一种间充质干细胞分泌肽及其应用制造技术

本申请涉及护肤品，具体涉及一种源自间充质干细胞分泌肽及其相关用途，本发明专利技术获得的分泌肽具有缓解衰老，抗氧化、抗炎性，并能够有效的缓解由于紫外线照射带来的皮肤损伤。的缓解由于紫外线照射带来的皮肤损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞分泌肽及其应用


[0001]本申请涉及皮肤修复与改善领域，具体涉及一种源自间充质干细胞分泌肽及其相关用途。

技术介绍

[0003]间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一类来源于发育早期中胚层的多能干细胞，是目前研究最多、最重要的成体干细胞之一。MSCs广泛存在于全身多种组织中，并可在体外培养扩增，可在特定条件下分化为包括神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞在内的多种细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能。与其他来源的MSCs相比，来源于脐带的MSCs具有采集方便、无伦理争议、免疫原性低、自我更新快、倍增速度稳定和增殖能力强等特点。因此，脐带MSCs适合用于临床研究和应用，是细胞治疗和再生医学的首选。
[0004]根据www.ClinicalTrials.gov网站统计的数据表明，截至2018年10月,全球已注册705项基于MSCs的临床试验,80％以上的临床试验处于临床Ⅰ期和Ⅱ期,15％左右处于临床Ⅲ期阶段。目前的实验结果表明：MSCs用于多种疾病的治疗是安全和有效的,这些疾病类型包括移植物抗宿主病、脊髓损伤、自身免疫性疾病、心血管疾病、骨及软骨损伤修复、克罗恩病、糖尿病及其并发症等。目前,全球已有11种间充质干细胞药物获批用于上述疾病的临床治疗；然而,MSCs在疾病治疗过程中发挥作用的机制尚不明确,仍需深入的研究和探索。
[0005]大量的证据表明，间充质干细胞(MSC)可以通过旁分泌或自分泌发挥治疗作用，其疗效与血管生成、免疫调节及细胞凋亡有关。MSC分泌组即MSC所分泌的生物活性分子的总和，包括细胞因子、趋化因子和生长因子等多种活性成分，对损伤组织的修复、再生及功能恢复等许多生理过程具有调控作用。在创伤治疗领域，基于MSC分泌组研制的制剂极有可能成为替代MSC治疗的新疗法，具有广阔的发展前景(王强等，间充质干细胞分泌组:创伤愈合的替代疗法，中国生物工程杂志2017,Vol.37Issue(4):104
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109)，然而目前基于间充质干细胞(MSC)分泌肽的研究仍处于比较初级的阶段，目前的研发成果难以满足消费者的多样化需求。此外，目前关于MSC分泌组正式用于临床之前，还需要更多的体内实验和体外实验，获得商业化前景更好的生物活性肽。

技术实现思路

[0006]基于以上现有技术的不足，本申请专利技术人通过收集细胞培养液，通过30kD超滤后送质谱检测，从质谱数据中获得多肽后进行筛选。我们从MSC分泌物中筛选获得一系列多肽，并进行了细胞学实验进行功能验证。获得了具有显著抗衰老、抗氧化以及抗炎症反应多重功效的生物活性肽。本专利技术的目的在于提供一种生物活性多肽及其制备方法和应用。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：本专利技术第一方面，提供一种生物活性多肽LQ
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17，其氨基酸序列为
LSDQVPDTESETXILLQ,X选自K或R。本专利技术第二方面，提供了所述生物活性多肽LQ
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17的制备方法，可以通过基因工程的方法人工合成，可以从细胞中通过分离纯化的方法直接获得，更直接通过化学合成制备。本专利技术第三方面，提供了所述生物活性多肽LQ
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17在制备具有抗炎功能的食品、保健品、药物或化妆品中的应用。本专利技术第四方面，提供了所述生物活性多肽LQ
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17在制备具有抗衰老功能的食品、保健品或药物中的应用。本专利技术第五方面，提供了所述生物活性多肽LQ
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17在制备具有抗氧化功能的食品、保健品或药物中的应用。本专利技术第六方面，提供了一种产品，包括所述生物活性多肽LQ
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17或所述生物活性多肽LQ
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17的衍生物；所述生物活性多肽LQ
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17的衍生物，是指在生物活性多肽LQ
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17的氨基酸侧链基团上、氨基端或羧基端进行羟基化、羧基化、羰基化、甲基化、乙酰化、磷酸化、酯化或糖基化等修饰，得到的多肽衍生物，同时不影响其生物学活性。
附图说明
[0007]图1：CCK
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8/MTT测定细胞相对增值率实验
[0008]图2：LQ
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17和DR
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13稀释后细胞相对增值率实验
[0009]图3：LQ
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17ROS抑制率效果实验
[0010]图4：LQ
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17降低炎症反应效果实验
[0011]图5：LQ
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17对细胞正常代谢活动影响实验
[0012]图6：LQ
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17对细胞UVA损伤的缓解效果实验
[0013]图7：LQ
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17减少细胞由于UVA照射胶原蛋白损伤效果实验
[0014]图8：LQ
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17减少由于紫外照射带来的胶原流失效果实验
具体实施方式
[0015]筛选原理：
[0016]本申请相关多肽的获得采用以下流程：
[0017]以MSC分泌组为实验材料，通过LC
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MS液相色谱质谱联用仪筛选分子量小于30kDa的多肽，结合核糖体图谱技术筛选获得656种生物活性肽，再根据基于机器学习和生物物理的蛋白质
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肽相互作用预测方法(HSM PPI prediction)进一步筛选获得10个生物活性肽，具体如下：NamesequencesDE
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16DGQVINETSQHHDDLEEY
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13EALELRDNDKTRYSK
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13SNPVDILTYVAWKNN
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16NTGGSRYPGQGSPGGNAT
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17APEFAALGESGSSSSKTLQ
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17LSDQVPDTESETKILLQDR
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13DANLEAGNVKETR
DG
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13DEAESLEDLGFKGVR
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16VQELQKHQETAEKTKRTT
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8TDLTKVHT针对上述筛选后的多肽进行下面功能验证实验。实验步骤：细胞活性检测HaCaT细胞复苏传代，镜检细胞状态良好后，收集细胞，调整细胞浓度为0.5
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1.0*105个/mL，按照100μL/孔进行96孔铺板。培养箱培养24h(37℃，5％CO2)后添加一定浓度的受试物，孵育24h。移去上清液，使用CCK8检测试剂盒测定细胞的CCK8值。抗氧化能力检测HaCaT细胞复苏传代，镜检细胞状态良好后，收集细胞。细胞96孔板铺板48h，控制细胞数量0.8
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1.0*104个/孔。去除原有培养基，用PBS洗涤1～2次，添加含10μM H2O2的培养基进行诱导2h后，去培养基，重新添加含有一定浓度受试物的培养基，培养24h。使用ROS检测试剂盒测定细胞内ROS水平。抗炎症能力检测RAW264本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞分泌肽，其序列如下：LSDQVPDTESETXILLQ,X选自K或R。2.权利要求1所述的分泌肽在制备抗衰老功能的食品、化妆品、保健品或药物中的应用。3.权利要求1所述的分泌肽在制备抗紫外损伤功能的食品、化妆品、保健品或药物中的应用。4.权利要求1所述的分泌肽在制...

【专利技术属性】
技术研发人员：李钧翔，傅晓蕾，徐明，夏春鑫，陆益，康思宁，
申请(专利权)人：启迪禾美生物科技嘉兴有限公司，
类型：发明
国别省市：