【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多转入基因重组腺病毒与相关申请的交叉引用本申请要求2017年4月12日提交的美国临时专利申请系列号62/484,841的利益和优先权，所述临时申请在此整体通过引用并入本文。
本专利技术的领域是分子生物学和病毒学，具体来说是表达两个或更多个治疗性转入基因的重组病毒。
技术介绍
尽管对引起癌症的基础分子机制已有广泛了解，但大多数晚期癌症仍然不能使用当前的化疗和放疗方案治愈。溶瘤病毒作为有潜力显著增强当前用于各种不同恶性肿瘤的标准治疗的平台技术而出现(Kumar，S.等，(2008)CURRENTOPINIONINMOLECULARTHERAPEUTICS10(4)：371-379；Kim，D.(2001)EXPERTOPINIONONBIOLOGICALTHERAPY1(3)：525-538；KimD.(2000)ONCOGENE19(56)：6660-6669)。这些病毒已显示出作为溶瘤剂的希望，其不仅通过感染-繁殖-裂解的链式反应直接破坏恶性细胞，而且间接地诱导抗肿瘤免疫。这些免疫刺激性质通过每当病毒复制时复制并表达的治疗性转入基因的插入而被增强。以前开发的溶瘤病毒包括被称为TAV-255的溶瘤5血清型腺病毒(Ad5)，其在正常细胞中转录弱化，但在癌细胞中活跃转录(参见PCT公开号WO2010101921)。据信，所述TAV-255载体实现这种肿瘤选择性的机制是通过转录因子Pea3和E2F的三个转录因子(TF)结合位点的定向缺失，这些转录因子是通过结合到特定DNA序列来调控病毒进入宿主...
【技术保护点】
1.一种重组腺病毒，其包含编码第一治疗性转入基因的第一核苷酸序列、编码第二治疗性转入基因的第二核苷酸序列和配置在所述第一核苷酸序列与第二核苷酸序列之间编码可切割位点的第三核苷酸序列。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170412 US 62/484,8411.一种重组腺病毒，其包含编码第一治疗性转入基因的第一核苷酸序列、编码第二治疗性转入基因的第二核苷酸序列和配置在所述第一核苷酸序列与第二核苷酸序列之间编码可切割位点的第三核苷酸序列。
2.权利要求1的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒包含以5’至3’方向包含所述第一核苷酸序列、第三核苷酸序列和第二核苷酸序列的多核苷酸序列。
3.权利要求1或2的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒包含以5’至3’方向连续包含所述第一核苷酸序列、第三核苷酸序列和第二核苷酸序列的多核苷酸序列。
4.权利要求1-3中任一项的重组腺病毒，其中所述第一核苷酸序列、第三核苷酸序列和第二核苷酸序列被可操作地连接到任选地位于所述第一核苷酸序列的第一核苷酸的5’的单一启动子。
5.权利要求1-4中任一项的重组腺病毒，其中所述第一核苷酸序列、第三核苷酸序列和第二核苷酸序列被表达为单一多肽链。
6.权利要求1-5中任一项的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒是5型腺病毒(Ad5)或2型腺病毒(Ad2)。
7.权利要求6的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒是5型腺病毒(Ad5)。
8.权利要求1-7中任一项的重组腺病毒，其中所述可切割位点是可蛋白水解切割位点。
9.权利要求8的重组腺病毒，其中所述可蛋白水解切割位点被存在于真核细胞的内质网或高尔基体中的蛋白酶切割。
10.权利要求8或9的重组腺病毒，其中所述可蛋白水解切割位点是弗林蛋白酶可切割位点。
11.权利要求10的重组腺病毒，其中所述弗林蛋白酶可切割位点包含RX1X2R(SEQIDNO：6)，其中X1是任何氨基酸，并且X2是Lys或Arg。
12.权利要求11的重组腺病毒，其中所述弗林蛋白酶可切割位点包含RAKR(SEQIDNO：7)。
13.权利要求1-12中任一项的重组腺病毒，其中所述第一、第二和第三核苷酸序列被插入到位于E1b-19K的起始位点与E1b-19K的终止位点之间的E1b-19k插入位点中。
14.权利要求13的重组腺病毒，其中所述E1b-19K插入位点位于E1b-19K的起始位点与E1b-55K的起始位点之间。
15.权利要求13或14的重组腺病毒，其中所述E1b-19K插入位点包含在E1b-19K的起始位点附近约200个核苷酸的缺失。
16.权利要求15的重组腺病毒，其中所述E1b-19K插入位点包含在E1b-19K的起始位点附近202个核苷酸的缺失。
17.权利要求15的重组腺病毒，其中所述E1b-19K插入位点包含在E1b-19K的起始位点附近203个核苷酸的缺失。
18.权利要求13-17中任一项的重组腺病毒，其中所述E1b-19K插入位点包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第1714-1916位核苷酸的缺失。
19.权利要求13-17中任一项的重组腺病毒，其中所述E1b-19K插入位点包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第1714-1917位核苷酸的缺失。
20.权利要求13-19中任一项的重组腺病毒，其中所述第一核苷酸序列、第三核苷酸序列和第二核苷酸序列被插入到CTGACCTC(SEQIDNO：2)和TCACCAGG(SEQIDNO：3)之间。
21.权利要求13-20中任一项的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒以5’至3’方向包含CTGACCTC(SEQIDNO：2)、第一核苷酸序列、第三核苷酸序列、第二核苷酸序列和TCACCAGG(SEQIDNO：3)。
22.权利要求1-21中任一项的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒包含具有功能性Pea3结合位点的缺失的E1a启动子。
23.权利要求22的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于E1a的起始位点上游约-300至约-250位的核苷酸的缺失。
24.权利要求22或23的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于E1a的起始位点上游-304至-255位的核苷酸的缺失。
25.权利要求22或23的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于E1a的起始位点上游-305至-255位的核苷酸的缺失。
26.权利要求22-25中任一项的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第195-244位的核苷酸的缺失。
27.权利要求22-26中任一项的重组腺病毒，其中所述E1a启动子包含序列GGTGTTTTGG(SEQIDNO：4)。
28.权利要求1-27中任一项的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒包含具有功能性TATA盒的缺失的E1a启动子。
29.权利要求28的重组腺病毒，其中所述缺失包含整个TATA盒的缺失。
30.权利要求28或29的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于E1a启动子的-27至-24位的核苷酸的缺失。
31.权利要求28-30中任一项的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于E1a启动子的-31至-24位的核苷酸的缺失。
32.权利要求28-31中任一项的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于E1a启动子的44至+54位的核苷酸的缺失。
33.权利要求28-32中任一项的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于E1a启动子的-146至+54位的核苷酸的缺失。
34.权利要求28-33中任一项的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第472至475位的核苷酸的缺失。
35.权利要求28-34中任一项的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第468至475位的核苷酸的缺失。
36.权利要求28-35中任一项的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第455至552位的核苷酸的缺失。
37.权利要求28-36中任一项的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第353至552位的核苷酸的缺失。
38.权利要求28-37中任一项的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒包含产生包含序列CTAGGACTG(SEQIDNO：5)、AGTGCCCG(SEQIDNO：16)和/或TATTCCCG(SEQIDNO：17)的病毒的多核苷酸缺失。
39.权利要求38的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒包含产生包含序列CTAGGACTG(SEQIDNO：5)的病毒的多核苷酸缺失。
40.权利要求1-39中任一项的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒包含具有功能性CAAT盒的缺失的E1a启动子。
41.权利要求40的重组腺病毒，其中所述缺失包含整个CAAT盒的缺失。
42.权利要求40或41的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于E1a启动子的-76至-68位的核苷酸的缺失。
43.权利要求40-42中任一项的重组腺病毒，其中所述缺失包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第423至431位的核苷酸的缺失。
44.权利要求40-43中任一项的重组腺病毒，其中所述E1a启动子包含序列TTCCGTGGCG(SEQIDNO：18)。
45.权利要求1-44中任一项的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒还包含E3缺失，其中所述E3缺失位于pVIII的终止位点与Fiber的起始位点之间。
46.权利要求45的重组腺病毒，其中所述E3缺失位于E3-10.5K的终止位点与E3-14.7K的终止位点之间。
47.权利要求45或46的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含约500至约3185、约500至约3000、约500至约2500、约500至约2000、约500至约1500、约500至约1000、约1000至约3185、约1000至约3000、约1000至约2500、约1000至约2000、约1000至约1500、约1500至约3185、约1500至约3000、约1500至约2000、约2000至约3185、约2000至约3000、约2000至约2500、约2500至约3185、约2500至约3000或约3000至约3185个核苷酸的缺失。
48.权利要求45-47中任一项的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含在E3-10.5K的终止位点附近约500至约1551、约500至约1500、约500至约1000、约1000至约1551、约1000至约1500或约1500至约1551个核苷酸的缺失。
49.权利要求45-48中任一项的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含在E3-10.5K的终止位点附近约1050个核苷酸的缺失。
50.权利要求45-49中任一项的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含在E3-10.5K的终止位点附近1063个核苷酸的缺失。
51.权利要求45-49中任一项的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含在E3-10.5K的终止位点附近1064个核苷酸的缺失。
52.权利要求45-51中任一项的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含对应于Ad5d1309E3缺失的缺失。
53.权利要求45-52中任一项的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第29773-30836位核苷酸的缺失。
54.权利要求45的重组腺病毒，其中所述E3缺失位于E3-gp19K的终止位点与E3-14.7K的终止位点之间。
55.权利要求54的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含在E3-gp19K的终止位点附近约500至约1824、约500至约1500、约500至约1000、约1000至约1824、约1000至约1500或约1500至约1824个核苷酸的缺失。
56.权利要求54或55的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含在E3-gp19K的终止位点附近约1600个核苷酸的缺失。
57.权利要求54-56中任一项的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含在E3-gp19K的终止位点附近1622个核苷酸的缺失。
58.权利要求54-58中任一项的重组腺病毒，其中所述E3缺失包含对应于Ad5基因组(SEQIDNO：1)的第29218-30839位核苷酸的缺失。
59.权利要求1-58中任一项的重组腺病毒，其中所述重组腺病毒还包含E4缺失，其中所述E4缺失位于E4-ORF6/7的起始位点与右侧末端反向重复序列(ITR)之间。
60.权利要求59的重组腺病毒，其中所述E4缺失位于E4-ORF6/7的起始位点与E4-ORF1的起始位点之间...
【专利技术属性】
技术研发人员：托尼·R·雷德，克里斯托弗·拉森，布莱恩·T·奥兰斯基，
申请(专利权)人：埃皮辛特瑞柯斯公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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