源于草酸青霉iso-Penicillixanthone A及抗阿霉素耐药的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种源于草酸青霉iso‑Penicillixanthone A及抗阿霉素耐药的应用。该化合物结构特征是：

Isopenicillixanthone a from Penicillium oxalate and its application in adriamycin resistance

【技术实现步骤摘要】
源于草酸青霉iso-PenicillixanthoneA及抗阿霉素耐药的应用
本专利技术涉及源于草酸青霉iso-PenicillixanthoneA及抗阿霉素耐药的应用，属于生物医药领域。
技术介绍
目前临床治疗中，许多肿瘤经过初次药物治疗取得较好的效果，但最终常出现肿瘤复发，复发后对抗肿瘤药物的敏感性明显降低，严重影响患者的生存质量和时间。阿霉素（Adriamycin，ADR/ADM）是1969年由意大利ArcamoneF从链霉菌Str.Peucetiusvar.caesius培养基中分离出的蒽环类抗生素。ADR/ADM可抑制RNA和DNA的合成，对RNA的抑制作用最强，抗瘤谱较广，对多种肿瘤均有作用（如：急性白血病、恶性淋巴瘤、乳腺癌、肝癌等）。但目前临床上用于治疗急性淋巴细胞白血病、急性粒细胞性白血病出现对其耐药性，最终导致化疗失败。青霉蒽酮是一类由真菌次级代谢产生的蒽醌类有机化合物，自2002年青霉蒽酮A首次从Penicilliumthomii中发现至今，已经过去了十多年。该类化合物至今被报道了2个，分别是青霉蒽酮A、B且都是2-4’连接。该类化合物对肿瘤细胞抑制明显，是开发抗肿瘤药物或者肿瘤细胞增殖抑制剂的理想原料。但是对于他们对映体的抗肿瘤活性研究还是空白。本专利技术人研究得知，草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，(已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址：武汉，武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013714)的发酵产物的粗提取物有很好的细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行研究。研究发现所示青霉蒽酮类化合物具有抗人阿霉素耐药细胞株活性，目前尚未见该化合物对人阿霉素耐药细胞的增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供源于草酸青霉iso-PenicillixanthoneA及抗阿霉素耐药的应用。为实现上述目的，采用以下技术方案：源于草酸青霉的iso-PenicillixanthoneA，该化合物具有抑制阿霉素耐药细胞增殖作用，具有抗人阿霉素耐药活性。其结构式为：。该化合物的制备方法，是通过发酵培养草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，获取发酵菌丝体，然后从菌丝体中分离纯化出该化合物。具体步骤如下：1发酵生产培养微生物的常规方法，取草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6接种到平板固体培养基上在28℃培养箱中培养2-3d，然后接种到真菌培养基中，28℃静止培养30d后，经多层纱布过滤获得菌丝体和发酵液；所述真菌培养基成分：葡萄糖10.0g、麦芽糖20.0g、甘露醇20.0g、味精10.0g、酵母膏3.0g、NaCl15.0g、KH2PO40.5g、MgSO4·7H2O0.3g、超纯水定容至1L。2浸膏的获得用纱布将菌丝体和发酵液分离。菌丝体用丙酮溶液（含20%~30%水）连续超声破壁3次，过滤去除残渣，得到含丙酮和水的菌丝体的粗提物。减压浓缩去除丙酮，得到粗体物的水溶液，再以水溶液与乙酸乙酯体积比1:2加入乙酸乙酯萃取3次，得乙酸乙酯粗提液，浓缩蒸干获得菌丝体浸膏36.5g。3化合物的分离精制菌丝体浸膏通过100-200目硅胶拌样，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为梯度洗脱液，进行减压硅胶色谱柱层析。经过简单的薄层色谱分析、合并、分离成组分A-E。组分C(12.7g)以二氯甲烷：甲醇=1:2为梯度洗脱剂，进行凝胶柱层析（SephadexLH-20），经过薄层色谱分析后合并得到四个亚组分C1-C4。亚组分C3(4.9g)通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250mm，5μm)：分离流速为5mL/min，流动相为55%乙腈含0.1%TFA，得到所示化合物(510mg，tR22.8min)。所述草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址：武汉，武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013714。本专利技术还包括了所述的化合物在制备抑制人阿霉素耐药细胞增殖药物中的应用，及该化合物在制备抗人阿霉素耐药药物中的应用。本专利技术的显著优点在于：研究所示该青霉蒽酮化合物具有显著的抑制人阿霉素耐药细胞增殖活性，目前尚未见该化合物对人阿霉素耐药细胞增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。附图说明图1Iso-PenicillixanthoneA主要的COSY，HMBC和NOE信号。具体实施方式在如下的实施例中所指的化合物的化学结构：实施例1该化合物的发酵生产及分离精制1发酵生产生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6(已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址：武汉，武汉大学，保藏编号是：CCTCCNO：M2013714)适量，接种到平板固体培养基上在28℃培养箱中培养3d。取平板培养3d的草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6适量，接种到装有400mL培养液[培养液组成（克/升）：葡萄糖10.0、麦芽糖20.0、甘露醇20.0、味精10.0、酵母膏3.0、NaCl15.0、KH2PO40.5、MgSO4·7H2O0.3，超纯水定容至1L，28℃静止培养30d后，获得菌丝体和发酵液。2浸膏的获得用纱布将菌丝体和发酵液分离。菌丝体用丙酮溶液（含20%~30%水）连续超声破壁3次，过滤去除残渣，得到含丙酮和水的菌丝体的粗提物。减压浓缩去除丙酮，得到粗体物的水溶液，再以水溶液与乙酸乙酯体积比1:2加入乙酸乙酯萃取3次，得乙酸乙酯粗提液，减压浓缩至近干得菌丝体浸膏36.5g。3化合物的分离精制菌丝体浸膏通过100-200目硅胶拌样，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为梯度洗脱液，进行减压硅胶色谱柱层析。经过简单的薄层色谱分析，合并，分离成组分A-E。组分C(12.7g)以二氯甲烷：甲醇=1:2为梯度洗脱剂，进行凝胶柱层析（SephadexLH-20），经过薄层色谱分析后合并得到四个亚组分C1-C4。亚组分C3(4.9g)通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250mm，5μm)：分离流速为5mL/min，流动相为55%乙腈含0.1%TFA，得到所示化合物(510mg，tR22.8min)。化合物：常温下为黄色粉末，[α]20D+105.6°(c1,pyridine);[α]20D+3.1°(c1,Me2CO);高分辨电喷雾质谱HRESI-MS在m/z：661.1550处给出分子离子峰[M+Na]+（calcdforC32H30NaO14，661.1533）；提示分子量为638，结合波谱信息推测分子式为C32H30O14。1H和13C-NMR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.化合物

【技术特征摘要】
1.化合物，其特征在于：该化合物通过以下方法制备：发酵草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化得到该化合物；其中所述草酸青霉(Penicilliumoxalicum)IBPT-6，已于2013年12月25日保藏...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘沁颖，陈立，郑秋红，李欣欣，程苗苗，王思远，
申请(专利权)人：福建省肿瘤医院福建省肿瘤研究所，福建省癌症防治中心，
类型：发明
国别省市：福建;35