A fusion protein, such as a cytokine receptor fusion protein, such as TGF \u03b2 trap, is provided with a new splice sequence to allow the fusion protein to be functionally optimal, such as allowing the cytokine receptor portion of the cytokine receptor fusion protein to optimally bind to its target cytokine. The fusion protein or expression vector encoding the fusion protein, such as a oncolytic adenovirus expression vector, can be used to treat cell proliferative diseases and disorders, including some forms of cancer and inflammatory disorders.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】免疫调节性融合蛋白与相关申请的交叉引用本申请要求2016年9月27日提交的美国临时专利申请系列号62/400,338和2017年4月12日提交的美国临时专利申请系列号62/484,841的利益和优先权，每个所述临时申请整体通过参考并入本文。
本专利技术的领域是分子生物学，具体来说是免疫学和融合蛋白，例如细胞因子受体融合蛋白。
技术介绍
细胞因子是一种小的、分泌的细胞信号传导蛋白，其具有广泛的活性，包括细胞生长和分化的调控以及免疫功能的调节。细胞因子、细胞因子受体和某些其他免疫调节蛋白已被用作治疗剂来治疗各种不同的医学病症。然而，这些蛋白的施用例如通过皮下或血管途径的施用，可能引起不适当的细胞和细胞外定位，由此限制了治疗活性和/或增加了毒性的风险。转化生长因子-β(TGFβ)是一种多效性细胞因子，其具有免疫调控性质，例如炎性和过敏性免疫应答的限制和终止(Taylor(2009)J.Leukoc.Biol.85(1)：29-33)。TGFβ与炎性、恶性、感染性和自体免疫疾病以及骨质疏松症和纤维化包括肝硬化和系统性硬化症具有一定联系。具体来说，肿瘤中持续高水平的TGFβ与免疫耐受、血管发生、转移和肿瘤细胞外基质沉积的增加相关，所有这些都可能驱动癌症发展和对疗法的抗性。已开发了几种治疗剂来捕获或螯合TGFβ并因此减低或调节TGFβ活性。实例包括针对TGFβ的单克隆抗体例如fresolimumab，其已在几项临床试验中施用用于治疗癌症和系统性硬化症(Connolly等，(2012)INT...
【技术保护点】
1.一种分离的融合蛋白，其包含：/n(i)细胞因子、细胞因子受体或免疫调节蛋白的细胞外结构域、跨膜结构域或细胞内结构域的第一部分；/n(ii)氨基酸接头；以及下述至少一种/n(iii)细胞因子、细胞因子受体或免疫调节蛋白的细胞外结构域、跨膜结构域或细胞内结构域的第二部分；/n(iv)免疫球蛋白(Ig)铰链区；和/n(v)免疫球蛋白(Ig)Fc结构域。/n
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
【国外来华专利技术】20160927 US 62/400,338;20170412 US 62/484,8411.一种分离的融合蛋白，其包含：
(i)细胞因子、细胞因子受体或免疫调节蛋白的细胞外结构域、跨膜结构域或细胞内结构域的第一部分；
(ii)氨基酸接头；以及下述至少一种
(iii)细胞因子、细胞因子受体或免疫调节蛋白的细胞外结构域、跨膜结构域或细胞内结构域的第二部分；
(iv)免疫球蛋白(Ig)铰链区；和
(v)免疫球蛋白(Ig)Fc结构域。
2.如权利要求1所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含约5至约40个氨基酸残基。
3.一种分离的融合蛋白，其以N-端到C-端的方向包含：
(i)细胞因子受体的细胞外结构域的可溶性部分；
(ii)氨基酸接头；
(iii)免疫球蛋白(Ig)铰链区；和
(iv)免疫球蛋白(Ig)Fc结构域；
其中所述接头包含约5至约40个氨基酸残基。
4.如权利要求1-3任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含约5至约30个氨基酸残基。
5.如权利要求1-3任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含约5至约20个氨基酸残基。
6.如权利要求1-3任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含约5至约15个氨基酸残基。
7.如权利要求1-3任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含约10至约40个氨基酸残基。
8.如权利要求1-3任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含约10至约30个氨基酸残基。
9.如权利要求1-3任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含约10至约20个氨基酸残基。
10.如权利要求1-3任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含约10至约15和氨基酸残基。
11.如权利要求1-10任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含源自于内源人类蛋白的序列。
12.如权利要求1-11任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含免疫球蛋白(Ig)CH1结构域的C-端部分。
13.如权利要求12所述的分离的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白CH1结构域选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgD、IgE和IgMCH1结构域。
14.如权利要求13所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含选自SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7、SEQIDNO：8、SEQIDNO：9、SEQIDNO：60和SEQIDNO：61的氨基酸序列。
15.如权利要求13所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含选自SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7、SEQIDNO：8和SEQIDNO：9的氨基酸序列。
16.如权利要求14或15所述的分离的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白CH1结构域是IgG1CH1结构域。
17.如权利要求16所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含选自SEQIDNO：1、SEQIDNO：60和SEQIDNO：61的氨基酸序列。
18.如权利要求16所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含SEQIDNO：1的氨基酸序列。
19.如权利要求1-11任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含源自于选自白蛋白和酪蛋白的人类蛋白的序列。
20.如权利要求19所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含选自SEQIDNO：10和SEQIDNO：11的氨基酸序列。
21.如权利要求1-11任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含源自于细胞因子、信号传导分子、免疫调节蛋白或肽的序列。
22.如权利要求1-21任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含切割位点。
23.如权利要求22所述的分离的融合蛋白，其中所述切割位点是蛋白水解切割位点。
24.如权利要求23所述的分离的融合蛋白，其中所述蛋白水解切割位点被存在于真核细胞的内质网或高尔基体中的蛋白酶切开。
25.如权利要求23或24所述的分离的融合蛋白，其中所述蛋白水解切割位点是弗林蛋白酶切割位点。
26.如权利要求25所述的分离的融合蛋白，其中所述弗林蛋白酶切割位点包含RX1X2R(SEQIDNO：50)，其中X1是任何氨基酸，并且X2是Lys或Arg。
27.如权利要求26所述的分离的融合蛋白，其中所述弗林蛋白酶切割位点包含RAKR(SEQIDNO：51)。
28.如权利要求1-21任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述接头包含在哺乳动物或植物中蛋白水解稳定的氨基酸序列。
29.如权利要求1-28任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述细胞因子受体是人类TGFβII型受体。
30.如权利要求29所述的分离的融合蛋白，其中所述细胞因子受体的细胞外结构域的可溶性部分包含SEQIDNO：12的氨基酸序列。
31.如权利要求29所述的分离的融合蛋白，其中所述细胞因子受体的细胞外结构域的可溶性部分包含SEQIDNO：12的23-159位氨基酸残基。
32.如权利要求1-31任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含下述一种以上：TGF-β、CD80、CD19、CD20、IL-1、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-9、IL-12B/p40、IL-23A/p19、IL27A/p28、IL-27B/EBI3、CD154、CD86、CD137、CD137L、IFN-α、IFN-β、BORIS/CTCFL、FGF、ICAM、IL-24、MAGE、NY-ESO-1、血管抑素、内皮抑素、乙酰胆碱、干扰素-γ、DKK1/Wnt、p53、胸苷激酶、抗PD-1抗体重链或轻链和抗PD-L1抗体重链或轻链，或其功能性片段。
33.如权利要求1-32任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述IgFc结构域和铰链区选自人类IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgD、IgE和IgMFc结构域和铰链区。
34.如权利要求33所述的分离的融合蛋白，其中所述IgFc结构域和铰链区包含选自SEQIDNO：13、SEQIDNO：14、SEQIDNO：15、SEQIDNO：16、SEQIDNO：17、SEQIDNO：18、SEQIDNO：19、SEQIDNO：20和SEQIDNO：21的氨基酸序列。
35.如权利要求34所述的分离的融合蛋白，其中所述IgFc结构域和铰链区是人类IgG1Fc结构域和铰链区。
36.如权利要求35所述的分离的融合蛋白，其中所述IgFc结构域和铰链区包含SEQIDNO：13的氨基酸序列。
37.如权利要求1-36任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述IgFc、Ig铰链区和IgCH1结构域源自于单一免疫球蛋白。
38.如权利要求1-37任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含选自SEQIDNO：22、SEQIDNO：23、SEQIDNO：24、SEQIDNO：25、SEQIDNO：26、SEQIDNO：27、SEQIDNO：28、SEQIDNO：29、SEQIDNO：30、SEQIDNO：31、SEQIDNO：32、SEQIDNO：33、SEQIDNO：62和SEQIDNO：63的氨基酸序列。
39.如权利要求1-37任一项所述的分离的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含选自SEQIDNO：22、SEQIDNO：23、SEQIDNO：24、SEQIDNO：25、SEQIDNO：26、SEQIDNO：27、SEQIDNO：28、SEQIDNO：29、SEQIDNO：30、SEQIDNO：31、SEQIDNO：32和SEQIDNO：33的氨基酸序列。
40.如权利要求38或39所述的分离的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含选自SEQIDNO：22、SEQIDNO：62和SEQIDNO：63的氨基酸序列。
41.如权利要求38或39所述的分离的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含SEQIDNO：22的氨基酸序列。
42.一种细胞因子结合蛋白，其包含如权利要求1-41任一项所述的两个融合蛋白，其中每个融合蛋白包含细胞因子受体的细胞外结构域，其中所述两个融合蛋白被共价连接在一起，并且其中所述两个细胞外结构域一起定义用于结合细胞因子的结合位点。
43.一种分离的核酸，其包含编码如权利要求1-42任一项所述的融合蛋白的核苷酸序列。
44.一种表达载体，其包含如权利要求43所述的核酸。
45.如权利要求44所述的表达载体，其中所述表达载体是溶瘤病毒。
46.如权利要求45所述的表达载体，其中所述溶瘤病毒是腺病毒。
47.如权利要求46所述的表达载体，其中所述腺病毒是2型或5型腺病毒。
48.如权利要求47所述的表达载体，其中所述腺病毒是5型腺病毒。
49.如权利要求46-48任一项所述的表达载体，其中编码所述融合蛋白的核苷酸序列被插入到位于E1b-19K的起始位点与E1b-55K的起始位点之间的E1b-19K插入位点中。
50.如权利要求49所述的表达载体，其中所述E1b-19K插入位点包含与所述E1b-19K的起始位点相邻的约200个核苷酸的缺失。
51.如权利要求49或50所述的表达载体，其中所述E1b-19K插入位点包含与所述E1b-19K的起始位点相邻的203个核苷酸的缺失。
52.如权利要求49-51任一项所述的表达载体，其中所述E1b-19K插入位点包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：52)的1714-1916位核苷酸的缺失。
53.如权利要求49-52任一项所述的表达载体，其中编码所述融合蛋白的核苷酸序列被插入到对应于Ad5基因组(SEQIDNO：52)的1714位与1916位的核苷酸之间。
技术研发人员：克里斯托弗·拉森，托尼·雷德，布莱恩·T·奥兰斯基，
申请(专利权)人：埃皮辛特瑞柯斯公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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