人重组甲硫氨酸亚砜还原酶A蛋白的结构和构建方法技术

本发明专利技术公开了一种人重组甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)蛋白的结构和构建方法。本发明专利技术结构中含有一段人EpK肽的组成结构；MsrA的结构为无信号肽的213个氨基酸链，通过BamHI限制性内切酶识别序列的编码氨基酸连接成一完整的人EpK‑MsrA融合蛋白多肽链。本发明专利技术制备的重组EpK‑MsrA融合蛋白通过慢病毒感染清道夫受体B族I型基因敲除(SR‑BI‑/‑)小鼠的方式在肝脏中高表达并能分泌入血；分泌的EpK‑MsrA融合蛋白可特征性结合于高密度脂蛋白，从而增加HDL功能蛋白组分载脂蛋白AI、对氧磷酶1等含量及活性、降低血浆及HDL中的炎性组成成分，具有抗动脉粥样硬化性心血管疾病的作用。

【技术实现步骤摘要】
人重组甲硫氨酸亚砜还原酶A蛋白的结构和构建方法
本专利技术涉及医药
，具体是指一种人重组甲硫氨酸亚砜还原酶A蛋白的结构和构建方法。
技术介绍
动脉粥样硬化(Atherosclerosis，简写为：As)所致的冠心病、中风等重要心脑血管疾病已成为严重危害人类健康的“头号杀手”。As的发生发展与脂质代谢紊乱、氧化应激、炎症等病因密切相关。其中脂质代谢紊乱是其中最重要的诱因之一，细胞内脂质异常沉积，可促进活性氧簇(ReactiveOxygenSpecies，简写为：ROS)的增加、炎症因子的释放，诱发氧化应激与炎症，而ROS、炎症水平的升高又加重了脂质代谢的失衡，加剧血管壁脂质的蓄积而产生功能损伤。因此，如何对机体的脂代谢、炎症和氧化应激进行协调的调控，是有效防治临床上严重心血管事件的有效途径。目前临床上针对As所致冠心病、中风等心脑血管疾病的治疗和/或预防的推荐方案包括药物防治和手术治疗。药物常以降脂为目的，广泛采用的是降低低密度脂蛋白胆固醇(LowDensityLipteinCholesterol，简写为：LDL-C)的他汀本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人重组甲硫氨酸亚砜还原酶A蛋白的结构，其特征在于：/n所述结构为重组的EpK-MsrA融合蛋白，其全长序列为280个氨基酸残基，所述EpK-MsrA融合蛋白基本结构，如SEQ ID NO.1所示，/n其中，6个His标签表现为His His His His His His；/n所述结构具体包括一段EpK肽的组成结构，如SEQ ID NO.2所示；/n人源性MsrA的结构为无信号肽的213个氨基酸链，通过BamHI限制性内切酶识别序列的编码氨基酸连接成一完整的EpK-MsrA融合蛋白多肽链；/n还包括在EpK肽前端的一段人源性载脂蛋白E即apoE的分泌肽序列，其结构如SEQ IDNO.3...

【技术特征摘要】
1.一种人重组甲硫氨酸亚砜还原酶A蛋白的结构，其特征在于：
所述结构为重组的EpK-MsrA融合蛋白，其全长序列为280个氨基酸残基，所述EpK-MsrA融合蛋白基本结构，如SEQIDNO.1所示，
其中，6个His标签表现为HisHisHisHisHisHis；
所述结构具体包括一段EpK肽的组成结构，如SEQIDNO.2所示；
人源性MsrA的结构为无信号肽的213个氨基酸链，通过BamHI限制性内切酶识别序列的编码氨基酸连接成一完整的EpK-MsrA融合蛋白多肽链；
还包括在EpK肽前端的一段人源性载脂蛋白E即apoE的分泌肽序列，其结构如SEQIDNO.3所示；
通过6个His标签与EpK连接。


2.一种如权利要求1所述人重组甲硫氨酸亚砜还原酶A蛋白结构的构建方法，其特征在于：利用apoE的一段低密度脂蛋白受体即LDLR结合域和一段脂质结合域，经过6个赖氨酸连接的特征序列，在EpK序列之前连接了apoE信号肽和6个His标签，其基本结构如SEQIDNO.4所示；
通过DNA合成仪合成并连接至pUC19载体内，并利用特定引物合成对pUC19重组载体进行定点诱变聚合酶链反应，将含信号肽及EpK的序列进行两端限制性核酸内切酶PacI、BamHI的改构，鉴定为成功构建的含信号肽-EpK的pUC18T重组体；
利用实验室前期将人源性MsrA构建于pWPI-GFP慢病毒载体中形成的pWPI-GFP-MsrA...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻红，曹佳，徐延勇，赵小杰，刘梦婷，杜芬，李菲菲，刘雨，周瑞，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42