抗HEKR-K包膜抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及针对HERV‑K包膜的新型抗体及其在诊断和/或治疗中的用途，所述抗体靶向不受糖基化或天然构象影响的保守区。

Anti hekr-k envelope antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗HEKR-K包膜抗体及其用途
本专利技术涉及抗HERV-K包膜的新型抗体及其在诊断和/或治疗中的用途，所述抗体靶向不受糖基化或天然构象影响的保守区。
技术介绍
法国神经学家Jean-MartinCharcot首次描述了肌萎缩侧索硬化症(ALS)，其名称反映了其中下行轴突显示脊髓侧索结构改变的皮质脊髓运动神经元的退化(侧脑硬化)和脊髓运动神经元死亡，伴随与肌肉萎缩相关的继发性去神经支配(肌萎缩)(Taylor,Brown和Cleveland2016)。实际上，ALS是一种进行性且最终致命的神经退行性疾病，由大脑运动皮层、脑干和脊髓中涉及自主运动的计划、控制和执行的运动神经元退化引起。通常在诊断后3-5年发生致命结果(Taylor，Brown和Cleveland2016)。ALS的患病率在10万例中大约达到5例，这反映了该疾病的快速致死率(Taylor，Brown和Cleveland2016)。约10％的ALS病例似乎在家族中遗传传播(遗传性ALS)，与特定基因组突变相关。例如，约20％的家族性ALS与超氧化物歧化酶(sod1)基因的突变相关(Vucic和Kiernan2009；Rosen1993)。其他非家族性病例被归类为散发性ALS(ALS病例的90％)(Lagier-Tourenne和Cleveland2009)，这意味着它没有家族史。神经退行性疾病(如帕金森病、亨廷顿氏病、阿尔茨海默病、额颞叶变性(FTLD)和ALS)与中枢神经系统中神经元和神经胶质细胞内外错误折叠蛋白的积累有关(Polymenidou和Cleveland2011)。这些错误折叠蛋白的聚集体是每种疾病的病理标志，并且可以在起始事件后通过朊病毒样机制在细胞之间传播。一种广泛持有的观点认为，这些聚集体在疾病的发生和进展中起着至关重要的作用，其中内源性蛋白质的错误折叠版本可能潜在地通过以下途径获得毒性：增加聚集体内必需细胞成分的疏水性和/或隔离、产生氧化性物种、抑制蛋白酶体和通过其他途径。另一种观点认为，大聚集体并不代表有毒形式，而是防御性细胞反应的最终产物，所述产物旨在保护细胞免受大多数技术仍然无法检测到的毒性较大的寡聚物的影响(Polymenidou和Cleveland，2011)。来自ALS患者血清样品(人类免疫缺陷病毒(HIV)或人类T细胞白血病病毒(HTLV)外源病毒为血清阴性)的研究显示，50-60％ALS样品中的逆转录酶(RT)活性水平与HIV感染患者相当(MacGowan等2007；McCormick等2008；Andrews等2000；Steele等2005)。这与自从认识到鼠和人逆转录病毒都可以引起ALS样综合征起，几年来怀疑逆转录病毒参与的事实一致(McCormick等，2008)。可以通过抗逆转录病毒治疗缓解HIV阳性患者的ALS样疾病(Moulignier等，2001；vonGiesen等，2002)。这对于HIV感染患者的ALS症状有效，并且可能代表ALS病例的特殊亚类。在ALS患者的一级亲属的血清中也发现了增加的RT活性，这导致推测RT活性可能来自人内源性逆转录病毒(HERV)中的遗传活性拷贝，所述HERV占我们基因组的8％(Steele等，2005)。尽管如此，ALS中RT活性的检测并未确定该酶的来源，但已显示HERV-K参与死后脑(Douville等，2011)。测序研究显示，与对照相比，ALS患者中的7q34和7q36.1染色体基因座(分别对应于HERV-K的HML-2和HML-3亚家族)更常表达(Douville和Nam2014)。此外，最近观察到，与对照相比，ALS患者脑中的HERV-Kgag-pol和envRNA表达显著升高(Li等，2015)。HERV-K在人神经元培养物中的表达引起神经元细胞毒性，如转染整个HERV-K基因组或仅HERV-K-env基因后，观察到剂量依赖性方式的神经元数量减少和神经突收缩。这表明细胞内HERV-K-Env蛋白可能有助于神经毒性。这已经通过CRISP/casp9测定证实，所述测定通过VP64转录因子的LTR活化允许HERV-K表达增加两倍(Li等，2015)。HERV-K表达导致在皮质神经元中表达HERV-K-env基因的转基因小鼠体内运动皮质体积损失，其与免疫反应性无关，如用小胶质细胞的离子化钙结合适配子分子1(Iba-1)标记物所测量(Li等2015)。行为分析显示，HERV-K-env转基因小鼠在转杆实验(rotarodperformancetest)中走的距离较短，休息时间较长，并且掉得更快，显示后肢抓握增加的痉挛的证据。除了这些运动功能障碍外，转基因小鼠还发生了肢体和脊柱肌肉(包括用于呼吸的那些)的严重无力，导致10个月时的死亡率达到50％(Li等2015)。有趣的是，HERV-KRT表达与ALS患者神经元中TDP-43水平升高相关，表明RT表达与该疾病特征性的其他异常细胞过程一起发生(Buratti和Baralie2009；Geser等，2009；Douville等2011)。ALS中这种朊病毒样机制的证据现在涉及主要的错误折叠的蛋白质SOD1和TDP-43(Polymenidou和Cleveland2011)。最近，Li等人证明TDP-43可以激活人神经元中的HERV-K-env表达，这与他们观察到TDP-43可以结合HERV-K长末端重复序列(LTR)的区域726-CCCTCTCCC-734一致(Li等2015)。他们还表明，内源性TDP-43沉默降低了HERV-K的表达。这些结果最近通过表明以下得到补充：正常TDP-43在体外对人星形胶质细胞和神经元中的HERV-K转录没有影响，而TDP-43在HERV-K启动子的U5区域具有结合位点。后一种结合通过炎症增强，例如存在肿瘤坏死因子(TNFα)或蛋白酶体抑制(Manghera，Ferguson-Parry和Douville2016)。有趣的是，同样的研究表明，聚集形式的TDP-43的过表达增强了HERV-K病毒蛋白的表达和积累，而野生型(正常)TDP-43则没有(Manghera，Ferguson-Parry和Douville2016)。此外，尽管证据表明ALS皮质神经元中的应激颗粒和自噬反应增强，但这些细胞未能清除过量的HERV-K蛋白积累。典型的大多数逆转录病毒限制因子，TDP-43启动子可能对干扰素和炎症相关的转录因子产生响应，因为它含有干扰素调节因子(IRF1、IRF3)和核因子-κB(NFκB)的结合位点(Douville等，2011)。总之，这些研究结果表明，内源性逆转录病毒元件，特别是HERV-K参与了ALS的病理生理学，并且可能是TDP43与这种蛋白病之间缺失的连接(Alfahad和Nath2013)。因此，ALS患者神经元内的HERV-K包膜蛋白表达可促成神经变性和疾病发病机制。迄今为止，作为对症治疗，利鲁唑仍然是唯一相对有效的药物，并且仅将患者的平均存活期延长3-6个月(Hardiman，vandenBerg和Kiernan2011)。目前的治疗方案基于症状管本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.识别HERV-K包膜蛋白的抗体，其中所述抗体结合如SEQ ID NO：9所示的表位SLDKHKHKKLQSFYP。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170120 EP 17305062.61.识别HERV-K包膜蛋白的抗体，其中所述抗体结合如SEQIDNO：9所示的表位SLDKHKHKKLQSFYP。


2.根据权利要求1所述的抗体，其中：
i)所述识别HERV-K包膜蛋白的抗体包含如SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6所示的6个CDR中的每一个。


3.根据权利要求1或2所述的抗体，其中：
i)所述识别HERV-K包膜蛋白的抗体包含
-如SEQIDNO：7所示的轻链可变区(VL)；和
-如SEQIDNO：8所示的重链可变区(VH)。


4....

【专利技术属性】
技术研发人员：H·佩荣，J·梅迪纳，A·奈斯，J·P·施泰纳，李文学，MH·李，
申请(专利权)人：吉纳罗公司，卫生与公众服务部长代表的美国，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH