要代表是由许多镰孢菌真菌产生并在世界各地均可发现的玉米赤霉烯酮(ZEN)(以前称为F-2毒素)。这些真菌尤其侵染栽培植物,例如各种各样的谷类,其中真菌侵染通常出现在收获之前,这时真菌生长和/或真菌毒素产生可以在贮藏之前或甚至收获之后发生,即贮藏之前或不适当的贮藏条件下发生。联合国粮农组织(FAO)估计,在世界范围内25%的农产品被真菌毒素污染,这导致巨大的经济损失。在一项跨越8年的国际研究中,从2004年1月至2011年12月分析了总共19,757个样品,其中72%样品经测试呈至少一种真菌毒素阳性,发现39%样品被污染,和37%样品经测试呈ZEN阳性(Schatzmayr和Streit(2013)‘Globaloccurrenceofmycotoxinsinthefoodandfeedchain:Factsandfigures.’WorldMycotoxinJournal6(3):213-222)。在世界的所有地区中,并且在经测试的所有类别的谷物和饲料作物,例如玉米、大豆粉、小麦、麦麸、DDGS(含有可溶物的干酒糟)中,以及在 ...
【技术保护点】
1.一种用于增加α/β-水解酶的稳定性的方法,所述α/β-水解酶包含对应于SEQ ID NO:1的位置145至218的序列,或包含与对应于SEQ ID NO:1的位置145至218的序列具有58%或更高的序列同一性的序列,所述方法包括:/n在以下位置处置换至少一个氨基酸:/n-对应于SEQ ID NO:1的位置160至205的位置,或/n-对应于SEQ ID NO:2的位置159至204的位置,或/n-对应于SEQ ID NO:3、4或5的位置160至205的位置,或/n-对应于SEQ ID NO:6的位置176至222的位置,/n其中,采用这样的氨基酸置换所述氨基酸:所采用的氨基酸具有比被置换的氨基酸更负的亲水指数,/n其中所述亲水指数由Kyte和Doolittle亲水指数确定,/n由此获得具有增加的稳定性的α/β-水解酶。/n
【技术特征摘要】
20180731 EP EP1818653201.一种用于增加α/β-水解酶的稳定性的方法,所述α/β-水解酶包含对应于SEQIDNO:1的位置145至218的序列,或包含与对应于SEQIDNO:1的位置145至218的序列具有58%或更高的序列同一性的序列,所述方法包括:
在以下位置处置换至少一个氨基酸:
-对应于SEQIDNO:1的位置160至205的位置,或
-对应于SEQIDNO:2的位置159至204的位置,或
-对应于SEQIDNO:3、4或5的位置160至205的位置,或
-对应于SEQIDNO:6的位置176至222的位置,
其中,采用这样的氨基酸置换所述氨基酸:所采用的氨基酸具有比被置换的氨基酸更负的亲水指数,
其中所述亲水指数由Kyte和Doolittle亲水指数确定,
由此获得具有增加的稳定性的α/β-水解酶。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述方法包括在以下位置处置换至少一个氨基酸:
-对应于SEQIDNO:1的位置185至191的位置,和/或
-对应于SEQIDNO:2的位置184至190的位置,和/或
-对应于SEQIDNO:3、4或5的位置185至191的位置,和/或
-对应于SEQIDNO:6的位置201至208的位置。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其中采用选自R、K、N、Q、D、E、H、P、Y、W、S、T、G、A、M、C、F、L或V的氨基酸置换所述氨基酸,优选地,所采用的氨基酸选自R、K、N、Q、D、E、H、P、Y、W、S、T或G,更优选地选自R、K、N、Q、D、E、H或P。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中采用选自R、D、H、G、N或P,优选地选自R、D、H、G或N的氨基酸置换所述氨基酸,更优选地,所采用的氨基酸选自R或N。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述氨基酸置换选自以下的一个或多个:V→A、G→R、G→S、A→P、A→R、A→D、A→H、A→N、A→G、S→D、P→H、M→D、G→E、I→A、I→V、H→N、Q→K、F→Y和/或V→C,优选地,所述氨基酸置换选自以下的一个或多个:V160A、G185R、G185S、A186P、A186R、A188D、A188H、A188N、A188G、A188R、S189D、P190H、M191D、G199E、I200A、I200V、H203N、Q205K、F183Y和/或V197C,更优选地,所述氨基酸置换选自G185R、A186R、A188R、A188D、A188H、A188N和/或M191D。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述增加的稳定性为GRAVY值的降低,pH稳定性的增加和/或温度稳定性的增加。
7.一种通过权利要求4、5或6中任一项所述的方法能够获得的α/β-水解酶。
8.一种具有多肽序列的α/β-水解酶,所述多肽序列包含对应于SEQIDNO:1的位置145至218的序列,或包含与对应于SEQIDNO:1的位置145至218的序列具有大于58%的序列同一性的序列,
其中,所述多肽序列包含在以下位置处的至少一个氨基酸置换:
-对应于SEQIDNO:1的位置160至205的位置,或
-对应于SEQIDNO:2的位置159至204的位置,或
-对应于SEQIDNO:3、4或5的位置160至205的位置,或
-对应于SEQIDNO:6的位置176至222的位置,
其中,所述α/β-水解酶具有的GRAVY值与具有SEQIDNO:1的多肽序列的α/β-水解酶的GRAVY值相比负至少0.6%...
【专利技术属性】
技术研发人员:M·萨姆海塞尔,S·弗鲁豪夫,W·D·摩尔,A·霍巴特纳,G·沙特兹迈尔,E·M·宾德,M·阿莱希科,M·费菲尔,
申请(专利权)人:奥地利商艾尔柏有限公司,
类型:发明
国别省市:奥地利;AT
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