淫羊藿成分的检测方法和鉴别淫羊藿品种的方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种淫羊藿成分的检测方法和鉴别淫羊藿品种的方法及应用，涉及药物分析技术领域。该检测方法包括将供试品溶液在流动相中洗脱，并进行色谱分析；所述流动相包括乙腈和水的混合体系，并按照优化的洗脱条件洗脱：该检测方法能够在同一条件下同时检测包含如下六种成分：朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、2”‑O‑鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和宝藿苷Ⅰ，缓解了现有技术中存在的检测淫羊藿药材中成分单一的技术问题，具有检测方法简单，检测成本较低，检测准确度高的优点。

The detection method of the components of epimedium and the identification method and application of Epimedium varieties

【技术实现步骤摘要】
淫羊藿成分的检测方法和鉴别淫羊藿品种的方法及应用
本专利技术涉及药物分析
，尤其是涉及一种淫羊藿成分的检测方法和鉴别淫羊藿品种的方法及应用。
技术介绍
淫羊藿属多年生草本植物，植株高20-60厘米，根状茎粗短，暗棕褐色，二回三出复叶基生和茎生，具长柄，小叶纸质或厚纸质，叶缘具刺齿，花白色或淡黄色，花期5-6月，果期6-8月。淫羊藿生于林下、沟边灌丛中或山坡阴湿处，海拔650-3500米。中国陕西、甘肃、山西、河南、青海、湖北、四川等地区均有栽培。淫羊藿全草供药用。主治阳痿早泄，腰酸腿痛，四肢麻木，半身不遂，神经衰弱，健忘，耳鸣，目眩等症。现代研究表明，淫羊藿含淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C等具有共同母核，具有降压(引起周围血管舒张)、降血糖、利尿、镇咳祛痰等作用。药理实验研究表明，淫羊藿能增加心脑血管血流量，促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有抗衰老、抗肿瘤等功效。新加波医学专家研究发现，淫羊藿能有效杀死乳腺癌细胞，但用于临床还有待进一步研究。淫羊藿总黄酮类物质具有促进免疫调节、抗骨质疏松、抗心肌缺氧、改善心脏血液流变性、促进雄性生殖系统和生殖内分泌功能、抗炎、抗肿瘤、抗衰老等作用。淫羊藿总黄酮类微量成分为淫羊藿药材及提取物中主要的功能活性物质之一。学者从淫羊藿药材中提取纯化得到不同黄酮类物质单体，并对其进行一对一的药理分析研究，从淫羊藿药材原料方面进一步提升了其药材质量的判断依据，另一方面，对淫羊藿提取的发展和应用提出了更高的要求。近年来，随着社会的发展和人们生活水平的提高，人们自我保健意识的不断增强，对疾病的关注已经由单纯的治疗转向预防，在新的医学模式影响下，具备功能性或活性的植物提取物产品备受青睐。目前，植物提取物产业发展越来越快，植物提取物产业发展的速度已经超过药品发展速度，成为独立的新兴行业，在世界范围内得到广泛认可。淫羊藿中总黄酮类有效成分物质的含量及其应用价值远远高于其他已被发现的植物，因此淫羊藿提取物具有广泛的应用前景。目前，淫羊藿药材中微量成分的检测方法主要为高效液相色谱法和质谱法。《中国药典》规定淫羊藿药材中淫羊藿苷含量检测方法为高效液相色谱法，相关文献报道可利用液相质谱连用技术测定淫羊藿不同化学成分含量。高效液相色谱技术检测成分单一，作为淫羊藿药材的筛选和应用条件不够充分，也不能全面判定淫羊藿提取物的质量；液相质谱联用技术检测灵敏度较高，能同时利用超高效液相色谱联用技术同一时间测定淫羊藿药材中的多种成分，但是其检测仪器成本较高，应用不够广泛。2015年版《中国药典》收录有淫羊藿(Epimediifolium)和巫山淫羊藿(Epimediiwushanensisfolium)，其含量测定的指标分别为总黄酮、淫羊藿苷和朝藿定C。淫羊藿的壮阳作用与苷类成分8位的异戊烯基密切相关。因此，仅选择淫羊藿苷或朝藿定C难以用于控制淫羊藿质量的全部方面。淫羊藿的主要资源有淫羊藿(EpimediumbrevicornumMaxim.)、箭叶淫羊藿(Epimediumsagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim.)、柔毛淫羊藿(EpimediumpubescensMaxim.)、或朝鲜淫羊藿(EpimediumkoreanumNakai)。据文献与实地调查表明，小檗科淫羊藿属植物，全世界有57种，我国共有47种。徐艳琴等研究发现淫羊藿属类群数量近30年迅速增长，且90％以上的物种为中国特有，种间界限模糊不清使复合体大量存在，同时缺乏广泛深入的形态变异幅度调查。可见目前缺乏一种能全面检测淫羊藿药材中活性成分的方法以及鉴别各种淫羊藿药材品种的方法，因此一种能够较全面的检测淫羊藿药材中的提取物的含量，以及鉴别淫羊藿品种的方法是目前需要的。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种淫羊藿成分的检测方法，缓解了现有技术中存在的检测淫羊藿药材中的成分单一的技术问题。本专利技术的第二目的在于提供一种鉴别淫羊藿品种的方法，该方法通过检测待测样品中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和宝藿苷Ⅰ的含量分布实现。本专利技术的第三目的在于提供上述淫羊藿成分的检测方法，或上述鉴别淫羊藿品种的方法在制备药物中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种淫羊藿成分的检测方法，该检测方法使用高效液相色谱检测淫羊藿成分，所述淫羊藿成分包含朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和宝藿苷Ⅰ；所述检测方法包括将供试品溶液在流动相中洗脱，并进行色谱分析；所述流动相包括乙腈和水的混合体系，并按照如下条件洗脱，其中水和乙腈的比值为体积比：0-15min：水：乙腈为77～79％：21～23％；15-45min：水：乙腈为71～73％：27～29％；45-46min：水：乙腈为69～71％：29～31％；46-56min：水：乙腈为67～69％：31～33％；56min后：水：乙腈为0％：100％。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了一种鉴别淫羊藿品种的方法，该方法包括按照上述检测方法检测待测样品中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和宝藿苷Ⅰ的含量，根据各淫羊藿成分的含量判定待测样品的种类。根据本专利技术的另一个方面，本专利技术还提供了上述淫羊藿成分的检测方法，或上述鉴别淫羊藿品种的方法在制备药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的淫羊藿成分的检测方法，使用高效液相色谱，能够在同一条件下同时检测包含如下六种成分：朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和宝藿苷Ⅰ，为淫羊藿药材的筛选与评价提供全面、完善的成分分析质量标准，根据对大量不同产地不同品种淫羊藿成分分析达到初步鉴别淫羊藿药材品种的目的。专利技术提供的检测方法能够同时检测至少六种成分，通过该检测方法对淫羊藿品种和质量进行全面详细的评估，达到淫羊藿品种初步鉴别的目的。基于此，本专利技术还提供了鉴别淫羊藿品种的方法，该方法通过检测待测样品中上述至少六种淫羊藿成分的分布，来判定待测淫羊藿药材的品种。本专利技术提供的检测方法，采用高效液相色谱法，利用各物质间的分配系数将各物质分开，紫外检测器检测淫羊藿药材中至少六种成分的含量，检测过程中排除其他干扰。该检测方法通过优化的流动相洗脱条件和建立标准曲线，能够实现一次对淫羊藿中的至少六种成分进行检测，检测方法简单，检测成本较低。该方法经过后续的线性范围、精密度、稳定性、重复性和加标回收实验，结果表明使用该方法检测淫羊藿药材及提取物中至少六种微量成分结果准确、重复性好，检测结果准确可靠。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种淫羊藿成分的检测方法，其特征在于，使用高效液相色谱检测淫羊藿成分，所述淫羊藿成分包含朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和宝藿苷Ⅰ；所述检测方法包括将供试品溶液在流动相中洗脱，并进行色谱分析；所述流动相包括乙腈和水的混合体系，并按照如下条件洗脱，其中水和乙腈的比值为体积比：/n0-15min：水：乙腈为77～79％：21～23％；/n15-45min：水：乙腈为71～73％：27～29％；/n45-46min：水：乙腈为69～71％：29～31％；/n46-56min：水：乙腈为67～69％：31～33％；/n56min后：水：乙腈为0％：100％；/n优选地，0-15min：水：乙腈为78％：22％；/n优选地，15-45min：水：乙腈为72％：28％；/n优选地，45-46min：水：乙腈为70％：30％；/n优选地，46-56min：水：乙腈为68％：32％。/n

【技术特征摘要】
1.一种淫羊藿成分的检测方法，其特征在于，使用高效液相色谱检测淫羊藿成分，所述淫羊藿成分包含朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和宝藿苷Ⅰ；所述检测方法包括将供试品溶液在流动相中洗脱，并进行色谱分析；所述流动相包括乙腈和水的混合体系，并按照如下条件洗脱，其中水和乙腈的比值为体积比：
0-15min：水：乙腈为77～79％：21～23％；
15-45min：水：乙腈为71～73％：27～29％；
45-46min：水：乙腈为69～71％：29～31％；
46-56min：水：乙腈为67～69％：31～33％；
56min后：水：乙腈为0％：100％；
优选地，0-15min：水：乙腈为78％：22％；
优选地，15-45min：水：乙腈为72％：28％；
优选地，45-46min：水：乙腈为70％：30％；
优选地，46-56min：水：乙腈为68％：32％。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱分析包括将供试品溶液的色谱峰的峰面积代入标准曲线中计算得到各淫羊藿成分的含量；
优选地，将标准品使用液按照浓度梯度稀释后分别进行色谱分析，以保留时间进行定性，以峰面积进行定量；经色谱分析分别得到各浓度下各淫羊藿成分色谱峰的峰面积，以标准品使用液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线。


3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述标准品使用液中，朝藿定A的浓度为16.5881mg/L-165.581mg/L，朝藿定B的浓度为15.5335mg/L-153.350mg/L，朝藿定C的浓度为16.1968mg/L-161.968mg/L，淫羊藿苷的浓度为25.6676mg/L-256.6762mg/L，2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ的浓度为13.9860mg/L-139.860mg/L，宝藿苷Ⅰ的浓度为9.9441mg/L-99.4112mg/L；
优选地，所述标准品使用液中，朝藿定A的浓度为165.581mg/L，朝藿定B的浓度为153.350mg/L，朝藿定C的浓度为161.968mg/L，淫羊藿苷的浓度为256.6762mg/L，2”-O-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ的浓度为139.860mg/L，宝藿苷Ⅰ的浓度为99.4112mg/L。


4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液按照如下方法获得：将待检测的淫羊藿药材粉碎后和溶剂混合，超声后补足减失的重量，固液分离后取液相作为供试品溶液；
优选地，淫羊藿药材和溶剂的质量克数和体积毫升数的比为(0.8～1.2):100；
优选地，超声时间为60～100min；优选为60～85min；更优选为60min；
优选地，所述溶剂包括体积分数为40％～60％的乙醇水溶液；
优选地，所述溶剂包括体积分数为50％的乙醇水溶液。


5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱分析的检测波长为265-275nm；更优选为270nm；
优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉，张继斌，陈志元，李昌瑜，陈搏，严书超，
申请(专利权)人：劲牌生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42