【技术实现步骤摘要】
一种控制猪PFKM表达的载体及其应用
本专利技术涉及生物
，涉及猪CRISPR/Cas9基因敲除质粒载体的构建。
技术介绍
肌型磷酸果糖激酶(PFKM)是在骨骼肌中广泛表达的一类调节酶，它也是糖酵解的一个关键调节酶，是糖酵解中起决定作用的限速酶，其分子是一个四聚体形式。其功能和表达量的变化会通过调节靶基因的表达，改变肌肉的纤维组成(红、白肌的比例)及造成瘦肉率变化。该基因的表达抑制有助于研究该基因的功能。gRNA长度约为80个核苷酸，包含两个区域：gRNA5’端前20个核苷酸对应于靶标DNA，能结合在靶标DNA上，其中含有一PAM结构，能与由任意核苷酸序列(N)+5’末端两个胞嘧啶核苷酸(-NCC)的DNA结合，即-NGG。剩余的约60个核苷酸形成一个发卡，此结构能帮助gRNA与Cas9结合，并由此指导与DNA的结合。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种控制猪PFKM表达的载体及相应的PFKM基因敲除细胞株。本专利技术提供一种重组载体，所述载体包括sgRNA的编码基因和Cas9蛋...
【技术保护点】
1.一种重组载体，其特征在于：所述载体包括sgRNA的编码基因和Cas9蛋白编码基因，所述sgRNA的靶位点为序列1所示的DNA。/n
【技术特征摘要】
1.一种重组载体，其特征在于：所述载体包括sgRNA的编码基因和Cas9蛋白编码基因，所述sgRNA的靶位点为序列1所示的DNA。
2.根据权利要求1所述的载体，其特征在于：所述sgRNA为序列2所示的RNA。
3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于：所述sgRNA的编码基因的编码序列为序列3。
4.根据权利要求1-3任一所述的载体，其特征在于：所述重组载体是在P1质粒的Bbsl识别位点处插入所述sgRNA的编码基因，并保持所述PI质粒的其他核苷酸不变的重组载体，包括pYSY、CMV、U6、EF1a和Puromycin。
所述重组载体是在P1质粒的Bbsl识别位点处插入所述sgRNA的编码基因，并保持所述PI质粒的其他核苷酸不变的重组载体。
5.根据权利要求1-4任...
【专利技术属性】
技术研发人员：鞠辉明，许金蔓，杨跃飞，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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