卤酸脱卤酶超家族蛋白的变体及使用其降低样品中含氟化合物浓度的方法技术

提供了卤代酸脱卤素酶超家族蛋白的变体和利用所述变体降低样品中的含氟化合物浓度的方法。

Variants of halogenase superfamily proteins and their application in the reduction of fluoride concentration in samples

【技术实现步骤摘要】
卤酸脱卤酶超家族蛋白的变体及使用其降低样品中含氟化合物浓度的方法相关申请的交叉引用本申请要求于2018年7月24日在韩国知识产权局提交的韩国专利申请第10-2018-0086025号的权益，其公开内容以其整体通过引用并入本文。以电子方式提交的材料的参考文献本申请含有以ASCII格式以电子方式提交并且在此以引用的方式整体并入的序列表。在2019年3月28日创建的所述ASCII副本的名称是B2047-7124WO_SL.txt并且大小是288,381个字节。背景1.领域本专利技术涉及重组微生物，其包括编码卤代酸脱卤素酶超家族变体蛋白的外源基因，包含用于去除样品中含氟化合物的变体的组合物，以及使用该变体降低样品中含氟化合物浓度的方法。2.相关领域的描述温室气体的排放加速了全球变暖，成为严重的环境问题，减少和防止温室气体排放的法规已经加强。在温室气体中，氟化气体，比如全氟化碳(PFC)、氢氟烃(HFC)和六氟化硫(SF6)，显示了低的绝对排放量，但其具有长半衰期和非常高的全球变暖潜势，导致显著不利的环境影响。半导体和电子工业排放的氟化气体的量是氟化气体排放的主要原因，已经超过了温室气体排放的指定量，并且仍在持续增加。因此，温室气体分解和温室气体排放许可所需的成本每年都在增加。热解或催化热氧化方法通常用于分解氟化气体。然而，这些方法具有分解率有限，二次污染物排放和成本高缺点。已经提出了使用微生物生物催化剂对氟化气体进行生物分解，克服现有化学分解过程的限制并且还以更经济和环保的方式处理氟化气体。卤代酸脱卤素酶(HAD)超家族是酶的超家族，其包括磷酸酶、磷酸腺苷酶、P型ATP酶、β-磷酸葡糖苷酶、磷酸甘露糖苷酶和脱卤素酶。HAD参与从氨基酸生物合成到脱毒的多种细胞过程。存在对于HAD超家族的变体的需求以用于F-气体的生物分解。本文提供了这些变体。概述本文提供卤代酸脱卤素酶(HAD)超家族蛋白的变体。在本公开内容的一个方面，变体卤代酸脱卤素酶超家族(HAD)蛋白包含对应于SEQIDNO：2的N206，T208或V210位的至少一个氨基酸残基的单独取代，或与对应于SEQIDNO：2的位置S184的氨基酸残基的取代。在另一方面，对应于SEQIDNO：2的位置S184的氨基酸残基的取代是S184H，S184K或S184R；对应于SEQIDNO：2的N206位的氨基酸残基的取代是N206M，N206G，N206A，N206V，N206L，N206I，N206F，N206W或N206P；对应于SEQIDNO：2的位置T208的氨基酸残基的取代是T208Q，T208S，T208C，T208Y或T208N；对应于SEQIDNO：2的V210位的氨基酸残基的取代是V210D或V210E。提供了组合物，其包含变体和包含该变体的重组微生物或编码所述变体的多核苷酸。任选地，载体，其用于降低样品中含氟化合物浓度。进一步提供了编码变体的多核苷酸和包含该多核苷酸的载体。还提供了降低样品中含氟化合物浓度的方法，该方法包括使包含含氟化合物的样品与本文所述的变体HAD蛋白或重组微生物接触，以降低样品中含氟化合物的浓度。附图简述通过结合附图对以下实施方案进行描述，这些和/或其他方面将变得显而易见并且更容易理解，其中：图1是pET-SF0757载体的载体图谱；图2是pTrc-BANF-SF0757载体的载体图谱；图3是Dimroth回流冷凝器的示意图；和图4显示了微泡过程流程图。详述现在将详细参考实施方案，其示例在附图中示出，其中，相同的标号始终表示相同的元素。在这方面，本专利技术实施方案可以具有不同的形式，并且不应该被解释为限于本文所列出的描述。因此，以下仅通过参考附图来描述实施方案以解释方面。诸如“……中的至少一个”之类的表达，当在一列元素之前时，修饰整列元素而不是修饰所列的单独的元素。另外的方面将部分地在以下的描述中阐述，并且部分地将从描述中显而易见，或者可以通过实践所示的实施方案来学习。如本文所用的术语“基因”或“多核苷酸”可以指表达特定蛋白质的核酸的片段。基因可包括编码区的调节序列或包括5’-非编码序列和3’-非编码序列的非编码区的调节序列。调节序列可包括启动子、增强子、操纵子、核糖体结合位点、polyA结合位点和终止子区等。如本文所用的术语，核酸或多肽的“序列同一性”是指在某些比较区域中比对至最佳匹配后序列的碱基或氨基酸残基之间的同一性程度。序列同一性是通过两个序列的最佳比对来比较某个比较区域中的两个序列而测量的值，其中与参考序列相比，可以添加或缺失比较区域中序列的一些部分。例如，可以如下计算序列同一性的百分比：在整个比较区域中比较两个最佳比对的序列；在两个序列中出现相同氨基酸或核酸的位置的数量被确定为匹配位置的数量；匹配位置的数量除以比较区域中的位置总数(即，范围的大小)；并且将除法的结果乘以100以获得序列同一性的百分比。可以使用已知的序列比较程序确定序列同一性的百分比，比如，BLASTN或BLASTP(NCBI)，CLCMainWorkbench(CLCbio)或MegAlign(DNASTARInc)。除非在说明书中另有说明，否则用于执行程序的参数的选择可以如下：E值＝0.00001且H值＝0.001。不同水平的序列同一性可用于鉴定具有不同物种的相同或相似功能或活性的肽或多核苷酸。例如，序列同一性可以是50％或更高，55％或更高，60％或更高，65％或更高，70％或更高，75％或更高，80％或更高，85％或更高，90％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，99％或更高，或100％。本公开内容的一个方面提供了卤代酸脱卤素酶超家族(HAD)蛋白的变体，该变体包括在对应于SEQIDNO:2的S184位的氨基酸残基中的氨基酸改变和对应于SEQIDNO:2的N206、T208和V210位的至少一个氨基酸残基；或者，对应于SEQIDNO:2的N206、T208和V210位的至少一个氨基酸残基中的氨基酸改变。根据某些实施例，位置S184中的氨基酸改变可包括取代S184H，S184K或S184R。N206位的氨基酸改变可包括取代N206M，N206G，N206A，N206V，N206L，N206I，N206F，N206W或N206P。位置T208的氨基酸改变可包括取代T208Q，T208S，T208C，T208Y或T208N。位置V210的氨基酸改变可包括取代V210D或V210E。根据某些实施例，变体可以是在对应于SEQIDNO:2的S184和N206位的氨基酸残基中具有氨基酸改变；对应于SEQIDNO:2的S184、N206和T208位的氨基酸残基改变；或对应于SEQIDNO:2的S184、N206和V210位的氨基酸残基改变。关于变体，氨基酸改变可包括在SEQIDNO:2的氨基酸序列中的S184H和N206M的置换；SEQIDNO:2的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卤代酸脱卤素酶超家族(HAD)变体蛋白，所述变体包括：/n对应于SEQ ID NO:2的S184位置的氨基酸残基的取代和对应于SEQ ID NO:2的N206、T208和V210位置的至少一个氨基酸残基的取代；或者，/n对应于SEQ ID NO:2的N206、T208和V210位的至少一个氨基酸残基的取代，/n其中对应于SEQ ID NO:2的S184位置的氨基酸残基的取代是S184H、S184K或S184R；/n对应于SEQ ID NO:2的N206位置的氨基酸残基的取代是N206M、N206G、N206A、N206V、N206L、N206I、N206F、N206W或N206P；/n对应于SEQ ID NO:2的T208位置的氨基酸残基的取代是T208Q、T208S、T208C、T208Y或T208N；/n和对应于SEQ ID NO:2的V210位置的氨基酸残基的取代是V210D或V210E。/n

【技术特征摘要】
20180724 KR 10-2018-00860251.一种卤代酸脱卤素酶超家族(HAD)变体蛋白，所述变体包括：
对应于SEQIDNO:2的S184位置的氨基酸残基的取代和对应于SEQIDNO:2的N206、T208和V210位置的至少一个氨基酸残基的取代；或者，
对应于SEQIDNO:2的N206、T208和V210位的至少一个氨基酸残基的取代，
其中对应于SEQIDNO:2的S184位置的氨基酸残基的取代是S184H、S184K或S184R；
对应于SEQIDNO:2的N206位置的氨基酸残基的取代是N206M、N206G、N206A、N206V、N206L、N206I、N206F、N206W或N206P；
对应于SEQIDNO:2的T208位置的氨基酸残基的取代是T208Q、T208S、T208C、T208Y或T208N；
和对应于SEQIDNO:2的V210位置的氨基酸残基的取代是V210D或V210E。


2.根据权利要求1所述的变体，其中所述变体蛋白包括：
对应于SEQIDNO：2的位置S184和N206的氨基酸残基的取代；
对应于SEQIDNO：2的位置S184，N206和T208的氨基酸残基的取代；或
对应于SEQIDNO：2的位置S184，N206和V210的氨基酸残基的取代。


3.根据权利要求2所述的变体，其中所述变体蛋白参照SEQIDNO：2包含以下取代：
S184H和N206M；
S184H，N206M和T208D；或
S184H，N206M和V210D。


4.多核苷酸，其编码权利要求1的卤代酸脱卤素酶超家族(HAD)变体蛋白。


5.根据权利要求4所述的多核苷酸，其中所述变体蛋白包含：
对应于SEQIDNO：2的位置S184和N206的氨基酸残基的取代；
对应于SEQIDNO：2的位置S184，N206和T208的氨基酸残基的取代；或
对应于SEQIDNO：2的位置S184，N206和V210的氨基酸残基的取代。


6.根据权利要求5所述的多核苷酸，其中所述变体蛋白包含以下氨基酸取代：
S184H和N206M；
S184H，N206M和T208Q；或
S184H，N206M和V210D。


7.重组载体，其包含权利要求4的多核苷酸。


8.根据权利要求7所述的重组载体，其中所述变体蛋白包含：
对应于SEQIDNO：2的位置S184和N206的氨基酸残基的取代；
对应于SEQIDNO：2的位置S184，N206和T208的氨基酸残基的取代；或
对应于SEQIDNO：2的位置S184，N206和V210的氨基酸残基的取代。


9.根据权利要求8所述的重组载体，其中所述变体蛋白包含以下氨基酸取代：
S184H和N206M；
S184H，N206M和T208Q；或
S184H，N206M和V210D。...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑有景，金兑勇，朴珍雨，朴焌盛，李陈肃，姜昌德，卞钟元，宋承勋，
申请(专利权)人：三星电子株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR