CvBV7-1基因在降低果蝇体液免疫反应中的应用制造技术

本发明专利技术公开了CvBV7‑1基因在降低果蝇体液免疫反应中的应用，该CvBV7‑1基因是菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒的35个基因组片段中的第7个环上的第1个基因，碱基序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术利用转基因技术，将菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒基因CvBV7‑1转入果蝇基因组，获得了稳定遗传、纯合体的转基因果蝇品系；利用UAS/GAL4系统，纯合体的CvBV7‑1转基因果蝇与BS8700果蝇品系进行杂交，得到的品系表达多分DNA病毒基因后，发现能够抑制果蝇血淋巴的黑化活力以及降低果蝇幼虫体内对寄生蜂幼虫的包囊作用，在受到病原物侵染时，具有明显的免疫力低的性状，在对研究果蝇免疫相关机制、增强人类免疫类药剂的筛选等方面有重要意义。

Application of cvbv7-1 gene in reducing humoral immune response of Drosophila

【技术实现步骤摘要】
CvBV7-1基因在降低果蝇体液免疫反应中的应用
本专利技术涉及分子生物学和基因工程
，尤其涉及CvBV7-1基因在降低果蝇体液免疫反应中的应用。
技术介绍
昆虫属于无脊椎动物中的节肢动物，是地球上数量最多的动物群体。目前，已知的昆虫有100余万种，它们形态各异，数量巨大，与农业生产和人类健康息息相关。对昆虫的研究，不仅能丰富人类对自然界的认识，还有助于解决实际生产和人类疾病防控中所面临的重大问题。尤其是对昆虫免疫的基础研究和应用研究一直都是热点，通过实验来研究与昆虫免疫相关的机制、信号等问题，对害虫防治、益虫防病、药物开发、研究人类免疫机制等有着非常重要的现实意义。昆虫在长期进化过程中形成一套独特的天然免疫系统，包括细胞免疫(cellularimmunity)和体液免疫(humoralimmunity)，两者既有区别、又相互联系(Lavine,M.D.andM.R.Strand(2002)."Insecthemocytesandtheirroleinimmunity."InsectBiochemistryandMolecularBiology32(10):1295-1309；Tsakas,S.andV.J.Marmaras(2010)."Insectimmunityanditssignalling:Anoverview."InvertebrateSurvivalJournal7(2):228-238；Grizanova,E.V.,I.M.Dubovskiy,M.M.A.WhittenandV.V.Glupov(2014)."ContributionsofcellularandhumoralimmunityofGalleriamellonellalarvaeindefenceagainstoralinfectionbyBacillusthuringiensis."JournalofInvertebratePathology119:40-46)。昆虫的细胞免疫是由昆虫血细胞介导完成的，主要包括吞噬、包囊和结节作用(Schmidt,O.,U.TheopoldandM.Strand(2001)."Innateimmunityanditsevasionandsuppressionbyhymenopteranendoparasitoids."BioEssays23(4):344-351；Wu,S.andE.J.Ling(2009)."Phagocytosis,nodulationandencapsulationincellularimmuneresponsesininsects."ActaEntomologicaSinica52(7):791-798)。昆虫的体液免疫和细胞免疫常常是伴随发生的。昆虫的体液免疫是从病原物的识别到抗菌肽(antimicrobialpeptides,AMP)和黑色素(melanin)的产生，最终通过产生的抗菌肽或黑化反应破坏外来的病原物或异物(Lowenberger,C.(2001)."InnateimmuneresponseofAedesaegypti."InsectBiochemistryandMolecularBiology31(3):219-229,Blandin,S.andE.A.Levashina(2004)."Thioester-containingproteinsandinsectimmunity."MolecularImmunology40(12):903-908,Imler,J.L.andP.Bulet(2005).AntimicrobialpeptidesinDrosophila:Structures,activitiesandgeneregulation.ChemicalImmunologyAllergy.D.KabelitzandJ.M.Schroder.86:1-21)。目前，对昆虫免疫的研究主要集中在昆虫抗药性的发生和天敌对昆虫的免疫抑制。昆虫抗药性是指在昆虫群体中发展起来的、能够耐受杀死正常种群大多数个体的药量的能力。长期以来，由于杀虫剂的选择作用，许多昆虫对杀虫剂产生了不同程度的抗药性。而自然界中的天敌生物，尤其是寄生蜂能有效控制害虫，通过抑制寄主昆虫的免疫系统，完成寄生。对天敌抑制寄主免疫的深入研究，不仅能开发昆虫防治的有效措施和途径，优化害虫生物防治，大幅度减少化学农药的使用，对于确保我国可持续农业稳健发展有着深远的现实意义。多分DNA病毒(polydnavirus，PDV)分为茧蜂病毒(bracovirus，BV)和姬蜂(Ichnovirus，IV)病毒(Turnbull,M.andB.Webb(2002).Perspectivesonpolydnavirusoriginsandevolution.AdvancesinVirusResearch,AcademicPress.58:203-254)。PDV是寄生蜂专性共生的特殊病毒，在寄生蜂产卵时被注射到鳞翅目寄主幼虫体内，是帮助寄生蜂成功寄生的重要寄生因子(Bai,S.,X.Chen,J.Cheng,W.FuandJ.He(2005)."Effectsofwasp-associatedfactorsofCotesiaplutellaeongrowthanddevelopmentofPlutellaxylostellalarvae."ActaPhytophylacicaSinica32(3):235-240)。其主要生理功能是抑制寄主的免疫(Dupuy,C.,E.HuguetandJ.M.Drezen(2006)."Unfoldingtheevolutionarystoryofpolydnaviruses."VirusResearch117(1):81-89；Strand,M.R.andG.R.Burke(2012)."Polydnavirusesassymbiontsandgenedeliverysystems."PLoSPathogens8(7))。菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒(CvBV)是国内研究较多的一种多分DNA病毒，共有35个环状DNA组成，编码157个毒性基因(Chen,Y.F.,F.Gao,X.Q.Ye,S.J.Wei,M.Shi,H.J.ZhengandX.X.Chen(2011)."DeepsequencingofCotesiavestalisbracovirusrevealsthecomplexityofapolydnavirusgenome."Virology414(1):42-50.)。CvBV进入寄主小菜蛾后，CvBV基因迅速表达毒性蛋白抑制小菜蛾的免疫反应。因此，有必要对CvBV基因做更进一步地深入研究。
技术实现思路
本专利技术发现了CvBV7-1基因在降低果蝇体液免疫反应和制备免疫低下型果蝇中的新用途。具体技术方案如下：CvBV7-1基因是菜蛾盘绒茧蜂多分DNA病毒的35个基因组片段中的第7个环上的第1个基因，碱基序列如SEQIDNO.1所示；其能够编码2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CvBV7-1基因在降低果蝇体液免疫反应中的应用，其特征在于，所述CvBV7-1基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.CvBV7-1基因在降低果蝇体液免疫反应中的应用，其特征在于，所述CvBV7-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。


2.CvBV7-1基因在抑制果蝇血淋巴黑化活力中的应用，其特征在于，所述CvBV7-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。


3.CvBV7-1基因在降低果蝇幼虫对寄生蜂幼虫的包囊作用中的应用，其特征在于，所述CvBV7-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。


4.CvBV7-1基因在制备免疫低下型果蝇模型中的应用，其特征在于，所述CvBV7-1基因的碱基序列如SEQIDNO.1所示。


5.一种免疫低下型果蝇模型的制备方法，其特征在于，包括：
(1)制备包含有CvBV7-1基因的重组质粒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈学新，王泽华，黄健华，时敏，叶熹骞，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33