高通量筛选护肤品用活性组合物的方法技术

本发明专利技术提供了一种高通量筛选护肤品用活性组合物的方法，其包括：(1)使用两种或两种以上的多肽构建多种多肽组合物，或者通过培养细胞获得多种细胞培养上清液；以及(2)让所述多肽组合物或所述细胞培养上清液与护肤品用体外筛选模型细胞接触，并检测所述护肤品用体外筛选模型细胞的活性变化，其中通过所述护肤品用体外筛选模型细胞的活性变化确定所述多肽组合物或所述细胞培养上清液是否能够用作护肤品用活性组合物。本文提供的方法通过构建极其多样化的待筛选文库，能够针对不同的皮肤护理问题，按需筛选出最优的多肽因子组合，从而理性地应用于护肤品中。

High throughput screening method of active composition for skin care products

The invention provides a method for high-throughput screening of active composition for skin care products, which includes: (1) constructing a plurality of polypeptide compositions with two or more polypeptides, or obtaining a plurality of cell culture supernatants by culturing cells; and (2) contacting the polypeptide complexes or the cell culture supernatants with the in vitro screening model cells for skin care products, and detecting the protection The activity change of model cells screened in vitro for skin products, wherein the activity change of model cells screened in vitro for skin products determines whether the polypeptide composition or the cell culture supernatant can be used as the active composition for skin products. The method proposed in this paper can be used in skin care products rationally by constructing an extremely diverse library to be screened, which can select the optimal combination of peptide factors according to different skin care problems.

【技术实现步骤摘要】
高通量筛选护肤品用活性组合物的方法
本专利技术涉及筛选护肤品用活性组合物的方法，尤其涉及通过构建大容量的待筛选多肽文库来筛选护肤品用活性组合物的方法。
技术介绍
多肽是由氨基酸经肽键连接而成的一类化合物，其在连接方式上与蛋白质相同。通常将含有氨基酸数量少于100个的称为多肽，而氨基酸数量小于10个的称为寡肽。目前寡肽的来源一般有两种：化学合成或天然哺乳动物细胞分泌。对于化学合成，寡肽一般可以通过固相合成技术直接合成和进行基团修饰，能够有效得到高纯度的单一肽。对于天然多肽因子，其可以广泛来源于哺乳动物细胞的体外培养，通过调整培养条件和细胞种类，能够获得多种多样的天然多肽因子混合物。现代科学技术的飞速发展和广泛应用给美容化妆品行业带来了全新的发展机遇，护肤品已经从化学美容、植物美容向生物美容和基因美容方向发展。具有显著美容功效的多肽(也称胜肽)逐步运用到了中高端功效型护肤品中。多肽的使用至今已有20多年，它们在国外已有广泛应用。多个国家的知名品牌推出了多肽类化妆品，例如，玉兰油，雅芳，雅诗兰黛，兰蔻，欧莱雅，香奈儿，迪奥，SK-II等。目前，护肤品多肽的使用主要是依赖每一种多肽的已知生物学功能。事实上，各类多肽(无论是合成型多肽还是天然细胞分泌的混合多肽)都可以有效激活人体皮肤细胞的复杂信号通路，从而获得多样化的效果。尤其是，同样的多肽在不同的浓度、不同的多肽组合、配比下都可以在多种皮肤生物学场景下发挥出异常多样的效果，而目前的生物学认知还无法理性地预测多种多肽组合使用的效果。
技术实现思路
为了克服上述问题，本文提供了一种高通量筛选护肤品用活性组合物的方法，包括:(1)使用两种或两种以上的已知多肽构建多种多肽组合物，或者通过培养细胞获得多种细胞培养上清液；(2)让所述多肽组合物或所述细胞培养上清液与护肤品用体外筛选模型细胞接触，并检测所述护肤品用体外筛选模型细胞的活性变化，其中通过所述护肤品用体外筛选模型细胞的活性变化确定所述多肽组合物或所述细胞培养上清液是否能够用作护肤品用活性组合物。在一些实施方案中，所述已知多肽为寡肽。在一些实施方案中，所述已知多肽选自表1中所示寡肽的两种或两种以上。在一些实施方案中，所述构建多种多肽组合物包括调整所述多肽组合物中含有的多肽种类和/或多肽的浓度和/或浓度比例。在一些实施方案中，步骤(1)中所述多种细胞培养上清液通过改变细胞培养条件而获得。在一些实施方案中，所述细胞培养条件包括细胞类型、细胞传代次数、培养基组成以及培养环境。在一些实施方案中，步骤(1)中所用细胞为哺乳动物细胞。在一些实施方案中，所述哺乳动物细胞为干细胞。在一些实施方案中，所述干细胞为间充质干细胞。在一些实施方案中，所述干细胞选自脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞和骨髓间充质干细胞。在一些实施方案中，所述护肤品用体外筛选模型细胞选自抗皱纹模型细胞、美白模型细胞和生发模型细胞。在一些实施方案中，所述抗皱纹模型细胞为皮肤成纤维细胞，所述美白模型细胞为黑色素细胞，所述生发模型细胞为真皮乳头细胞。在一些实施方案中，在所述护肤品用体外筛选模型细胞为皮肤成纤维细胞时，检测所述皮肤成纤维细胞在UVA辐射处理后的存活率变化；在所述护肤品用体外筛选模型细胞为黑色素细胞时，检测所述黑色素细胞的酪氨酸酶活性变化；在所述护肤品用体外筛选模型细胞为真皮乳头细胞时，检测所述真皮乳头细胞的VEGF表达水平变化。本文提供的方法通过构建极其多样化的待筛选文库，能够针对不同的皮肤护理问题，按需筛选出最优的多肽因子组合，从而理性地应用于护肤品中。附图说明图1显示了本专利技术人工合成库和天然库的构建示意图。图2显示了本专利技术筛选方法的操作流程示意图。图3显示了实施例3中抗皱纹模型筛选结果。图4显示了实施例4中美白模型筛选结果。图5显示了实施例5中生发模型筛选结果。具体实施方式除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员所通常理解的含义。本文中使用的“多肽组合物”指包含两种或两种以上多肽的混合物。可以通过调整其中的具体多肽种类、多肽种类的数量、多肽的浓度、多肽之间的相对浓度比例、多肽修饰方式等获得多种多肽组合物，即多肽组合物文库。多肽组合物中包含的多肽通常为已知多肽，可以通过人工合成方式获得，因此这种多肽组合物文库也可称为人工合成库。本文中使用的“细胞培养上清液”指细胞培养期间的细胞外溶液，其通常可以通过离心沉降去除细胞而获得。细胞培养上清液中一般含有培养基成分和细胞向外分泌的细胞因子和其它分子(核酸、脂质等)。例如，已知细胞会通过旁分泌效应(paracrineaction)(区别于内分泌长程效应)分泌某些细胞因子对邻近靶细胞(可以是同种细胞也可以是异种细胞)产生生物学作用，这是细胞发挥其生理功能的最主要途径之一。可以通过调整细胞类型和细胞来源、控制培养环境(温度、湿度、CO2浓度等)、调整培养基成分等方式让细胞向外分泌不同成分，从而形成多种多样的细胞培养上清液，构成细胞培养上清液文库。相对于上文的人工合成库，该细胞培养上清液文库可以称为天然库。图1显示了人工合成库和天然库的构建示意图，其中人工合成库以寡肽为例。显然，本文中使用的多肽组合物或细胞培养上清液在数量上和复杂度上明显高于目前本领域已知的护肤品用活性化合物，它们构成了本文提供的高通量筛选方法的筛选对象。利用本文提供的方法，可针对不同的皮肤问题，采用适合的细胞筛选模型并结合相应的检测指标，对这些人工合成库和天然库进行体外高通量筛选，能够快速获得效果最佳的活性组合物，无论其来自人工合成库还是来自天然库(图2)。以下通过具体实施例进一步阐述本专利技术。实施例实施例1.天然库的构建本实施例使用间充质干细胞(包括但不限于骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞等)，通过不同培养条件以及所培养的间充质干细胞来源的改变，形成各种不同的细胞培养上清液。该培养条件包括以下所有可选条件的组合：干细胞基础培养基(例如，StemProTMMSCSFMXenoFree，ThermoFisher)细胞源：脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞代数选择：P3、P6、P9CO2浓度：2％、5％、8％维生素C浓度(μg/mL)：20、35、50胰岛素浓度(μg/mL)：2、4、8运铁蛋白浓度(μg/mL)：2、4、6亚硒酸钠(ng/mL)：2、4、8可选条件共计：37＝2187种，即通过2187种不同的培养条件，获得2187种不同组成配比的混合多肽因子成分，可用于下游基于不同场景问题的多肽因子组合的筛选。本研究对细胞分泌物进行了初步鉴定，它们主要由50个氨基酸以下的多肽组成，另外包含约15％的大型蛋白质(大于100个氨基酸)、核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高通量筛选护肤品用活性组合物的方法，包括：/n(1)使用两种或两种以上的多肽构建多种多肽组合物，或者通过培养细胞获得多种细胞培养上清液；以及/n(2)让所述多肽组合物或所述细胞培养上清液与护肤品用体外筛选模型细胞接触，并检测所述护肤品用体外筛选模型细胞的活性变化，/n其中通过所述护肤品用体外筛选模型细胞的活性变化确定所述多肽组合物或所述细胞培养上清液是否能够用作护肤品用活性组合物。/n

【技术特征摘要】
1.一种高通量筛选护肤品用活性组合物的方法，包括：
(1)使用两种或两种以上的多肽构建多种多肽组合物，或者通过培养细胞获得多种细胞培养上清液；以及
(2)让所述多肽组合物或所述细胞培养上清液与护肤品用体外筛选模型细胞接触，并检测所述护肤品用体外筛选模型细胞的活性变化，
其中通过所述护肤品用体外筛选模型细胞的活性变化确定所述多肽组合物或所述细胞培养上清液是否能够用作护肤品用活性组合物。


2.如权利要求1所述的方法，其中所述多肽为寡肽。


3.如前述权利要求任一种所述的方法，其中所述多肽选自表1中所示的寡肽。


4.如前述权利要求任一种所述的方法，其中所述构建多种多肽组合物包括调整所述多肽组合物中含有的多肽种类和/或多肽的浓度和/或浓度比例和/或多肽修饰方式。


5.如前述权利要求任一种所述的方法，其中步骤(1)中所述多种细胞培养上清液通过改变细胞培养条件而获得。


6.如前述权利要求任一种所述的方法，其中所述细胞培养条件包括细胞类型和/或细胞传代次数和/或培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：李钧翔，周碧柳，陆益，
申请(专利权)人：启迪禾美生物科技嘉兴有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33