一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法，由酰胺类化合物、金属螯合剂、防腐剂、表面活性剂、甾体杂环化合物和去离子水组成，本发明专利技术制备的通用于血清中类固醇激素的释放剂当做样本预处理液用于类固醇激素项目检测试剂中，根据人血清标本中类固醇激素的特异性和主要的存在形式，将人血清中络合态的睾酮、雌二醇、孕酮和皮质醇从各自的结合蛋白中释放出来后，采用化学发光免疫分析法(CLIA)对游离态的激素进行检测验证，使得样本结果测值准确。

【技术实现步骤摘要】
一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法
本专利技术涉及一种免疫分析
，具体涉及一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法。
技术介绍
类固醇激素(steroidhormone)又称甾体激素，是胆固醇经细胞色素P450(cytochromeP450)酶催化形成的一类具有环戊烷多氢菲结构的化合物。类固醇激素主要分为4类：孕酮、皮质醇、雌二醇和睾酮。类固醇激素对人体新陈代谢、维持内环境稳定、生长、发育及生殖行为等方面起着重要的调节作用[1-2]。类固醇激素分析方法是临床检测学、内分泌学以及其他交叉学科相关领域的重要研究内容之一。其中在人体血液中98％睾酮分子跟性激素结合球蛋白(SHBG)结合，几乎所有的雌二醇分子都以结合蛋白的形式存在，孕酮主要结合白蛋白，其次是与性激素结合球蛋白(SHBG)结合，以及血液中大部分的皮质醇与结合蛋白结合，大约1％的皮质醇以原型经尿液排出。而在临床诊断当中这4种类固醇激素只有检测游离态的才具有临床意义。怎样将样本血清中这4种类固醇激素从结合态中释放出来成为游离态的分子就成了实验研发中的一个难题。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种通用于血清中类固醇激素的释放剂及其制备方法，将该释放剂应用在类固醇激素的的临床实验中，能够将血清中结合态的4种激素从各自结合蛋白中释放出来，通过测定游离态激素的含量来获得样本临床实验数据，提高临床准确性。本专利技术的目的采用如下技术方案实现：一种通用于血清中类固醇激素的释放剂，由以下试剂组成：0.1-0.5wt％的酰胺类化合物、0.01-0.1wt％的金属螯合剂、0.05-0.2wt％的防腐剂、0.05～0.5wt％的表面活性剂和0.005-0.015wt％的甾体杂环化合物，其余为去离子水；其中，酰胺类化合物为N,N-二甲基甲酰胺和/或N-甲基乙酰胺；酰胺类化合物用于提高甾体杂环化合物的溶解性及稳定性。甾体杂环化合物包括甲氢睾酮、达那唑和雄诺龙中的一种或几种。达那唑为17α-乙炔睾丸酮的衍生物，为合成雄激素，具有弱雄激素活性，兼有蛋白同化作用和抗雌激素作用。但无孕激素和雌激素活性。达那唑和雄诺龙均为雄激素类。N-甲基乙酰胺具有溶解其它有机物的优良性能，所以在有机合成上常用作溶剂使用。α-巯基乙基磺酸钠主要用作表面活性剂中间体、日化及医药中间体。甾体杂环化合物与待检测的类固醇激素结构类似，可以将类固醇激素从结合蛋白中解离释放出来，从而甾体杂环化合物可以与结合蛋白结合，而待检测的类固醇激素处于游离状态，方便后续的检测。本专利技术制备的通用于血清中类固醇激素的释放剂当做样本预处理液用于类固醇激素项目检测试剂中，根据人血清标本中类固醇激素的特异性和主要的存在形式，将人血清中络合态的睾酮、雌二醇、孕酮和皮质醇从各自的结合蛋白中释放出来，使之处于游离状态，采用化学发光免疫分析法(CLIA)对游离态的激素进行检测验证，使得样本结果测值准确。进一步，所述金属螯合剂为EDTA和/或DTPA。EDTA和DTPA都是氨基羧酸类。EDTA能与Mg2+、Ca2+、Mn2+和Fe2+等二价金属离子结合的螯合剂。由于多数核酸酶类和有些蛋白酶类的作用需要Mg2+，故EDTA也常用做核酸酶和蛋白酶的抑制剂。DTPA是高效鳌合剂，鳌合性强，能迅速与钙、镁、铁、铅、铜、锰等离子生成水溶性络合物。再进一步，所述防腐剂包括硫柳汞、Proclin300和叠氮钠中的一种或几种。具体地，硫柳汞和叠氮钠均为杀菌剂，能有效预防有害微生物污染所致的潜在危害。Proclin300防腐剂是用于诊断试剂或产品中控制微生物含量的高效来灭菌剂。以其广谱活性、优越的兼容性和稳定性及其在使用浓度下的低毒性，ProClin300成为用于诊断试剂的理想高效防腐剂。ProClin300防腐剂可在更长的时间内根除细菌、真菌及酵母，从而延长以本专利技术的稳定剂配制的脑钠肽校准品的储存时间。其水溶性确保其可轻易溶入所需试剂中。特别是，ProClin300防腐对大多数的酶或抗体交联反应的功能无影响，所以不会干扰检验指示剂，适用于采用化学发光免疫分析法。进一步，所述表面活性剂包括Tween-20、Tween-40、TritonX-100和十二烷基硫酸钠中的一种或几种。Tween-20、Tween-40、NP-40和TritonX-100均为非离子表面活性剂，十二烷基硫酸钠为阴离子表面活性剂。甘油作为助表面活性剂能使非离子表面活性剂插入在反胶团的结构中以增大反胶团的尺寸，从而能溶解较大相对分子质量的蛋白质。明胶能与十二烷基硫酸钠相互作用，从而提高体系的摩尔电导率荧光强度，使得本专利技术制备的通用于血清中类固醇激素的释放剂当做样本预处理液用于类固醇激素项目检测试剂中，采用化学发光免疫分析法(CLIA)进行实验的验证结果更加准确。通用于血清中类固醇激素的释放剂的制备方法，包括以下步骤：1)称取酰胺类化合物、金属螯合剂、防腐剂、表面活性剂和甾体杂环化合物，混合后加入1L去离子水；2)调节pH值为6.4后，得到通用于血清中类固醇激素的释放剂，放在2-8℃条件下避光保存。进一步，步骤2)加入1mol/L盐酸溶液调节pH值为6.4。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术制备的通用于血清中类固醇激素的释放剂当做样本预处理液用于类固醇激素项目检测试剂中，将人血清中络合态的睾酮、雌二醇、孕酮和皮质醇从各自的结合蛋白中释放出来，使之成为游离态后，采用化学发光免疫分析法(CLIA)对游离态的激素进行检测验证，使得样本结果测值准确；(2)本专利技术的释放剂通用于睾酮、雌二醇、孕酮和皮质醇这4种类固醇激素，极大的简化了实验的流程，变得更为方便，大大减轻了实验人员的工作量，提高效率；(3)本专利技术制备的释放剂于整个类固醇激素类型的项目的实验研发具有重要意义，便于项目后续的研发以及优化。具体实施方式下面，结合具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。实施例1在1L去离子水中加入0.1wt％的N,N-二甲基甲酰胺和0.5wt％N-甲基乙酰胺、0.05wt％EDTA、0.1wt％叠氮钠，0.4wt％TritonX-100、0.005wt％甲氢睾酮、0.005wt％达那唑和0.005wt％雄诺龙混匀后，加入1mol/L盐酸溶液调节pH值为6.4，放置在2-8℃条件下避光保存。实施例2在1L去离子水中加入0.25wt％的N,N-二甲基甲酰胺和0.25wt％N-甲基乙酰胺、0.05wt％EDTA、0.1wt％叠氮钠，0.4wt％TritonX-100、0.010％甲氢睾酮、0.010％达那唑和0.010％雄诺龙混匀后，加入1mol/L盐酸溶液调节pH值为6.4，，放置在2-8℃条件下避光保存。实施例3在1L去离子水中加入0.5wt％的N,N-二甲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通用于血清中类固醇激素的释放剂，其特征在于，由以下试剂组成：/n0.1-0.5wt％的酰胺类化合物、0.01-0.1wt％的金属螯合剂、0.05-0.2wt％的防腐剂、0.05～0.5wt％的表面活性剂和0.005-0.015wt％的甾体杂环化合物，其余为去离子水；其中，酰胺类化合物为N,N-二甲基甲酰胺和/或N-甲基乙酰胺；甾体杂环化合物包括甲氢睾酮、达那唑和雄诺龙中的一种或几种。/n

【技术特征摘要】
1.一种通用于血清中类固醇激素的释放剂，其特征在于，由以下试剂组成：
0.1-0.5wt％的酰胺类化合物、0.01-0.1wt％的金属螯合剂、0.05-0.2wt％的防腐剂、0.05～0.5wt％的表面活性剂和0.005-0.015wt％的甾体杂环化合物，其余为去离子水；其中，酰胺类化合物为N,N-二甲基甲酰胺和/或N-甲基乙酰胺；甾体杂环化合物包括甲氢睾酮、达那唑和雄诺龙中的一种或几种。


2.如权利要求1所述的通用于血清中类固醇激素的释放剂，其特征在于，所述金属螯合剂为EDTA和/或DTPA。


3.如权利要求1所述的通用于血清中类固醇激素的释放剂，其特征在于，所述防腐剂包括硫柳汞、Proclin300、叠氮钠和洗必泰中的一...

【专利技术属性】
技术研发人员：周剑辉，
申请(专利权)人：广州科方生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44