The invention discloses a method for the separation, culture and expansion of umbilical cord mesenchymal stem cells, 1) cleaning, 2) treatment, 3) culture, 4) inoculation and passage. The method for obtaining umbilical cord mesenchymal stem cells by the tissue block separation method of the invention is simple, low cost, good cell activity, high purity, high final cell concentration, simple method for obtaining mesenchymal stem cells, and can quickly and efficiently separate MSC At the 4th to 5th day of culture, we can see the cells crawling out of the tissue block, and the final cell concentration is high. The whole culture process of umbilical cord mesenchymal stem cells can be standardized, programmed and standardized.
【技术实现步骤摘要】
一种脐带间充质干细胞分离培养扩增方法
本专利技术涉及干细胞分离培养
,尤其涉及一种脐带间充质干细胞分离培养扩增方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体,是动物有机体和各种组织器官的起源细胞。新近的研究表明,众多成体组织中(如骨髓、肌肉、胃肠道、皮肤、视网膜、外周及中枢神经系统等)均存在间充质干细胞。MSCs它来源广泛、易体外分离扩增,具有向三种胚层细胞分化的多向分化潜能;具有低免疫原性、不能刺激产生同种异体免疫反应、不被细胞毒性T细胞和NK细胞杀伤,“归巢”修复作用,肿瘤趋向性以及免疫调节作用。研究表明,脐带间充质细胞主要来源于脐带华通氏胶(Wharton’Sjelly)。UC-MSCs的优势在于:①脐带为分娩后的废弃物,取材方便,来源广泛,易于收集、保存、冷冻、不受伦理、道德及法律方面的争论与限制;②相对纯净,与干细胞输注相关的病毒和病原微生物感染率远低于骨髓移植;③人UC-MSCs含量丰富,较为原始,分化能力强,可在体外进行分离、培养,扩增迅速,且生物性能稳定,多次传代扩增仍能保持旺盛功能,可以为实验和临床提供充足的细胞来源;④人UC-MSCs不表达或低表达组织相容性标记,免疫原性低,异体移植无免疫排斥反应或反应较弱,不须经过严格配型即能使用,适宜于不同个体之间的移植;⑤UC-MSCs可直接获取于新生儿脐带,进行储存库长期保存,不存在对机体产生创伤。因此UC-MSCs已被当做是临床和科研工作中MSCs的一个更佳 ...
【技术保护点】
1.一种脐带间充质干细胞分离培养扩增方法,其特征在于,包括下列步骤:/n1)清理,无菌条件下,获取新鲜脐带,将新鲜脐带用清洗液冲洗脐带表面,清洗去除脐带上的血管残留的血液与其他杂物;/n2)处理,将清洗后的脐带用手术刀去除脐静脉与脐带表面的羊膜层,然后将脐带剪成细条状,再将细条状脐带剪碎为1~3mm
【技术特征摘要】
1.一种脐带间充质干细胞分离培养扩增方法,其特征在于,包括下列步骤:
1)清理,无菌条件下,获取新鲜脐带,将新鲜脐带用清洗液冲洗脐带表面,清洗去除脐带上的血管残留的血液与其他杂物;
2)处理,将清洗后的脐带用手术刀去除脐静脉与脐带表面的羊膜层,然后将脐带剪成细条状,再将细条状脐带剪碎为1~3mm3的脐带组织块;
3)培养,将所述脐带组织块平铺于细胞培养皿中,将水分挥发后加入含有10~20%胎牛血清的培养液中进行培养;
4)接种传代,所述脐带组织块原代分离培养脐带间充质干细胞生长达到80~90%融合后,即可传代扩增培养,获得脐带间充质干细胞,用0.0625%胰酶/EDTA消化细胞,按3000~5000个/cm2接种,所述脐带间充质干细胞接种后4~5天可以达到95%融合,融合95%以上所述脐带间充质干细胞可以扩增至25代次以上。
2.如权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞分离培养扩增方法,其特征在于:所述步骤1)中清洗液含青霉素、链霉素的磷酸盐缓冲液。
3.如权利要求1所述的一种脐带间充质干细胞分离培养扩增方法,其特征在于:步...
【专利技术属性】
技术研发人员:孟明耀,侯宗柳,王文举,高慧,赵旖旖,李琳,解燕华,唐维伟,
申请(专利权)人:孟明耀,侯宗柳,
类型:发明
国别省市:云南;53
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