一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用制造技术

本发明专利技术针提供一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Small molecule polydeoxyribonucleotide,SMPDRN)产品及其可控精准制备方法，以及其在化妆品、药品、营养食品、保健食品领域的应用。本发明专利技术中的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量为50bp～1000bp，其分子量位于50bp～500bp片段的质量占其总质量的的85％以上。本发明专利技术中的SMPDRN的分子量集中于高功效范围，针对性更强，功效更稳定，获得的产品经细胞、动物、人体实验证实在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤口愈合、紧致皮肤、增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老、抗氧化并防止色斑形成、抗炎、修复受损细胞等方面均具有显著效果，优于现有PDRN产品。

Preparation and application of a small molecular polydeoxyribonucleotide

【技术实现步骤摘要】
一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用
本专利技术具体涉及一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸及其制备与应用。
技术介绍
脱氧核糖核酸(DNA)作为生物体的重要遗传物质，一方面其在调控基因、蛋白表达，改善细胞状态，维持机体的正常生理功能方面发挥着重要的作用；另一方面它作为原料库，为机体生长、发育、修复提供了所需要的脱氧核糖核苷酸。但由于DNA链比较长，分子量大且带有电荷，导致其不宜通过细胞膜被机体吸收。制药、医美、保健品行业的科研工作者长期致力于寻找碱基组成与人体相似性高的DNA生物材料。经过研究者不懈的努力，证实三文鱼DNA的碱基组成与人体DNA的相似性达98％，如图1所示。最先发现三文鱼DNA有功效的是意大利渔民，他们发现把三文鱼精巢里的精液挤出周期性地涂抹在伤口处可以有效地抑制伤口溃烂，促进伤口愈合。意大利Mastelli公司、韩国BRPHARM公司在此基础上分别从海鳟鱼的生殖细胞、三文鱼精巢中提取聚脱氧核苷酸(PolyDeoxyRiboNucleotide，PDRN)，该物质在促进人体细胞再生，加快伤口愈合，减少疤痕生成方面具有疗效。然而，现有PDRN制备技术工艺复杂，步骤繁琐，在纯化过程中使用了大量有机溶剂和蛋白酶，产率偏低。同时其制备的可控性及相关产品的功效显著性、功效针对性、功效稳定性尚需提高。
技术实现思路
本专利技术针对上述现有技术存在的不足，提供一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Smallmoleculepolydeoxyribonucleotide,SMPDRN)产品及其可控精准制备方法，以及其在化妆品、药品、营养食品、保健食品领域的应用。具体技术方案如下：本专利技术的目的之一是提供一种一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸(Smallmoleculepolydeoxyribonucleotide,SMPDRN)产品。所述的三文鱼包括大西洋鲑、太平洋鲑和虹鳟。所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸(即SMPDRN)其分子量区间为10bp～1500bp。优选的，所述小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量为50bp～1000bp，其中分子量位于50bp～500bp片段的质量占其总质量的85％以上。再进一步，所述小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其分子量位于100bp～200bp的片段的质量占小分子多聚脱氧核糖核苷酸总质量的90％以上。本专利技术的第二个目的是提供一种分子量集中于其功效区间的三文鱼小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法。一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸SMPDRN的制备方法，以三文鱼的内脏、肉、精巢、精液、卵为材料，包括如下步骤：(1)将三文鱼组织使用碱裂解液进行裂解，所述的碱裂解液含有0.05～1mol/LEDTA，0.5～5mol/LNaOH,0.1wt％～5wt％SDS；(2)将步骤(1)获得的反应体系中加入Tris-HCl；(3)向步骤(2)中获得的反应体系中加入HCL；(4)将步骤(3)获得的反应体系离心，收集上清；(5)将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪进行分子破碎；(6)在步骤(5)获得的反应体系中加入NH4AC，再加入无水乙醇，放置30min以上；(7)将步骤(6)获得的反应体系离心，保留沉淀，得SMPDRN。优选的，步骤(1)的工作条件为：在三文鱼组织中加入所述的碱裂解液，三文鱼组织与碱裂解液的用量比为1g:(5～15)mL；破碎组织，颠倒混匀，90～100℃恒温水浴15～60min。优选的，步骤(2)的工作条件为：将步骤(1)获得的反应体系冰浴至40℃以下，按照其总体积的1/3～1的体积比例加入0.5～4mol/LTris-HCl，，颠倒混匀。优选的，步骤(3)的工作条件为：按照步骤(2)获得的反应体系的总体积的1/5～1的体积比例加入0.5～5mol/LHCL,颠倒混匀。优选的，步骤(4)的工作条件为：将步骤(3)获得的反应体系0℃以上5000～12000rpm离心5～20min，收集上清。优选的，步骤(5)的工作条件为：将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪破碎5s～5min。优选的，步骤(6)的工作条件为：按照步骤(5)获得的反应体系总体积的1/10～1/5的体积比例加入10mol/LNH4AC溶液，再加入0℃以下预冷的无水乙醇，颠倒混匀，0℃以下放置30min以上；。优选的，步骤(7)的工作条件为：将步骤(6)获得的反应液0℃以上6000～12000rpm离心5～20min，倾去无水乙醇，加入50wt％～80wt％的乙醇，使沉淀泛起，然后6000～12000rpm离心5～20min，保留沉淀。优选的，所述的制备方法还包括用生理盐水悬浮步骤(7)获得的沉淀，然后置于真空冷冻干燥仪中干燥。将步骤(7)获得的沉淀用TE液溶解，进行琼脂糖凝胶电泳，可验证本专利技术的制备方法得到的SMPDRN的分子量位于50bp～500bp的片段的数量在85％以上，高度集中。在本专利技术的实施例2中，制备得SMPDRN的分子量位于100bp-200bp的片段的数量在90％以上。本专利技术的制备方法产率高，达到9～14％；获得的产品纯度高，使用分光光度法检测其纯度(260nm/280nm)为1.6～1.9。本专利技术特有的制备方法使SMPDRN的分子量集中于高功效范围，针对性更强，经细胞、动物、人体实验，专利技术人发现获得的产品在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤口愈合、紧致皮肤、增加皮肤弹性、消除皱纹、延缓皮肤衰老、抗氧化并防止色斑形成、抗炎、修复受损细胞等方面均具有显著优于现有PDRN的效果。实施例中有实验数据证实上述效果。此外，本专利技术的制备方法实现了分子量集中于50～500bp甚至100bp～200bp，有效地避免了较大分子量或较小分子量片段的产生，成分的相对统一可提高其靶效性，增加其生物活性。本专利技术的第三个目的是提供小分子多聚脱氧核糖核苷酸在化妆品、药品、营养食品、保健食品中的应用，应用形式包括面膜、乳剂、溶液、胶体制剂、粉针剂、注射液、片剂或胶囊。本专利技术提供了SMPDRN在提高细胞活性，减少自由基生成，抗氧化中的应用本专利技术提供了SMPDRN增加皮肤弹性，消除皱纹延缓皮肤衰老中的应用。本专利技术提供了SMPDRN促进伤口愈合中的应用。本专利技术提供了SMPDRN防止黑斑、黄褐斑、老年斑的形成中的应用。本专利技术提供了SMPDRN抗炎作用，修复受损细胞中的应用.本专利技术所述的SMPDRN在用于上述任一用途时，其使用剂量范围为每次0.1mg～1g，优选每次0.5mg～0.1g，更优选为每次1mg～20mg。本专利技术的有益效果如下：本专利技术中的SMPDRN的分子量集中于高功效范围，针对性更强，功效更稳定，获得的产品经细胞、动物、人体实验证实在提高细胞活性、促进胶原蛋白合成、使受损皮肤再生、促进伤本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其特征在于，来源于三文鱼，所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量位于50bp～500bp片段的质量占其总质量的85％以上。/n

【技术特征摘要】
1.一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其特征在于，来源于三文鱼，所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量位于50bp～500bp片段的质量占其总质量的85％以上。


2.根据权利要求1所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其特征在于，所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量位于100bp～200bp片段的质量占其总质量的90％以上。


3.根据根据权利要求1或2所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸，其特征在于，所述的小分子多聚脱氧核糖核苷酸的分子量为50～1000bp。


4.一种小分子多聚脱氧核糖核苷酸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将三文鱼组织使用碱裂解液进行裂解，所述的碱裂解液含有0.05～1mol/LEDTA，0.5～5mol/LNaOH,0.1wt％～5wt％SDS；
(2)将步骤(1)获得的反应体系中加入Tris-HCl；
(3)向步骤(2)中获得的反应体系中加入HCL；
(4)将步骤(3)获得的反应体系离心，收集上清；
(5)将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪进行分子破碎；
(6)在步骤(5)获得的反应体系中加入NH4AC，再加入无水乙醇，放置30min以上；
(7)将步骤(6)获得的反应体系离心，保留沉淀，得小分子多聚脱氧核糖核苷酸。


5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)的工作条件为：在三文鱼组织中加入所述的碱裂解液，三文鱼组织与碱裂解液的用量比为1g:(5～15)mL；破碎组织，颠倒混匀，90～100℃恒温水浴15～60min。


6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)的工作条件为：将步骤(4)获得的上清液用DNA打断仪破碎5s～5min。


7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)的工作条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：王超云，高原，董书萍，
申请(专利权)人：王超云，高原，董书萍，
类型：发明
国别省市：山东;37