【技术实现步骤摘要】
一种维持小鼠胚胎干细胞自我更新的培养方法
本专利技术属于胚胎干细胞培养
，尤其涉及一种维持小鼠胚胎干细胞自我更新的培养方法。
技术介绍
胚胎干细胞(embryonicstemcell,ESC)是一类具有自我更新能力的多潜能性细胞,在体外特定培养条件下能维持不分化状态并具有增殖能力，从囊胚期的内细胞团(ICM)可以分离得到ESC。自1981年Evans和Kaufman首次成功分离小鼠胚胎干细胞并在体外进行培养，这些细胞具有自我更新以及多向分化的潜能。目前研究得最为广泛的干细胞也是小鼠胚胎干细胞（MouseEmbryonicStemCells，mESCs），这也是第一株在体外成功建立的干细胞系。目前体外培养小鼠胚胎干细胞的方法有两种：血清（Serum）培养基加白血病抑制因子（LeukemiaInhibitoryFactor，LIF）；无血清的N2B27加两个小分子抑制剂(2i)，即CHIR99021和PD0325901。这两种培养基通过不同的信号通路维持胚胎干细胞的自我更新。在mESCs中，LIF主要激活JAK/STAT3...
【技术保护点】
1.一种维持小鼠胚胎干细胞自我更新的培养方法，其特征在于，在含10% FBS的DMEM培养基基础上，通过加入少量白血病抑制因子和MK2-IN-1两种小分子化合物来维持小鼠胚胎干细胞的自我更新状态。/n
【技术特征摘要】
1.一种维持小鼠胚胎干细胞自我更新的培养方法，其特征在于，在含10%FBS的DMEM培养基基础上，通过加入少量白血病抑制因子和MK2-IN-1两种小分子化合物来维持小鼠胚胎干细胞的自我更新状态。
2.根据权利要求1所述的维持小鼠胚胎干细胞自我更新的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下具体步骤：
（1）取1毫升0.1%的明胶于孔板中，放置于5%的CO2、37℃的培养箱中培养30min；
（2）取生长至70-80%密度的小鼠胚胎干细胞，弃培养液，用PBS洗涤细胞1次，除去残留的培养液；
（3）吸净磷酸盐缓冲液PBS，并加入1毫升胰蛋白酶消化2-3min，待细胞边缘开始出现浮起，用枪头轻轻吹打细胞，使细胞呈一个个的单细胞状态，准备一个新的15毫升离心管，加入2毫升的血清培养液，将吹打下来的细胞悬液加入其中；
（4）以10...
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