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特异性识别甲硝唑的ssDNA适配体及其应用制造技术

技术编号:23095597 阅读:61 留言:0更新日期:2020-01-14 19:52
特异性识别甲硝唑的ssDNA适配体及其应用,属于生物化学与分子生物学、分析化学和组合化学领域。本发明专利技术通过磁珠‑SELEX技术,将包含35个随机核苷酸的ssDNA初始文库进行PCR扩增后固定在链霉亲和素修饰的磁珠上,加入甲硝唑将与之有亲和力的ssDNA竞争下来,扩增后再投入下一轮筛选。经过十轮筛选及克隆测序获得39条甲硝唑适配体序列,进一步亲和力评估后挑选出ap2、ap19、ap21、ap32四条亲和力较高的序列,其中ap32具有亲和力高、特异性高、结构稳定等优点被选作最优甲硝唑适配体。本发明专利技术为甲硝唑检测提供了性能优良的识别元件。

SsDNA aptamer for specific recognition of metronidazole and its application

【技术实现步骤摘要】
特异性识别甲硝唑的ssDNA适配体及其应用
本专利技术涉及一种特异性识别甲硝唑的ssDNA适配体及其应用,属于生物化学与分子生物学、分析化学和组合化学领域。
技术介绍
甲硝唑属于硝基咪唑类抗生素,是人工合成的具有5-硝基咪唑基本结构的抗菌抗原虫药物,该药物也能作为禽类、畜类以及水产养殖的饲料药物添加剂,并且被广泛用于预防和控制蜂箱中的蜜蜂微孢子虫。但研究表明,甲硝唑存在致畸、致癌、致突变的潜在风险和遗传毒性,不合理使用甲硝唑可能导致可食性动物组织中的药物残留,甚至污染水源。1999年,我国农业部发布17号文《动物性食品中兽药最高残留限量》规定甲硝唑在所有食品动物可食性组织的最高残留限量为零。2002年3月,国家开始对此类化合物进行严格控制,农牧发[2002]1号文件《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》规定了在食源性动物中禁用甲硝唑和二甲硝咪唑,在中华人民共和国农业行业标准NY5030-2006无公害食品畜禽饲养兽药使用准则和NY/T472-2006绿色食品兽药使用准则中规定,禁止以促生长为目的在所有食品动物中使用甲硝唑、二甲硝唑及其盐、酯和制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异性识别甲硝唑的ssDNA适配体,其特征在于:其在结构上均符合下述通式所示的结构特征:5′-TAGGGAATTC GTCGACGGAT CC-N35-CTGCAGGTCG ACGCATGCGC CG-3′;/n其中N代表碱基A,T,C,G中的任意一个,N35代表随机片段长度为35个核苷酸。/n

【技术特征摘要】
1.特异性识别甲硝唑的ssDNA适配体,其特征在于:其在结构上均符合下述通式所示的结构特征:5′-TAGGGAATTCGTCGACGGATCC-N35-CTGCAGGTCGACGCATGCGCCG-3′;
其中N代表碱基A,T,C,G中的任意一个,N35代表随机片段长度为35个核苷酸。


2.根据权利要求1所述特异性识别甲硝唑的ssDNA适配体,其特征在于:其能够被提高稳定性的基团,提供检测信号的荧光基团、同位素、电化学标记物、酶标记物,以及用于形成组合物的亲和配基、巯基所修饰。


3.根据权利要求1所述特异性识别甲硝唑的ssDNA适配体,其特征在于:具体为ap1~ap7、ap9~ap37和ap39所示序列中的一种或多种,包括含有ap1~ap7、ap9~ap37和ap39所述序列的ssDNA。


4.根据权利要求3所述特异性识别甲硝唑的ssDNA适配体,其特征在于:具体为ap2、ap19、ap21或ap32所示的序列,包括含有ap2、ap19、ap21、ap32所述序列的ssDNA;具体如下:
ap2:5′-TAGGGAATTCGTCGACGGATCCGTGCAGAAATTGCCAAGAGTAGCGGAAGTTGCCAGCTGCAGGTCGACGCATGCGCCG-3′;
ap19:5′-TAGGGAATTCGTCGACGGATCCCTGCAGTTGTCGGTCCCAATGTGCACATGGTGTACCTGCAGGTCGACGCATGCGC...

【专利技术属性】
技术研发人员:周楠迪魏昊田亚平
申请(专利权)人:江南大学
类型:发明
国别省市:江苏;32

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