一种特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体及其应用。本发明专利技术的原肌球蛋白的核酸适配体具有如SEQ ID NO:1所示的核酸序列。本发明专利技术所述的原肌球蛋白核酸适配体对原肌球蛋白具有高特异性和良好的亲和力。本发明专利技术的核酸适配体能与修饰有核酸适配体互补序列的多巴胺纳米球结合，从而制成对原肌球蛋白响应灵敏的荧光生物传感器以及用于检测原肌球蛋白的试剂盒。本发明专利技术所述的核酸适配体具有高特异性、高灵敏度、分子量小、成本低廉、易于保存等优点，其制成的检测试剂盒，可用于定量检测原肌球蛋白，与传统检测方法相比更加准确、灵敏、稳定，大大提高了检测效率，同时也节约了成本。

【技术实现步骤摘要】
一种特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体及其应用
本专利技术涉及食品安全生物
，具体涉及一种特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体及其应用。
技术介绍
水产品营养丰富，口味鲜美，深受人们的喜爱，是全球食物消费的重要组成部分，中国已多年居水产养殖和消费总量第一大国的地位，并且，其水产养殖及消费总量呈持续增长的趋势。然而，甲壳类食品作为八大食物过敏原之一，经常会引起人类严重的食物过敏反应，对人们的生命健康造成了巨大威胁。因此，加强甲壳类食物过敏原的研究力度，并对其进行有效的检测，对该类食物过敏的预防和诊断具有重要意义。原肌球蛋白(Tropomyosin，TM)广泛存在于甲壳类动物中，是甲壳类食品主要过敏原。其具有高热稳定性，序列保守性高，且种间能够发生明显交叉反应。其过敏患者可能会出现红肿、鼻炎、哮喘等过敏性症状，严重时还会伴有虚脱、休克，甚至危及生命，严重影响身体健康和生活质量。目前，甲壳类原肌球蛋白的检测方法主要有ELISA、PCR、RT-PCR等技术，这些技术存在检测时间长、灵敏度和精确度不高(易出现假阳性)等问题。因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体，其特征在于，其具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体，其特征在于，其具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。


2.如权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的5’端经荧光基团修饰。


3.权利要求1所述的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，包括：
构建甲壳类原肌球蛋白随机DNA文库，对文库进行预处理，处理条件为：95℃热变性5min，冰温冷却5min，用100mmol/LpH为8.2的硼砂-硼酸盐溶液溶解，得到随机ssDNA文库；
将ssDNA文库与原肌球蛋白按最终浓度比2:1混合，混合成200μL体系，37℃下孵育30min，得到混合溶液；
所述混合溶液通过毛细管电泳法筛选，获得核苷酸序列为SEQIDNO:2所示的适配体，所述适配体以SEQIDNO:3～4所示的核苷酸序列为引物进行PCR扩增，并进行平衡解离常数的测定，选择解离常数最小的，即获得特异性结合甲壳类原肌球蛋白的核酸适配体。


4.如权利要求3所述的筛选方...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅玲琳，王彦波，周瑾茹，李林芳，
申请(专利权)人：浙江工商大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33