ALK4:ActRIIB异多聚体及其用途制造技术

在某些方面，本公开文本提供了可溶性异聚多肽复合物，其包含ALK4受体的细胞外结构域和ActRIIB的细胞外结构域。在某些方面，此类可溶性ALK4:ActRIIB复合物可以用于调节(促进或抑制)组织或细胞的生长，所述组织或细胞包括例如肌肉、骨、软骨、脂肪、神经组织、肿瘤和/或癌细胞。在某些方面，此类ALK4:ActRIIB复合物可以用于改善肌肉形成、骨形成、代谢参数和与这些组织、细胞网络、肾和内分泌系统相关的障碍。

Alk4: acriib heteropolymer and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】ALK4:ActRIIB异多聚体及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2016年10月5日提交的美国临时申请号62/404,727和2017年5月24日提交的美国临时申请号62/510,417的优先权权益。将前述申请的说明书通过引用以其整体并入本文。
技术介绍
转化生长因子-β(TGF-β)超家族含有多种生长因子，所述生长因子具有共同的序列元件和结构基序。已知这些蛋白质对脊椎动物和无脊椎动物中的各种各样的细胞类型发挥生物学作用。该超家族的成员在模式形成和组织特化中在胚胎发育过程中执行重要功能，并且可以影响多种分化过程，包括脂肪生成、肌生成、软骨形成、心脏发生、造血作用、神经发生和上皮细胞分化。该家族分为两个一般的系统发生进化枝：该超家族的最近进化的成员，其包括TGF-β、激活素和nodal；以及该超家族的更远相关蛋白质的进化枝，其包括许多BMP和GDF[Hinck(2012)FEBSLetters586:1860-1870]。TGF-β家族成员具有多种(通常是互补的)生物学作用。通过操纵TGF-β家族成员的活性，通常可以在生物中引起显著的生理变化。例如，皮埃蒙特牛和比利时蓝牛品种在GDF8(也称为肌生成抑制蛋白)基因中携带功能丧失突变，其导致肌肉量显著增加[Grobet等人(1997)NatGenet17(1):71-4]。此外，在人类中，GDF8的无活性等位基因与增加的肌肉量相关，并且据报道与异常强度相关[Schuelke等人(2004)NEnglJMed350:2682-8]。纤维化、肌肉、骨、脂肪和其他组织的变化可以通过增强或抑制由TGF-β家族的配体介导的细胞内信号传导(例如，SMAD1、2、3、5和/或8)来实现。因此，需要调节TGF-β超家族的多种配体的活性的药剂。
技术实现思路
如本文所述，已发现ALK4:ActRIIB异二聚体蛋白质是TGF-β超家族的配体的独特拮抗剂，其与相应的ActRIIB和ALK4同二聚体相比显示出不同的配体结合概况/选择性。具体地，示例性ALK4:ActRIIB异二聚体展示出与任一种同二聚体相比增强的与激活素B的结合，保留如对于ActRIIB同二聚体所观察到的与激活素A、GDF8和GDF11的强结合，并且显示出与BMP9、BMP10和GDF3的明显降低的结合。事实上，ALK4:ActRIIB异二聚体对BMP9展示出很低至观察不到的亲和力，而该配体与ActRIIB同二聚体强烈结合。参见图4。因此，这些结果证明与ActRIIB同二聚体相比，ALK4:ActRIIB异二聚体是TGF-β超家族的某些配体的更具选择性的拮抗剂(抑制剂)。因此，ALK4:ActRIIB异二聚体在这种选择性拮抗作用是有利的某些应用中比ActRIIB同二聚体更有用。例子包括治疗性应用，其中需要拮抗激活素(例如，激活素A、激活素B、激活素AB、激活素AC)、GDF8和GDF11中的一种或多种，同时降低BMP9、BMP10和GDF3中的一种或多种的拮抗作用。此外，ALK4:ActRIIB异二聚体产生了与ActRIIB同二聚体的生物学作用惊人地相似的某些生物学作用，尽管这两种复合物具有差异的配体选择性。例如，ALK4:ActRIIB异二聚体对骨骼肌和骨发挥有益的合成代谢作用并且对脂肪组织发挥分解代谢作用，这非常类似于ActRIIB-Fc同二聚体的作用。然而，与ActRIIB同二聚体不同，ActRIIB:ALK4异二聚体仅显示出与BMP9和BMP10的低亲和力或短暂结合，因此应该对由这些配体介导的过程(如血管生成)几乎没有并发抑制。这种新颖的选择性可用于例如治疗需要对肌肉和骨的刺激作用和/或对脂肪的抑制作用但不需要改变血管生成的患者。另外，ALK4:ActRIIB异二聚体在小鼠肾病模型中具有多种有益作用，特别是对治疗或预防肾损害、炎症和纤维化具有有益作用。因此，尽管不希望受特定作用机制的束缚，但是预期结合/抑制激活素(例如，激活素A、激活素B、激活素AB和激活素AC)、GDF8和/或GDF11中的至少一种或多种的ALK4:ActRIIB异多聚体及其变体将是用于促进对骨骼肌和骨的有益合成代谢作用、对脂肪组织的分解代谢作用和对肾病的有益作用的有用的药剂。因此，本公开文本部分地涉及包含至少一种ALK4多肽和至少一种ActRIIB多肽的异多聚体复合物(异多聚体)(ALK4:ActRIIB异多聚体)。优选地，ALK4多肽包含ALK4受体的配体结合结构域，例如ALK4细胞外结构域的一部分。类似地，ActRIIB多肽通常包含ActRIIB受体的配体结合结构域，例如ActRIIB细胞外结构域的一部分。优选地，此类ALK4和ActRIIB多肽以及其所得的异多聚体是可溶的。优选地，此类ALK4和ActRIIB多肽以及其所得的异多聚体是重组蛋白。优选地，此类ALK4和ActRIIB多肽以及其所得的异多聚体是分离的蛋白质。在某些方面，ALK4:ActRIIB异多聚体包含含有与如下多肽至少70％相同的氨基酸序列的ALK4结构域，所述多肽以SEQIDNO:9的氨基酸24-34(例如，氨基酸24、25、26、27、28、29、30、31、32、33和34)中的任何一个开始，并以SEQIDNO:9的氨基酸101-126(例如，氨基酸101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125和126)中的任何一个结束。例如，ALK4:ActRIIB异多聚体可以包含与SEQIDNO:9的氨基酸34-101至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ALK4:ActRIIB异多聚体可以包含与SEQIDNO:9的氨基酸24-126至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，ALK4:ActRIIB异多聚体可以包含与SEQIDNO:10至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同的ALK4氨基酸序列。在其他方面，ALK4:ActRIIB异多聚体包含含有与如下多肽至少70％相同的氨基酸序列的ALK4结构域，所述多肽以SEQIDNO:19的氨基酸24-34(例如，氨基酸24、25、26、27、28、29、30、31、32、33和34)中的任何一个开始，并以SEQIDNO:19的氨基酸101-126(例如，氨基酸101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125和12本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中该ALK4-Fc融合蛋白包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的等电点(pI)的一个或多个氨基酸修饰和/或其中该ActRIIB-Fc融合蛋白包含改变该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20161005 US 62/404,727;20170524 US 62/510,4171.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中该ALK4-Fc融合蛋白包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的等电点(pI)的一个或多个氨基酸修饰和/或其中该ActRIIB-Fc融合蛋白包含改变该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


2.权利要求1的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白中的该一个或多个氨基酸修饰赋予该ALK4-Fc融合蛋白与该ActRIIB-Fc融合蛋白之间pI的增加的差异；
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白中的该一个或多个氨基酸修饰赋予该ActRIIB-Fc融合蛋白与该ALK4-Fc融合蛋白之间pI的增加的差异；或
c)该ALK4-Fc融合蛋白中的该一个或多个氨基酸修饰赋予该ALK4-Fc融合蛋白与该ActRIIB-Fc融合蛋白之间pI的增加的差异，并且该ActRIIB-Fc融合蛋白中的该一个或多个氨基酸修饰赋予该ActRIIB-Fc融合蛋白与该ALK4-Fc融合蛋白之间pI的增加的差异。


3.权利要求2的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白包含提高该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含降低该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


4.权利要求1-3中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG1Fc结构域，并且其中该IgG1Fc结构域包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


5.权利要求4的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含与SEQIDNO:31的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


6.权利要求5的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的氨基酸取代。


7.权利要求6的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N162R、N162K或N162H)；
b)在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D179R、D179K或D179H)；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N162R、N162K或N162H)和在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D179R、D179K或D179H)。


8.权利要求7的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的精氨酸取代(N162R)；
b)在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的精氨酸取代(D179R)；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的精氨酸取代(N162R)和在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的精氨酸取代(D179R)。


9.权利要求1-3中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG2Fc结构域，并且其中该IgG2Fc结构域包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


10.权利要求9中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含与SEQIDNO:32的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


11.权利要求10的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:32的N160的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:32的D177的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:32的N160的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:32的D177的位置处的氨基酸取代。


12.权利要求11的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:32的N160的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N160R、N160K或N160H)；
b)在对应于SEQIDNO:32的D177的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D177R、D177K或D177H)；以及
c)在对应于SEQIDNO:32的N160的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N160R、N160K或N160H)和在对应于SEQIDNO:32的D177的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D177R、D177K或D177H)。


13.权利要求1-3中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG3Fc结构域，并且其中该IgG3Fc结构域包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


14.权利要求13的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含与SEQIDNO:33的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


15.权利要求14的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:33的S169的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:33的D186的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:33的S169的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:33的D186的位置处的氨基酸取代。


16.权利要求15的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:33的S169的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(S169R、S169K或S169H)；
b)在对应于SEQIDNO:33的D186的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D186R、D186K或D186H)；以及
c)在对应于SEQIDNO:33的S169的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(S169R、S169K或S169H)和在对应于SEQIDNO:33的D186的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D186R、D186K或D186H)。


17.权利要求1-3中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG4Fc结构域，并且其中该IgG4Fc结构域包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


18.权利要求17的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含与SEQIDNO:35的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


19.权利要求18的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:35的N166的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:35的D183的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:35的N166的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:35的D183的位置处的氨基酸取代。


20.权利要求19的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:35的N166的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N166R、N166K或N166H)；
b)在对应于SEQIDNO:35的D183的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D183R、D183K或D183H)；以及
c)在对应于SEQIDNO:35的N166的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N166R、N166K或N166H)和在对应于SEQIDNO:32的D183的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D183R、D183K或D183H)。


21.权利要求3的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白包含用一个或多个带正电的氨基酸[例如，精氨酸(R)、赖氨酸(K)或组氨酸(H)]取代一个或多个中性或带负电的氨基酸；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含用一个或多个带负电的氨基酸[例如，天冬氨酸(E)或谷氨酸(D)]取代一个或多个中性或带正电的氨基酸。


22.权利要求1-21中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG1Fc结构域，并且其中该IgG1Fc结构域包含改变该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


23.权利要求22的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含与SEQIDNO:31的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


24.权利要求23的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的氨基酸取代。


25.权利要求24的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K138E或K138D)；
b)在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K217E或K217D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K138E或K138D)和在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K217E或K217D)。


26.权利要求25的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的谷氨酸取代(K138E)；
b)在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的天冬氨酸取代(K217D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的谷氨酸取代(K138E)和在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的天冬氨酸取代(K217D)。


27.权利要求1-21中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG2Fc结构域，并且其中该IgG2Fc结构域包含改变该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


28.权利要求27的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含与SEQIDNO:32的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


29.权利要求28的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2融合Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:32的K136的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:32的K215的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:32的K136的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:32的K215的位置处的氨基酸取代。


30.权利要求29的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:32的K136的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K136E或K136D)；
b)在对应于SEQIDNO:32的K215的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K215E或K215D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:32的K136的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K136E或K136D)和在对应于SEQIDNO:32的K215的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K215E或K215D)。


31.权利要求1-21中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG3Fc结构域，并且其中该IgG3Fc结构域包含改变该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


32.权利要求31的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含与SEQIDNO:33的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


33.权利要求32的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3融合Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:33的K145的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:33的K224的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:33的K145的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:33的K224的位置处的氨基酸取代。


34.权利要求33的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该修饰的ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:33的K145的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K145E或K145D)；
b)在对应于SEQIDNO:33的K224的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K224E或K224D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:33的K145的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K145E或K145D)和在对应于SEQIDNO:33的K224的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K224E或K224D)。


35.权利要求1-21中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG4Fc结构域，并且其中该IgG4Fc结构域包含改变该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


36.权利要求35的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含与SEQIDNO:35的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


37.权利要求36的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4融合Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代
选自：
a)在对应于SEQIDNO:35的K142的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:35的K221的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:35的K142的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:35的K221的位置处的氨基酸取代。


38.权利要求37的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:35的K142的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K142E或K142D)；
b)在对应于SEQIDNO:35的K221的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K221E或K221D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:35的K142的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K142E或K142D)和在对应于SEQIDNO:35的K221的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K221E或K221D)。


39.权利要求2的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含提高该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白包含降低该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


40.权利要求39的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含用一个或多个带正电的氨基酸[例如，精氨酸(R)、赖氨酸(K)或组氨酸(H)]取代一个或多个中性或带负电的氨基酸；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白包含用一个或多个带负电的氨基酸[例如，天冬氨酸(E)或谷氨酸(D)]取代一个或多个中性或带正电的氨基酸。


41.权利要求39或40的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG1Fc结构域，并且其中该IgG1Fc结构域包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


42.权利要求41的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含与SEQIDNO:31的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


43.权利要求42的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的氨基酸取代。


44.权利要求43的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N162R、N162K或N162H)；
b)在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D179R、D179K或D179H)；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N162R、N162K或N162H)和在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D179R、D179K或D179H)。


45.权利要求44的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的精氨酸取代(N162R)；
b)在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的精氨酸取代(D179R)；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的N162的位置处的精氨酸取代(N162R)和在对应于SEQIDNO:31的D179的位置处的精氨酸取代(D179R)。


46.权利要求39或40的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG2Fc结构域，并且其中该IgG2Fc结构域包含改变该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


47.权利要求46的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含与SEQIDNO:32的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


48.权利要求47的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:32的N160的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:32的D177的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:32的N160的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:32的D177的位置处的氨基酸取代。


49.权利要求48的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:32的N160的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N160R、N160K或N160H)；
b)在对应于SEQIDNO:32的D177的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D177R、D177K或D177H)；以及
c)在对应于SEQIDNO:32的N160的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N160R、N160K或N160H)和在对应于SEQIDNO:32的D177的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D177R、D177K或D177H)。


50.权利要求39或40的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG3Fc结构域，并且其中该IgG3Fc结构域包含改变该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


51.权利要求50的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含与SEQIDNO:33的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


52.权利要求51的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:33的S169的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:33的D186的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:33的S169的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:33的D186的位置处的氨基酸取代。


53.权利要求52的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该修饰的ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:33的S169的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(S169R、S169K或S169H)；
b)在对应于SEQIDNO:33的D186的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D186R、D186K或D186H)；以及
c)在对应于SEQIDNO:33的S169的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(S169R、S169K或S169H)和在对应于SEQIDNO:33的D186的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D186R、D186K或D186H)。


54.权利要求39或40的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG4Fc结构域，并且其中该IgG4Fc结构域包含改变该ActRIIB-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


55.权利要求54的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含与SEQIDNO:35的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


56.权利要求55的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:35的N166的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:35的D183的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:35的N166的位置处的氨基酸取代和在SEQIDNO:35的位置D183处的氨基酸取代。


57.权利要求56的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:35的N166的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N166R、N166K或N166H)；
b)在对应于SEQIDNO:35的D183的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D183R、D183K或D183H)；以及
c)在对应于SEQIDNO:35的N166的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(N166R、N166K或N166H)和在对应于SEQIDNO:35的D183的位置处的精氨酸、赖氨酸或组氨酸取代(D183R、D183K或D183H)。


58.权利要求2的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白中的该一个或多个氨基酸修饰降低该ALK4-Fc融合蛋白的pI。


59.权利要求2或39-40的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG1Fc结构域，并且其中该IgG1Fc结构域包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


60.权利要求59的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含与SEQIDNO:31的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


61.权利要求59或60的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG1融合Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的氨基酸取代。


62.权利要求61的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K138E或K138D)；
b)在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K217E或K217D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K138E或K138D)和在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K217E或K217D)。


63.权利要求62的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的谷氨酸取代(K138E)；
b)在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的天冬氨酸取代(K217D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:31的K138的位置处的谷氨酸取代(K138E)和在对应于SEQIDNO:31的K217的位置处的天冬氨酸取代(K217D)。


64.权利要求2或39-40的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG2Fc结构域，并且其中该IgG2Fc结构域包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


65.权利要求64的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含与SEQIDNO:32的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


66.权利要求64或65的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG2融合Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:32的K136的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:32的K215的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:32的K136的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:32的K215的位置处的氨基酸取代。


67.权利要求66的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:32的K136的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K136E或K136D)；
b)在对应于SEQIDNO:32的K215的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K215E或K215D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:32的K136的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K136E或K136D)和在对应于SEQIDNO:32的K215的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K215E或K215D)。


68.权利要求2或39-40的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG3Fc结构域，并且其中该IgG3Fc结构域包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


69.权利要求68的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG31Fc结构域包含与SEQIDNO:33的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


70.权利要求68或69的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG3融合Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:33的K145的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:33的K224的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:33的K145的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:33的K224的位置处的氨基酸取代。


71.权利要求70的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:33的K145的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K145E或K145D)；
b)在对应于SEQIDNO:33的K224的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K224E或K224D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:33的K145的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K145E或K145D)和在对应于SEQIDNO:33的K224的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K224E或K224D)。


72.权利要求2或39-40的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白Fc结构域是IgG4Fc结构域，并且其中该IgG4结构域包含改变该ALK4-Fc融合蛋白的pI的一个或多个氨基酸修饰。


73.权利要求72的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含与SEQIDNO:35的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同的氨基酸序列。


74.权利要求72或73的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG4融合Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:35的K142的位置处的氨基酸取代；
b)在对应于SEQIDNO:35的K221的位置处的氨基酸取代；以及
c)在对应于SEQIDNO:35的K142的位置处的氨基酸取代和在对应于SEQIDNO:35的K221的位置处的氨基酸取代。


75.权利要求74的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该ALK4-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:35的K142的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K142E或K142D)；
b)在对应于SEQIDNO:35的K221的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K221E或K221D)；以及
c)在对应于SEQIDNO:35的K142的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K142E或K142D)和在对应于SEQIDNO:35的K221的位置处的天冬氨酸或谷氨酸取代(K221E或K221D)。


76.权利要求4-8和22-26中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含SEQIDNO:31的位置S132处的半胱氨酸取代(S132C)和SEQIDNO:31的位置T144处的色氨酸取代(T144W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含SEQIDNO:31的位置Y127处的半胱氨酸取代(Y127C)、SEQIDNO:31的位置T144处的丝氨酸取代(T144S)、SEQIDNO:31的位置L146处的丙氨酸取代(L146A)和SEQIDNO:31的位置Y185处的缬氨酸取代(Y185V)。


77.权利要求4-8和22-26中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含SEQIDNO:31的位置S132处的半胱氨酸取代(S132C)和SEQIDNO:31的位置T144处的色氨酸取代(T144W)；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含SEQIDNO:31的位置Y127处的半胱氨酸取代(Y127C)、SEQIDNO:31的位置T144处的丝氨酸取代(T144S)、SEQIDNO:31的位置L146处的丙氨酸取代(L146A)和SEQIDNO:31的位置Y185处的缬氨酸取代(Y185V)。


78.权利要求41-45和59-63中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含SEQIDNO:31的位置S132处的半胱氨酸取代(S132C)和SEQIDNO:31的位置T144处的色氨酸取代(T144W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含SEQIDNO:31的位置Y127处的半胱氨酸取代(Y127C)、SEQIDNO:31的位置T144处的丝氨酸取代(T144S)、SEQIDNO:31的位置L146处的丙氨酸取代(L146A)和SEQIDNO:31的位置Y185处的缬氨酸取代(Y185V)。


79.权利要求41-45和59-63中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该修饰的ActRIIB-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含SEQIDNO:31的位置S132处的半胱氨酸取代(S132C)和SEQIDNO:31的位置T144处的色氨酸取代(T144W)；并且
b)该修饰的ALK4-Fc融合蛋白IgG1Fc结构域包含SEQIDNO:31的位置Y127处的半胱氨酸取代(Y127C)、SEQIDNO:31的位置T144处的丝氨酸取代(T144S)、SEQIDNO:31的位置L146处的丙氨酸取代(L146A)和SEQIDNO:31的位置Y185处的缬氨酸取代(Y185V)。


80.权利要求9-12和27-30中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含SEQIDNO:32的位置S130处的半胱氨酸取代(S130C)和SEQIDNO:32的位置T142处的色氨酸取代(T142W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含SEQIDNO:32的位置Y125处的半胱氨酸取代(Y125C)、SEQIDNO:32的位置T142处的丝氨酸取代(T142S)、SEQIDNO:32的位置L144处的丙氨酸取代(L144A)和SEQIDNO:32的位置Y183处的缬氨酸取代(Y183V)。


81.权利要求9-12和27-30中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含SEQIDNO:32的位置S130处的半胱氨酸取代(S130C)和SEQIDNO:32的位置T142处的色氨酸取代(T142W)；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含SEQIDNO:32的位置Y125处的半胱氨酸取代(Y125C)、SEQIDNO:32的位置T142处的丝氨酸取代(T142S)、SEQIDNO:32的位置L144处的丙氨酸取代(L144A)和SEQIDNO:32的位置Y183处的缬氨酸取代(Y183V)。


82.权利要求46-49和64-67中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含SEQIDNO:32的位置S130处的半胱氨酸取代(S130C)和SEQIDNO:32的位置T142处的色氨酸取代(T142W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含SEQIDNO:32的位置Y125处的半胱氨酸取代(Y125C)、SEQIDNO:32的位置T142处的丝氨酸取代(T142S)、SEQIDNO:32的位置L144处的丙氨酸取代(L144A)和SEQIDNO:32的位置Y183处的缬氨酸取代(Y183V)。


83.权利要求46-49和64-67中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该修饰的ActRIIB-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含SEQIDNO:32的位置S130处的半胱氨酸取代(S130C)和SEQIDNO:32的位置T142处的色氨酸取代(T142W)；并且
b)该修饰的ALK4-Fc融合蛋白IgG2Fc结构域包含SEQIDNO:32的位置Y125处的半胱氨酸取代(Y125C)、SEQIDNO:32的位置T142处的丝氨酸取代(T142S)、SEQIDNO:32的位置L144处的丙氨酸取代(L144A)和SEQIDNO:32的位置Y183处的缬氨酸取代(Y183V)。


84.权利要求13-16和31-34中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含SEQIDNO:33的位置S139处的半胱氨酸取代(S139C)和SEQIDNO:33的位置T151处的色氨酸取代(T151W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含SEQIDNO:33的位置Y134处的半胱氨酸取代(Y134C)、SEQIDNO:33的位置T151处的丝氨酸取代(T151S)、SEQIDNO:33的位置L153处的丙氨酸取代(L153A)和SEQIDNO:33的位置Y192处的缬氨酸取代(Y192V)。


85.权利要求13-16和31-34中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含SEQIDNO:33的位置S139处的半胱氨酸取代(S139C)和SEQIDNO:33的位置T151处的色氨酸取代(T151W)；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含SEQIDNO:33的位置Y134处的半胱氨酸取代(Y134C)、SEQIDNO:33的位置T151处的丝氨酸取代(T151S)、SEQIDNO:33的位置L153处的丙氨酸取代(L153A)和SEQIDNO:33的位置Y192处的缬氨酸取代(Y192V)。


86.权利要求50-53和68-71中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含SEQIDNO:33的位置S139处的半胱氨酸取代(S139C)和SEQIDNO:33的位置T151处的色氨酸取代(T151W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含SEQIDNO:33的位置Y134处的半胱氨酸取代(Y134C)、SEQIDNO:33的位置T151处的丝氨酸取代(T151S)、SEQIDNO:33的位置L153处的丙氨酸取代(L153A)和SEQIDNO:33的位置Y192处的缬氨酸取代(Y192V)。


87.权利要求50-53和68-71中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含SEQIDNO:33的位置S139处的半胱氨酸取代(S139C)和SEQIDNO:33的位置T151处的色氨酸取代(T151W)；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白IgG3Fc结构域包含SEQIDNO:33的位置Y134处的半胱氨酸取代(Y134C)、SEQIDNO:33的位置T151处的丝氨酸取代(T151S)、SEQIDNO:33的位置L153处的丙氨酸取代(L153A)和SEQIDNO:33的位置Y192处的缬氨酸取代(Y192V)。


88.权利要求17-20和35-38中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含SEQIDNO:35的位置S136处的半胱氨酸取代(S136C)和SEQIDNO:35的位置T148处的色氨酸取代(T148W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含SEQIDNO:35的位置Y131处的半胱氨酸取代(Y131C)、SEQIDNO:35的位置T148处的丝氨酸取代(T148S)、SEQIDNO:35的位置L150处的丙氨酸取代(L150A)和SEQIDNO:35的位置Y189处的缬氨酸取代(Y189V)。


89.权利要求17-20和35-38中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含SEQIDNO:35的位置S136处的半胱氨酸取代(S136C)和SEQIDNO:35的位置T148处的色氨酸取代(T148W)；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含SEQIDNO:35的位置Y131处的半胱氨酸取代(Y131C)、SEQIDNO:35的位置T148处的丝氨酸取代(T148S)、SEQIDNO:35的位置L150处的丙氨酸取代(L150A)和SEQIDNO:35的位置Y189处的缬氨酸取代(Y189V)。


90.权利要求54-58和72-75中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含SEQIDNO:35的位置S136处的半胱氨酸取代(S136C)和SEQIDNO:35的位置T148处的色氨酸取代(T148W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含SEQIDNO:35的位置Y131处的半胱氨酸取代(Y131C)、SEQIDNO:35的位置T148处的丝氨酸取代(T148S)、SEQIDNO:35的位置L150处的丙氨酸取代(L150A)和SEQIDNO:35的位置Y189处的缬氨酸取代(Y189V)。


91.权利要求54-58和72-75中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含SEQIDNO:35的位置S136处的半胱氨酸取代(S136C)和SEQIDNO:35的位置T148处的色氨酸取代(T148W)；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白IgG4Fc结构域包含SEQIDNO:35的位置Y131处的半胱氨酸取代(Y131C)、SEQIDNO:35的位置T148处的丝氨酸取代(T148S)、SEQIDNO:35的位置L150处的丙氨酸取代(L150A)和SEQIDNO:35的位置Y189处的缬氨酸取代(Y189V)。


92.权利要求22或59的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该IgG1Fc结构域与SEQIDNO:66的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。


93.权利要求92的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:66的138的位置处的谷氨酸；
b)在对应于SEQIDNO:66的217的位置处的天冬氨酸；以及
c)在对应于SEQIDNO:66的138的位置处的谷氨酸和在对应于SEQIDNO:66的217的位置的天冬氨酸。


94.权利要求92或93的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该修饰的IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:66的132的位置处的半胱氨酸和在对应于SEQIDNO:66的144的位置处的色氨酸。


95.权利要求4或41的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该IgG1Fc结构域与SEQIDNO:67的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同。


96.权利要求95的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该IgG1Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，所述一个或多个氨基酸取代选自：
a)在对应于SEQIDNO:67的162的位置处的精氨酸；
b)在对应于SEQIDNO:67的179的位置处的精氨酸；以及
c)在对应于SEQIDNO:67的162的位置处的精氨酸和在对应于SEQIDNO:67的179的位置处的精氨酸。


97.权利要求95或96的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该修饰的IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:67的127的位置处的半胱氨酸、在对应于SEQIDNO:67的144的位置处的丝氨酸、在对应于SEQIDNO:67的146的位置处的丙氨酸和在对应于SEQIDNO:67的185的位置处的缬氨酸。


98.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白包含IgG1Fc结构域，所述IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:31的S132的位置处的半胱氨酸(S132C)、在对应于SEQIDNO:31的T144的位置处的色氨酸(T144W)和在对应于SEQIDNO:31的H213的位置处的酸性氨基酸；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含IgG1Fc结构域，所述IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:31的Y127的位置处的半胱氨酸(Y127C)、在对应于SEQIDNO:31的T144的位置处的丝氨酸(T144S)、在对应于SEQIDNO:31的L146的位置处的丙氨酸(L146A)和在对应于SEQIDNO:31的Y185的位置处的缬氨酸(Y185V)。


99.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含IgG1Fc结构域，所述IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:31的S132的位置处的半胱氨酸(S132C)、在对应于SEQIDNO:31的T144的位置处的色氨酸(T144W)和在对应于SEQIDNO:31的H213的位置处的酸性氨基酸；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白包含IgG1Fc结构域，所述IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:31的Y127的位置处的半胱氨酸(Y127C)、在对应于SEQIDNO:31的T144的位置处的丝氨酸(T144S)、在对应于SEQIDNO:31的L146的位置处的丙氨酸(L146A)和在对应于SEQIDNO:31的Y185的位置处的缬氨酸(Y185V)。


100.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白包含IgG1Fc结构域，所述IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:31的S132的位置处的半胱氨酸(S132C)和在对应于SEQIDNO:31的T144的位置处的色氨酸(T144W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含IgG1Fc结构域，所述IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:31的Y127的位置处的半胱氨酸(Y127C)、在对应于SEQIDNO:31的T144的位置处的丝氨酸(T144S)、在对应于SEQIDNO:31的L146的位置处的丙氨酸(L146A)、在对应于SEQIDNO:31的Y185的位置处的缬氨酸(Y185V)和在对应于SEQIDNO:31的H213的位置处的酸性氨基酸。


101.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含IgG1Fc结构域，所述IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:31的S132的位置处的半胱氨酸(S132C)和在对应于SEQIDNO:31的T144的位置处的色氨酸(T144W)；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白包含IgG1Fc结构域，所述IgG1Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:31的Y127的位置处的半胱氨酸(Y127C)、在对应于SEQIDNO:31的T144的位置处的丝氨酸(T144S)、在对应于SEQIDNO:31的L146的位置处的丙氨酸(L146A)和在对应于SEQIDNO:31的Y185的位置处的缬氨酸(Y185V)以及在对应于SEQIDNO:31的H213的位置处的酸性氨基酸。


102.权利要求98-101中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中在对应于SEQIDNO:31的H213的位置处的该酸性氨基酸是天冬氨酸。


103.权利要求98-101中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中在对应于SEQIDNO:31的H213的位置处的该酸性氨基酸是谷氨酸。


104.权利要求98-103中任一项的ALK4:ActRIIB异多聚体，其中该IgG1Fc结构域与SEQIDNO:31的氨基酸序列至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更相同。


105.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白包含IgG2Fc结构域，所述IgG2Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:32的S130的位置处的半胱氨酸(S130C)、在对应于SEQIDNO:32的T142的位置处的色氨酸(T142W)和在对应于SEQIDNO:32的H211的位置处的酸性氨基酸；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含IgG2Fc结构域，所述IgG2Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:32的Y125的位置处的半胱氨酸(Y125C)、在对应于SEQIDNO:32的T142的位置处的丝氨酸(T142S)、在对应于SEQIDNO:32的L144的位置处的丙氨酸(L144A)和在对应于SEQIDNO:32的Y183的位置处的缬氨酸(Y183V)。


106.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含IgG2Fc结构域，所述IgG2Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:32的S130的位置处的半胱氨酸(S130C)、在对应于SEQIDNO:32的T142的位置处的色氨酸(T142W)和在对应于SEQIDNO:32的H211的位置处的酸性氨基酸；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白包含IgG2Fc结构域，所述IgG2Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:32的Y125的位置处的半胱氨酸(Y125C)、在对应于SEQIDNO:32的T142的位置处的丝氨酸(T142S)、在对应于SEQIDNO:32的L144的位置处的丙氨酸(L144A)和在对应于SEQIDNO:32的Y183的位置处的缬氨酸(Y183V)。


107.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中：
a)该ALK4-Fc融合蛋白包含IgG2Fc结构域，所述IgG2Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:32的S130的位置处的半胱氨酸(S130C)和在对应于SEQIDNO:32的T142的位置处的色氨酸(T142W)；并且
b)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含IgG2Fc结构域，所述IgG2Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:32的Y125的位置处的半胱氨酸(Y125C)、在对应于SEQIDNO:32的T142的位置处的丝氨酸(T142S)、在对应于SEQIDNO:32的L144的位置处的丙氨酸(L144A)、在对应于SEQIDNO:32的Y183的位置处的缬氨酸(Y183V)和在对应于SEQIDNO:32的H211的位置处的酸性氨基酸。


108.一种重组ALK4:ActRIIB异多聚体，其包含至少一种ALK4-Fc融合蛋白和至少一种ActRIIB-Fc融合蛋白，其中：
a)该ActRIIB-Fc融合蛋白包含IgG2Fc结构域，所述IgG2Fc结构域包含在对应于SEQIDNO:32的S130的位置处的半胱氨酸(S130C)和在对应于SEQIDNO:32的T142的位置处的色氨酸(T142W)；并且
b)该ALK4-Fc融合蛋白包含IgG2Fc结构域，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·库马尔，A·格林贝格，D·S·赛科，R·卡斯顿圭，
申请(专利权)人：阿塞勒隆制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US